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Literaturübersicht
auch nach verlängerter Inkubation geringe oder keine Antwort (HARRISON u.
GADELLA 2005). Ein Zusammenhang mit dem Auftreten unreifer Spermatozoen,
also Spermien mit Plasmatropfen, ist bereits nachgewiesen (FLESCH et al. 2001),
jedoch werden auch Unterschiede im intrazellulären Gehalt der Komponenten des
Signalübertragungsweges (sAC, Phosphodiesterasen) aufgrund variierender
Expression von Genen diskutiert (HARRISON u. GADELLA 2005, HERRMANN et al.
1999).
Die Kapazitation in vitro findet während der Inkubation bei Körpertemperatur in
speziell konzipierten Medien statt. Diese enthalten u.a. Bikarbonat, welches bei
Eberspermien als essentieller Promotor der Kapazitation identifiziert wurde. Auch
Calcium, Albumin (als Cholesterolakzeptor) und Energielieferanten wie Glukose,
Laktat und Pyruvat wirken als Promotoren (HARRISON et al. 1996, WATSON u.
GREEN 2000, VISCONTI u. KOPF 1998, VADNAIS et al. 2007). Zunächst werden
eine Reihe von aus Nebenhodenschwanz und Seminalplasma stammende Proteine,
sog. Dekapazitationsfaktoren (SUZUKI et al. 2002), von der Spermienoberfläche
entfernt, was in vitro durch Wasch- und Zentrifugationsschritte oder durch
Dichtegradientenzentrifugation -z. B. Percoll- (RODRIGUEZ-MARTINEZ et al. 2007,
ASHWORTH et al. 1995, FLESCH u. GADELLA 2000) simuliert werden kann. Bereits
nach wenigen Sekunden im Kapazitationsmedium kann ein Anstieg an cAMP
nachgewiesen werden, der nach etwa 60 s ein Maximum erreicht (HARRISON u.
MILLER 2000). Die Proteinphosphorylierung ist bereits nach etwa 90 s erstmals
mittels eines Antikörpers detektierbar und folgt einer ähnlichen Kinetik wie der
Anstieg des cAMP (HARRISON 2004). Eine Umverteilung der Phospholipide ist
bereits nach 2 Minuten Inkubation mittels des lipophilen Farbstoffs Merocyanin 540
(M540) nachweisbar, nach 5-minütiger Inkubation wird das Maximum M540-positver
Spermien erreicht. Alternativ sind auch die infolge der Phospholipidumordnung im
äußeren Blatt der Zellmembran exponierten Phospholipide PE (durch Fluoresceinkonjugiertes
Streptavidin/biotinyliertes Ro09-0198) und PS (mittels Fluoresceinkonjugiertem
Annexin V) direkt anfärbbar (GADELLA u. HARRISON 2002). Die
Detektion von PE erreicht nach 20 Minuten ein Maximum, während dies bei PS
deutlich länger dauert, wobei als Ursache ein unterschiedlicher Anfärbemechanismus
vermutet wird (HARRISON u. GADELLA 2005). Die Färbung mit Fluo-3 wird zur
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