Mikrobiologische Übung FI, Teil 2b - Mikrobiologie und Weinforschung

- nach 1,5 h Wachstum: Zuchtansätze in ein vorbereitete Eisbad stecken
- Bestimmung der optischen Dichte von allen drei Kulturen (0,8 ml) sowie des M9-
Medium für den Blindwert bei 578nm (Doppelbestimmungen!)
- Für die Durchführung des -Galactosidase-Tests sollte die OD 578 der Kulturen
nach Abzug des Blindwerts zwischen 0,5 – 0,8 liegen.
- Für die Messung der optischen Dichte müssen Kulturen ab einer OD 578 > 0,5 so
mit Medium verdünnt werden, dass die OD 578 wieder unter 0,5 liegt. Später muss
über den Verdünnungsfaktor die endgültige optische Dichte berechnet werden.
- In den anschließenden -Galactosidase-Test werden dann die unverdünnten
Kulturen eingesetzt.
Wichtig: Für den -Galactosidase-Test von jeder Kultur 1 ml in ein
Eppendorfgefäß füllen, gut beschriften und auf Eis halten!!!
Tabelle zum Eintragen: Bestimmung der optischen Dichte bei 578nm nach 1,5 h Wachstum bei 37°C
Kultur
A) Glucose
OD 578
unverdünnt
OD 578
verdünnt
Verdünnungsfaktor
Blindwert OD578
B) Lactose
C) Glucose/Lactose
II. -Galactosidase-Bestimmung mit ONPG (o-Nitrophenylgalactosid)
Lösungen:
- Reaktionspuffer (nicht autoklavieren, Lagerung bei 4°C): 0,1M KP i pH 7,0
10 mM KCl
1 mM MgCl 2
am Versuchstag pro Gruppe benötigtes Volumen (+ Reserve) des
Reaktionspuffers für alle Testansätze berechnen, Puffer entnehmen und mit 2,7
ml/l 2-Mercaptoethanol versetzen (im Abzug!)
Reaktionspuffer + Mercaptoethanol = -Gal-Puffer
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