Mikrobiologische Übung FI, Teil 2b - Mikrobiologie und Weinforschung

Praktische Durchführung:
Die Glucosebestimmung wird in Eppendorf-Cups durchgeführt.
Pipettierschema:
Start der Reaktion:
1 ml Glucosereagenz
50 µl Probe*
10 µl GOD
mischen und im Wasserbad bei 37°C 30 Minuten inkubieren.
Die Ansätze werden anschließend direkt im Photometer bei 436 nm gegen Luft
immer in derselben Küvette gemessen.
*Probe: entweder 50 µl t 0 oder t end
Glucosestandard-Verdünnung.
der Glucosezucht oder 50 µl einer
Eichgerade:
Zuerst wird eine Eichgerade erstellt mit bekannten Glucosekonzentrationen von
0-500 µM. Diese Eichgerade dient dazu zu zeigen, dass in diesem Bereich die
Glucosekonzentration proportional zu der gemessenen Extinktion bei 436 nm ist.
Mit dem hergestellten Glucosestandard (s. Lösungen S. 11) wird eine
Glucoseverdünnungsreihe erstellt, die anschließend als Probe in den Test eingesetzt
wird (Doppelbestimmung).
Glucosekonzentration 0 µM 100 µM 200 µM 300 µM 400 µM 500µM
µl Glucosestandard
(500 µM)
µl H 2 O
Es wird jeweils 1 ml der entsprechenden Verdünnung (0-500 µM Glucose) angesetzt.
Die Messwerte werden in die Tabelle auf Seite 13 eingetragen.
Aus den erhaltenen Werten werden für alle Konzentrationen Mittelwerte gebildet und
der Blindwert (= 0 µM Glucose) abgezogen. Die Eichgerade soll im Anschluss auf
Millimeterpapier gezeichnet werden.
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