Mikrobiologische Übung FI, Teil 2b - Mikrobiologie und Weinforschung
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Versuchsablauf:<br />
Vor Beginn: Einteilen der Photometer!<br />
1. Ansetzen von M9 Medium (sterile Glaspipetten):<br />
jede Gruppe setzt 50 ml M9 Medium an<br />
Rezept für 1 Liter angegeben, zuerst umrechnen auf 50 ml<br />
alle Reagenzien wurden bereits am Montag angesetzt <strong>und</strong> autoklaviert<br />
2. Ansetzen der Zuchten E. coli mit Glucose oder Acetat:<br />
Es werden in sterilen Erlenmeyerkolben je eine Zucht mit M9-Medium plus<br />
Glucose <strong>und</strong> eine Zucht mit M9-Medium plus Acetat angesetzt. Das<br />
Gesamtvolumen jeder Kultur soll 15 ml betragen. Die Endkonzentration an<br />
Glucose bzw. Acetat soll 3 mM sein. Somit muss berechnet werden, wieviel<br />
der jeweiligen Stammlösung (= 0,1 M) im Gesamtvolumen enthalten sein<br />
muss, um auf die erforderlich Endkonzentration zu kommen.<br />
Nach Zugabe von M9-Medium <strong>und</strong> der C-Quelle (Glucose oder Acetat) wird<br />
der Kolben mit 1 ml Inokulum beimpft. Hierzu werden Vorkulturen (VK) von E.<br />
coli ausgegeben, die über Nacht entweder mit Glucose oder Acetat gezüchtet<br />
wurden. Jeweils die entsprechende VK wird für die Kultur verwendet.<br />
Kulturansätze:<br />
M9-Medium:<br />
Glucose oder Acetat:<br />
Inokulum<br />
gesamt<br />
x ml<br />
x ml (Endkonz. 3 mM)<br />
1 ml<br />
15 ml<br />
3. Beginn der Wachstumskurve:<br />
Unmittelbar nach Ansetzen der Kulturen werden die Proben für die<br />
Wachstumskurve (immer mit sterilen Glaspipetten arbeiten) entnommen.<br />
Wichtig: vor Entnahme Kulturen schwenken, um Inhalt gleichmäßig zu<br />
verteilen.<br />
Von der Glucosezucht werden 1,5 ml steril entnommen. 1 ml davon ist zur<br />
Bestimmung der OD, 0,5 ml davon werden direkt in einem Eppendorf-Cup<br />
abzentrifugiert <strong>und</strong> der Überstand in ein neues Eppendorf-Cup dekantiert. Der<br />
Überstand wird bis zur Glucosebestimmung eingefroren. Von der Acetatzucht<br />
wird nur 1 ml zur Bestimmung der OD entnommen.<br />
Die Kulturen werden bis zur nächsten Messung bei 37°C unter Schütteln im<br />
Wasserbad inkubiert.<br />
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