Mikrobiologische Übung FI, Teil 2b - Mikrobiologie und Weinforschung

Weitere Magazine

Empfehlungen

Info

- OD-Messung - Stoffwechsel Acetat und Glucose - Glyoxylatzyklus - Anaplerotische Reaktionen - PEP-Carboxylase - PEP-Carboxykinase 6. Induktion der -Galactosidase - ’ONPG’-Test (Reaktion, Testbedingungen) - lac Operon - Lactosestoffwechsel - Diauxie - Glucoserepression bei E. coli - cyclo AMP, CPR (CAP) Protein - -Galactosidase - Lac-Repressor - Glucose-Phosphotransferasesystem 7. Antibiotika - Wichtige Antibiotikagruppen - -Lactamantibiotika - Resistenzmechanismen - Angriffspunkte Antibiotika 6
5. Wachstum von Escherichia coli mit Glucose oder Acetat Bitte zur Vorbereitung Fragen S. 14 beantworten In dem Experiment wird das aerobe Wachstum von E. coli mit Glucose oder Acetat als Substrat untersucht. Das Wachstum erfolgt in statischer Kultur (Batchkultur) und wird anhand der optischen Dichte verfolgt. Aus den beiden Wachstumskurven sollen verschiedene Wachstumsparameter berechnet werden (Wachstumsrate µ, Verdopplungszeit t d , Zellertrag Y Glc ), die es ermöglichen das Wachstum auf jedem der beiden Substrate zu bewerten und miteinander zu vergleichen. Angewandte Methoden: 1. Trübungsmessung und Bestimmung der optischen Dichte (OD): Anhand von Trübungsmessungen im Photometer kann das Wachstum einer Bakterienkultur verfolgt werden. Hierzu wird jeweils 1 ml der wachsenden Kultur entnommen und in eine Küvette überführt. Im Photometer wird ein Lichtstrahl durch die Bakterienkultur geschickt, dessen Restintensität nach Durchstrahlen der Kultur vom Gerät gemessen wird. Bakterienzellen unterscheiden sich deutlich in ihrem Brechungsindex von dem umgebenden wässrigen Medium. Wegen der resultierenden Lichtstreuung sieht eine Bakterienkultur trüb aus. Bis zu einer bestimmten Zelldichte (OD 578 0,5), bei der sich die Bakterienzellen gegenseitig zu beschatten beginnen, ist die Trübung proportional der Zellzahl. Die Trübung kann im Photometer wie eine Absorption gemessen werden. Häufig wird die OD bei 578 nm, 600 nm oder 650 nm gemessen, weil die meisten Bakterien bei diesen Wellenlängen keine Lichtabsorption besitzen. Die OD wird gegen Luft als Referenz gemessen. Von diesem Wert wird die OD von unbewachsenem Medium (=Blindwert) abgezogen. 2. Glucosebestimmung: Die Bestimmung des Substratverbrauchs während des Wachstums stellt ein wichtiges Instrument zur Charakterisierung des bakteriellen Stoffwechsels dar. In diesem Versuch soll der Glucoseverbrauch von E. coli während des aeroben Wachstums mit Glucose bestimmt werden. Hierzu dient ein enzymatischer Test. Um den Glucoseverbrauch zu bestimmen, werden zu Anfang der Zucht (t 0 ) und am Ende, wenn die Bakterien in der stationären Phase sind, Proben von 0,5 ml Kultur entnommen und abzentrifugiert. Der Überstand kann in den enzymatischen Test eingesetzt werden und der Glucoseverbrauch kann bestimmt werden. Zusammen mit den berechneten Parametern aus der Wachstumskurve kann der Zellertrag Y Glc berechnet werden. Dieser gibt Auskunft darüber wie viel g Zellmasse pro Mol verbrauchtem Substrat gebildet werden können. 7
Seite 1 und 2: Mikrobiologische Übung FI, Teil 2b
Seite 3 und 4: Sicherheitstechnische Richtlinien 1
Seite 5: Versuch 7 (Antibiotika) 11 x 2 Plat
Seite 9 und 10: 4. Messen der Proben: Für die Wach
Seite 11 und 12: 5. Glucosebestimmung mit Glucoseoxi
Seite 13 und 14: Eichgerade Glucosebestimmung Gluc.
Seite 15 und 16: - Berechnung von µ und t d für Gl
Seite 17 und 18: I. Zucht der Bakterien unter induzi
Seite 19 und 20: enötigte Substanzen: - 0,1% SDS au
Seite 21 und 22: Fragen: 1. Welche Aktivität der -G
Seite 23 und 24: 2. Chromatographiestreifen in besch
Seite 25 und 26: Medien und Reagenzien: Standard I
Seite 27: Durchführung 1) Petrischale schrä

Mikrobiologische Übung FI, Teil 2b - Mikrobiologie und Weinforschung

Sie wollen auch ein ePaper? Erhöhen Sie die Reichweite Ihrer Titel.

Template löschen?

Als Template speichern?