Tierärztliche Hochschule Hannover - TiHo Bibliothek elib

Veränderungen der Plasmakonzentrationen von S100A8/A9 und Reg3A mit Veränderungen
der Plasmakonzentrationen bereits etablierter Proteine verglichen werden. Bereits zur
Diagnostik von Pankreaserkrankungen etablierte Proteine wurden in der gleichen
Plasmaprobe detektiert wie die S100A8/A9 und Reg3A Proteine, so dass die
Gleichbehandlung der Proben sichergestellt werden konnte. Insgesamt wurden folgende
Probenzahlen erreicht:
Gruppe
Anzahl
Gesund 91
Pankreatitis 49
Adenokarzinom 29
4.8.2 Blutprobengewinnung, Lagerung, Verarbeitung
Die Gewinnung der Blutproben erfolgte in verschiedenen Institutionen nach einheitlicher
standardisierter Arbeitsanweisung (SOP) durch das jeweilige Fachpersonal. S100A8/A9
Proteine kommen hoch konzentriert in neutrophilen Granulozyten im Blut vor und werden bei
Aktivierung und Degranulation ins Blut abgegeben. Eine durch Probenentnahme, Lagerung
und Bearbeitung bedingte Aktivierung der Granulozyten musste verhindert werden, um keine
artifiziellen Proteinkonzentrationen im Blut zu messen. Eine Proteindetektion im Serum ist
demnach nicht zu empfehlen, da bei der Blutgerinnung eine Aktivierung von
Entzündungszellen stattfindet. Außerdem können die hierbei freigesetzten Proteasen die
Zielproteine und Komplexe zersetzen und eine spätere Detektion in erheblichem Umfang
verfälschen. Die Proteaseaktivität kann zudem durch rasche Kühlung der Proben auf 4°C nach
der Probenentnahme gehemmt werden. Zum Auffangen der Proben bei der Blutentnahme
wurden spezielle Gelmonovetten verwendet, die zur Gerinnungshemmung Kalium-EDTA
enthielten und zudem mit einem Gel versehen waren, welches nach Zentrifugation der Proben
Blutzellen und Blutplasma sicher voneinander trennte (K2-EDTA Primavette, KABE
Labortechnik). Außerdem konnten die Blutproben in diesen Monovetten bei -20°C
eingefroren und wiederaufgetaut werden ohne dass sich Blutzellen und Plasma wieder
vermischten.
Es ergab sich folgender Ablauf: Es wurde steril EDTA-Blut gewonnen und bis zur
Zentrifugation bei 4°C kurzfristig gelagert. Nach Angaben der Hersteller wurden die Proben
dann bei 4°C 2500 x g für 15 Minuten zentrifugiert, die Trennung zwischen Plasma und
Blutzellen makroskopisch kontrolliert und dann möglichst schnell eingefroren. Standen keine
EDTA-Gelmonovetten zur Verfügung wurden EDTA-Blutröhrchen verwendet. Die Proben
wurden dann sofort nach Entnahme wie angegeben zentrifugiert und das EDTA-Plasma
unverzüglich vorsichtig abpipettiert und eingefroren.
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