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Tab. 1: Specifications of the filter setups used for fluorescence microscopy Indication Manufacturer Exciter Dichroic mirror Emitter DAPI filter Semrock*1 set BFPA-basic bandpass 390/18 nm longpass 416 nm bandpass 460/ 60 nm exciter, dichroic: FITC filter Olympus*2 bandpass longpass ET bandpass U-MNB2 480/20 nm 500 nm 535/ 30 nm emitter: Chroma*3 Cy3 filter Olympus set bandpass longpass longpass U-MNG 2 540/10 nm 570 nm 590 nm Texas Red filter Chroma set 49008 ET bandpass 560/40 nm ET longpass 585 nm ET bandpass 630/75 nm *1 Semrock, Rochester, New York, USA; *2 Olympus Deutschland GmbH, Hamburg, Germany; *3 Chroma Technology Corp., Bellows Falls, Vermont, USA - 27 -
Tab. 2: Suitability of various techniques to reduce autofluorescence in formalin-fixed pancreatic tissue sections To compare the ability to quench autofluorescence, we applied the Sudan Black B protocol in parallel to other methods as indicated. Using different fluorescence filter setups, the remaining mean autofluorescence level was evaluated by quantitative analysis of identically sized image areas that display comparable exocrine tissue areas rich in acini. For each experiment, mean autofluorescence of control images obtained from specimen without treatment was defined as 100% intensity. The corresponding experiments are described in Fig. 6, 7, and 8. Detected tissue autofluorescence Tissue treatment DAPI filter FITC filter Cy3 filter Sudan Black compared to Toluidine Blue approach no treatment 100.0 % 100.0 % 100.0 % Toluidine Blue treatment 128.8 % 32.1 % 147.3 % Sudan Black + Toluidine Blue 38.2 % 21.6 % 166.5 % Sudan Black treatment 32.0 % 5.1 % 21.6 % Sudan Black compared to cupric sulphate approach no treatment 100.0 % 100.0 % 100.0 % 100 mM cupric sulphate 54.9 % 30.1 % 40.5 % Sudan Black treatment 34.3 % 14.2 % 19.0 % Sudan Black compared to photobleaching approach no treatment 100.0 % 100.0 % 100.0 % UV-irradiation 85.6 % 60.5 % 58.3 % Sudan Black treatment 27.4 % 23.5 % 21.0 % - 28 -
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meinen Eltern
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3.1.2 Material 22 3.1.3 Geräte und
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4.8.4 Bestimmung von CEA, CA19-9 un
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6.3 Schlussfolgerung 110 7. Zusamme
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1.1 Das Pankreas 1.1.1 Physiologie
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zwischen Cathepsin L und B sowie St
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1.2.3 Pankreaserkrankungen bei Tier
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1.3.1 Das C-reaktive Protein (CRP)
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1.3.3 Der S100A8/9-Proteinkomplex C
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Entzündungsgeschehen, Infektionen,
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Matrixproteine Laminin-1 und Fibron
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die Verwendung von Antikörpern, di
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2. Aufgabenstellung Um eine zuverl
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Natriumdihydrogenphosphat (NaH 2 PO
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3.1.2 Material Blutentnahmesystem (
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Zentrifuge (Sorvall RC-5 B, Rotoren
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Elutionspuffer: Harnstoff 4M 4 M Ha
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PBS, phosphate buffered saline 13,7
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3.1.6 Antikörper Zur Detektion bes
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3.1.7 Zelllinien Folgende Zelllinie
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4. Methoden 4.1 Separation von Prot
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4.2.3 Darstellen der antikörpermar
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Die Zellen wurden für weitere Vers
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Meerrettichperoxidase-gekoppelter S
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2010). Einer Subklasse dieser IgY A
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Kupplungspuffer bestehend aus 0,6 M
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Sekundärantikörpern inkubiert. Di
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erhöhte Salzkonzentration sollte d
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die Gruppen „chronische Pankreati
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Alexa Fluor 488, Ziegenantikörper
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Veränderungen der Plasmakonzentrat
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derselben Firma durchgeführt. Dabe
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4.9 Statistische Auswertung Die Erg
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5. Ergebnisse Im Folgenden werden d
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dieser Banden nach Immunpräzipitat
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Bedingungen die Antikörperketten n
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Abb. 4: Immunfluoreszenzmarkierung
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Bildbereich als Leerwert ausgewähl
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Pankreasgewebeschnitte angepasst un
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Wie bereits in Abb. 6 gezeigt, wird
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Abb. 8: Fluoreszenzmarkierung von R
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Abb. 9: Zwei histopathologische Bil
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Abb. 11 A zeigt die Fluoreszenzmark
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Abb. 12: A-C‘ Chronische Pankreat
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In Abb. 14 A wurde S100A9 in Gewebe
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5.4 Ergebnisse der quantitativen Pr
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Abb. 19: ROC-Analyse der S100A8/A9
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signifikant, während sich die Grup
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Abb. 22: ROC-Analyse der Plasmakonz
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6. Diskussion Das Pankreas produzie
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Das zweite Protein, das in dieser A
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ICAM-1 des Endothels erhöht. Fasst
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(Ghavami 2004) beschrieb die Indukt
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Adenokarzinom meistens im Pankreask
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Reg3A für die Aggregation von Bakt
Seite 120 und 121: homogener Tumortypen zur Immunfluor
Seite 122 und 123: spricht dafür, dass man chronische
Seite 124 und 125: Als Indikator der Überexpression v
Seite 126 und 127: detektiert werden. In der Mehrzahl
Seite 128 und 129: 8. Summary Till Erben: “Detection
Seite 130 und 131: ER Fab Fc GAPDH (G/V) h HE HPF HRP
Seite 132 und 133: Puffer RNA ROC ROS rpm RT SB Sens.
Seite 134 und 135: Chelvanayagam DK, Beazley LD (1997)
Seite 136 und 137: Keim V, Iovanna JL, Rohr G, Usadel
Seite 138 und 139: Ni XG, Bai XF, Mao YL, et al. (2005
Seite 140 und 141: Strobel O, Rosow DE, Rakhlin EY, et
Seite 142 und 143: 11. Danksagung Mein herzlicher Dank
Seite 144 und 145: What to do with high autofluorescen
Seite 146 und 147: Introduction: The preservation of t
Seite 148 und 149: erythrocytes (Baschong, et al., 200
Seite 150 und 151: Materials and Methods: Preparation
Seite 152 und 153: carried out by first applying Sudan
Seite 154 und 155: For each set of compared experiment
Seite 156 und 157: was visualized using bright field m
Seite 158 und 159: prior to the application immunolabe
Seite 160 und 161: Discussion: Intrinsic and induced a
Seite 162 und 163: effects on the fluorescent staining
Seite 164 und 165: Toluidine Blue has been described t
Seite 166 und 167: References: Andersson, H., Baechi,
Seite 168 und 169: Rosenow, F., Ossig, R., Thormeyer,
Seite 172 und 173: Figure legends Fig. 1 Localization
Seite 174 und 175: conjugated antibodies reveal mature
Seite 176 und 177: Fig. 2 Fig. 3 - 33 -
Seite 178 und 179: Fig. 6 - 35 -
Seite 180: Fig. 8 - 37 -
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