Tierärztliche Hochschule Hannover Einfluss unterschiedlicher ...

A.5 Medien für die RT-qPCR
Tabelle A.30: Lysis/Bindingpuffer
Substanz Konzentration pH
Tris-HCL 100 mM 7,5
LiCl
500 mM
EDTA 10 mM 8,0
LiDS
1 %ig
DTT(Dithiothreitol) 5 mM
Tabelle A.31: Waschpuffer A
Substanz Konzentration pH
Tris-HCL 10 mM 7,5
LiCl 0,15 mM
EDTA 1 mM 8,0
LiDS 1 %ig
Tabelle A.32: Waschpuffer B
Substanz Konzentration pH
Tris-HCL 10 mM 7,5
LiCl 0,15 mM
EDTA 1 mM 8,0
Tabelle A.33: Zusammensetzung des Mastermixes für die Reverse Transkription
Komponente Volumen Endkonzentration
10 x PCR Puffer 2 µl 1 x
MgCl 2 (50 mM) 2 µl 5 mM
dNTPS (10mM) 2 µl 1 mM
Hexamer Primer (50 µM) 1 µl 2,5 µM
RNase Inhibitor (20IE/µl) 1 µl 20 U
Reverse Transkriptase (50IE/µl) 1 µl 50 U
Tabelle A.34: Zusammensetzung des Reaktionsgemisches für die RT-qPCR
Komponente Konzentration einfacher Ansatz
Master-Mix RT-qPCR 10 µl
Primer Forward 0,2 µM 0,4 µl
Primer Reverse 0,2 µM 0,4 µl
cDNA 2-0,25 µl
H 2 0 ad 20 µl
79