Mikrobiologische Übung FI, Teil 2b - Mikrobiologie und Weinforschung

Versuchsablauf:
Vor Beginn: Einteilen der Photometer!
1. Ansetzen von M9 Medium (sterile Glaspipetten):
jede Gruppe setzt 50 ml M9 Medium an
Rezept für 1 Liter angegeben, zuerst umrechnen auf 50 ml
alle Reagenzien wurden bereits am Montag angesetzt und autoklaviert
2. Ansetzen der Zuchten E. coli mit Glucose oder Acetat:
Es werden in sterilen Erlenmeyerkolben je eine Zucht mit M9-Medium plus
Glucose und eine Zucht mit M9-Medium plus Acetat angesetzt. Das
Gesamtvolumen jeder Kultur soll 15 ml betragen. Die Endkonzentration an
Glucose bzw. Acetat soll 3 mM sein. Somit muss berechnet werden, wieviel
der jeweiligen Stammlösung (= 0,1 M) im Gesamtvolumen enthalten sein
muss, um auf die erforderlich Endkonzentration zu kommen.
Nach Zugabe von M9-Medium und der C-Quelle (Glucose oder Acetat) wird
der Kolben mit 1 ml Inokulum beimpft. Hierzu werden Vorkulturen (VK) von E.
coli ausgegeben, die über Nacht entweder mit Glucose oder Acetat gezüchtet
wurden. Jeweils die entsprechende VK wird für die Kultur verwendet.
Kulturansätze:
M9-Medium:
Glucose oder Acetat:
Inokulum
gesamt
x ml
x ml (Endkonz. 3 mM)
1 ml
15 ml
3. Beginn der Wachstumskurve:
Unmittelbar nach Ansetzen der Kulturen werden die Proben für die
Wachstumskurve (immer mit sterilen Glaspipetten arbeiten) entnommen.
Wichtig: vor Entnahme Kulturen schwenken, um Inhalt gleichmäßig zu
verteilen.
Von der Glucosezucht werden 1,5 ml steril entnommen. 1 ml davon ist zur
Bestimmung der OD, 0,5 ml davon werden direkt in einem Eppendorf-Cup
abzentrifugiert und der Überstand in ein neues Eppendorf-Cup dekantiert. Der
Überstand wird bis zur Glucosebestimmung eingefroren. Von der Acetatzucht
wird nur 1 ml zur Bestimmung der OD entnommen.
Die Kulturen werden bis zur nächsten Messung bei 37°C unter Schütteln im
Wasserbad inkubiert.
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