TiHo Bibliothek elib - Tierärztliche Hochschule Hannover

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4.4.7 PCR (Polymerase Chain Reaction) des Impfvirus
Aufgrund technischer Schwierigkeiten beim Nachweis von replizierendem rHVT-ND
wurde im zweiten Versuch parallel zum rHVT-Plaquetest eine HVT-PCR
durchgeführt. HVT-DNA wurde aus Milzzellen isoliert, welche am 36. Tag nach
Schlupf entnommen wurden. Hierbei wurde nach Angaben des Herstellers
vorgegangen. Zur Isolation wurde das InnuPrep DNA Minikit (Analytik Jena Bio
Solutions, Lot-Nr.: 016-08) benutzt. Die Primer wurden nach Becker et al. (1992)
modifiziert (BECKER et al. 1992) und mithilfe des Programms Primer3 (v. 0.4.0;
http://primer3.wi.mit.edu/) erstellt.
Forward Primer: CGTCGATACCCATCATATCC (20 mer);
Reverse Primer: ACATTCTTTTCGTTGGCGTGGTAT (24mer);
Die Herstellung und Lieferung der Primer erfolgte durch die Firma Eurofins MWG
Operon (Ebersberg; Germany). Das Takara ExTaq PCR Kit® (Takara BioInc, Japan,
Lot-Nr.: KA5501EA) wurde mit folgenden Mastermixkonzentrationen eingesetzt: