TiHo Bibliothek elib - Tierärztliche Hochschule Hannover
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IX. Anhang<br />
Tabelle 8: Durchführung ELISA<br />
Arbeitsschritt Temperatur Menge in µl/Well Zeit<br />
Coaten der<br />
Mikrotiterplatte mit<br />
Sheep Anti-Bovine<br />
IgG1- bzw. IgG2-<br />
Antikörper und<br />
Coating-Puffer<br />
Waschen mit B-Puffer<br />
Inkubation mit<br />
Erstantikörper<br />
Waschen mit B-Puffer<br />
Inkubation mit<br />
Detektionsantikörper<br />
Waschen mit B-Puffer<br />
Inkubation mit<br />
Substratlösung<br />
Stoppen der<br />
Farbreaktion mit<br />
Stopplösung<br />
Messung der<br />
Extinktion bei 450 nm<br />
und 630 nm<br />
Raumtemperatur<br />
(RT) bzw. 4°C<br />
RT<br />
75 µl<br />
5 Waschgänge mit je<br />
300 µl B-Puffer/Well<br />
RT 75 µl<br />
RT<br />
5 Waschgänge mit je<br />
300 µl B-Puffer/Well<br />
RT 75 µl<br />
RT<br />
5 Waschgänge mit je<br />
300 µl B-Puffer/Well<br />
30 min auf dem<br />
Schüttler, dann über<br />
Nacht bei 4°C<br />
4 min<br />
1 h auf dem<br />
Schüttler<br />
4 min<br />
45 min auf dem<br />
Schüttler<br />
4 min<br />
RT 75 µl 15 – 20 min<br />
RT 50 µl<br />
b
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