Tierärztliche Hochschule Hannover - TiHo Bibliothek elib

spricht dafür, dass man chronische Pankreatitis anhand der Reg3A-Konzentration mit höherer
Sicherheit und über einen längeren Zeitpunkt hinweg im Blut detektieren kann, als es anhand
der CRP-Konzentration möglich ist. Wünschenswert wäre auch ein Blutplasmaprofil beider
Proteine mit mehreren Messwerten im Verlauf eines Pankreatitisschubes.
6.3 Schlussfolgerung
S100A8/A9 und Reg3A sind Proteine, die an der Pathogenese der chronischen Pankreatitis
und von Neoplasien des Pankreas beteiligt sind. Auf sensitive Verfahren wie PCR-Analysen
und Western-Blot von Gewebelysaten der Neoplasien kann in vivo nicht zurückgegriffen
werden, weil nicht zwischen Expression und Sekretion der Proteine durch das Pankreas selbst
sowie durch eingewanderte Leukozyten einerseits und neoplastischen Zellen andererseits
unterschieden werden kann. Diese Verfahren kommen nur in vitro für Zellkulturlinien in
Frage. Die Differenzierung und das Sekretionsmuster von Zellkulturlinien kann sich erheblich
von den Verhältnissen in vivo unterscheiden. Die Immunomarkierung zur Lokalisation der
Proteine ist die Methode der Wahl für Gewebeprobeanalysen. Die
Immunfluoreszenzmarkierung ist eine sensitive Methode zur Lokalisation von Proteinen im
Gewebe mit gewissen Einschränkungen bezüglich der Spezifität der Signale. Ist das zur
erwartende Signalmuster und die Intensität bekannt, handelt es sich um eine sichere Methode.
Die in dieser Arbeit verwendeten formalinfixierten, paraffineingebetteten
Pankreasgewebeproben weisen eine erhebliche Eigenfluoreszenz auf. Es konnte gezeigt
werden, dass insbesondere Zymogengranula, Zellkerne der Azinuszellen, Erythrozyten und
straffes Bindegewebe eine hohe Eigenfluoreszenzintensität aufwiesen, die eine sensitive
Fluoreszenzmarkierung von Proteinen in diesen Bereichen unmöglich machte. Die hier
gezeigte Modifikation und Weiterentwicklung der Sudan Schwarz Färbemethode, vor der
spezifischen Fluoreszenzmarkierung angewandt, konnte die hohe Eigenfluoreszenz des
Pankreasparenchyms um 60%-90% je nach Gewebetyp und Filtersatz auf ein gleichmäßiges,
niedriges Level zuverlässig senken. Erst dadurch wurde eine sensitive Proteindetektion durch
Immunfluoreszenzmarkierung im Pankreas möglich. Eine einfache und kostengünstige
Methode, die sich für die Standarddiagnostik von Geweben mit hoher Eigenfluoreszenz
empfiehlt.
Die Immunisierung von Hühnern mit Peptidsequenzen von Säugerproteinen lieferte in dieser
Arbeit hochkonzentrierte, spezifische IgY Antikörper, die durch einfache Zentrifugations- und
Fällungsschritte aus dem Hühnerei präpariert werden konnten. Aus mitgelieferten
Präimmunisierungseiern ließen sich Präimmunseren als Negativkontrolle zum Ausschluss
unspezifischer Wechselwirkungen und Bindungen herstellen. Die Aufreinigung mittels
Protein A oder G ist jedoch aufgrund struktureller Unterschiede zu Säuger IgG nicht möglich.
Obwohl S100A8/A9 physiologischer Weise in neutrophilen Granulozyten und in Monozyten/
Makrophagen vorkommt, ist in dieser Arbeit gezeigt worden, dass
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