Mikrobiologische Übung FI, Teil 2b - Mikrobiologie und Weinforschung
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- nach 1,5 h Wachstum: Zuchtansätze in ein vorbereitete Eisbad stecken<br />
- Bestimmung der optischen Dichte von allen drei Kulturen (0,8 ml) sowie des M9-<br />
Medium für den Blindwert bei 578nm (Doppelbestimmungen!)<br />
- Für die Durchführung des -Galactosidase-Tests sollte die OD 578 der Kulturen<br />
nach Abzug des Blindwerts zwischen 0,5 – 0,8 liegen.<br />
- Für die Messung der optischen Dichte müssen Kulturen ab einer OD 578 > 0,5 so<br />
mit Medium verdünnt werden, dass die OD 578 wieder unter 0,5 liegt. Später muss<br />
über den Verdünnungsfaktor die endgültige optische Dichte berechnet werden.<br />
- In den anschließenden -Galactosidase-Test werden dann die unverdünnten<br />
Kulturen eingesetzt.<br />
Wichtig: Für den -Galactosidase-Test von jeder Kultur 1 ml in ein<br />
Eppendorfgefäß füllen, gut beschriften <strong>und</strong> auf Eis halten!!!<br />
Tabelle zum Eintragen: Bestimmung der optischen Dichte bei 578nm nach 1,5 h Wachstum bei 37°C<br />
Kultur<br />
A) Glucose<br />
OD 578<br />
unverdünnt<br />
OD 578<br />
verdünnt<br />
Verdünnungsfaktor<br />
Blindwert OD578<br />
B) Lactose<br />
C) Glucose/Lactose<br />
II. -Galactosidase-Bestimmung mit ONPG (o-Nitrophenylgalactosid)<br />
Lösungen:<br />
- Reaktionspuffer (nicht autoklavieren, Lagerung bei 4°C): 0,1M KP i pH 7,0<br />
10 mM KCl<br />
1 mM MgCl 2<br />
am Versuchstag pro Gruppe benötigtes Volumen (+ Reserve) des<br />
Reaktionspuffers für alle Testansätze berechnen, Puffer entnehmen <strong>und</strong> mit 2,7<br />
ml/l 2-Mercaptoethanol versetzen (im Abzug!)<br />
Reaktionspuffer + Mercaptoethanol = -Gal-Puffer<br />
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