Mikrobiologische Übung FI, Teil 2b - Mikrobiologie und Weinforschung

5. Glucosebestimmung mit Glucoseoxidase (GOD) und Peroxidase (POD)
(Bergmeyer, Methoden der enzymatischen Analyse)
jeweils 1 Praktikant aus jeder Gruppe verantwortlich
Lösungen:
NaP i -Puffer
700 mg Na 2 HPO 4 x 2 H 2 O
360 mg NaH 2 PO 4 x H 2 O
auf 50 ml auffüllen (davon 500 µl für GOD abzweigen)
Glucoseoxidase (GOD)
Menge reicht für 50 Tests, haltbar bei 4°C
400 Units GOD (aus Schimmelpilz, Grad II) in 500 µl NaP i -Puffer
lösen (Lösung 2-3 Tage stabil bei 4°C)
Glucosereagenz
50 ml NaP i -Puffer
200 Units POD (aus Meerettich, Grad II)
25 mg ABTS, Diammoniumsalz
5 Tropfen Chloroform
Glucosestandard 500 µM Glucose x H 2 O in 500 ml Messkolben ansetzen
die benötigte Glucosemenge muss über das Molekulargewicht
(s. Verpackung) berechnet werden
Testprinzip:
In diesem enzymatischen Test wird die Glucosekonzentration photometrisch
bestimmt. Dabei wird Glucose durch die Glucoseoxidase oxidiert. Das hierbei
gebildete H 2 O 2 oxidiert in der Folgereaktion ABTS. Das oxidierte ABTS ist gefärbt
und absorbiert im Photometer bei 436 nm. Da pro Mol Glucose auch 1 Mol ABTS
oxidiert und somit bestimmbar wird, ist die gemessen Absorption proportional zum
Glucosegehalt der Lösung.
GOD
Glucose + O 2 + H 2 O Gluconat + H 2 O 2
POD
H 2 O 2 + ABTS red ABTS ox + 2 H 2 O
GOD:
POD:
ABTS:
Glucoseoxidase
Peroxidase
2,2’-Azino-di-3-ethylbenzthiazolinsulfonat
11