TiHo Bibliothek elib - Tierärztliche Hochschule Hannover

Material und Methoden
3.4 Samenverarbeitung und –lagerung
Das Ejakulat aus dem Samenauffangbeutel wurde in einen sterilen, vorgewärmten
Glasmesszylinder (500 ml) umgefüllt und bis zur endgültigen Verdünnung bei
Raumtemperatur stehen gelassen. Vom nativen Sperma wurden die
standardspermatologischen Parameter Volumen, Farbe, Konsistenz, Konzentration,
Spermiengesamtzahl, pH-Wert, Motilität sowie der Anteil morphologisch
abweichender Spermien (MAS) bestimmt. Der Prozentsatz motiler Samenzellen
wurde an einem Phasenkontrastmikroskop mit Heiztisch (+38°C, Fa. Zeiss, Jena) bei
160-facher Vergrößerung geschätzt. Die Bestimmung der Spermienkonzentration
erfolgte nach KRAUSE (1966) mit der Zählkammer „Thoma-neu“. Der pH-Wert wurde
mittels eines pH-Meters (Multiplex 3000/pMX, Fa WTW, Weilheim) bestimmt.
Der Anteil morphologisch abweichender Spermien wurde an einer mit 4%-igem
Formolcitrat fixierten Probe bei 1000-facher Vergrößerung im
Phasenkontrastmikroskop (Fa. Zeiss, Jena) nach KRAUSE (1966) ermittelt. Dazu
wurden jeweils 200 Spermien einer Probe beurteilt. Von jedem Ejakulat wurden vier
Besamungsportionen mit je 100 ml Volumen und einer Konzentration von 20 x 10 6
Spermien / ml in Besamungsflaschen abgefüllt. Nach Entfernung von Restluft und
Verschluss wurden die Flaschen für 90 Minuten bei Raumtemperatur (22°C)
belassen. Danach erfolgte eine Umlagerung der Proben in einen auf +17°C
temperierten Klimaschrank (Fa. Minitüb, Tiefenbach). 60 Minuten später wurden zwei
Besamungsflaschen in einen anderen, auf +10°C eingestellten Klimaschrank
verbracht. Nach Ablauf weiterer 60 Minuten wurden die Proben in einen auf +5°C
temperierten Klimaschrank umgesetzt. Zur Resuspendierung sedimentierter
Spermien wurden die Flaschen täglich vorsichtig geschwenkt. An jedem der beiden
Untersuchungstage wurde eine Flaschepro Lagertemperatur neu geöffnet und die
entsprechende Probenmenge entnommen.
3.5 Spermatologische Parameter
3.5.1 Computer-assistierte Spermienanalyse
3.5.1.1 Gerät und Software
Für die computergestützte Spermienananalyse (CASA) wurde das SpermVision ® -
System (Version 3.5, Fa. Minitüb, Tiefenbach) bestehend aus einem Mikroskop
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