TiHo Bibliothek elib - Tierärztliche Hochschule Hannover

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Einzelwerten/Tier wurde ein Mittelwert pro Gruppe gebildet, welche miteinander
verglichen wurden.
Bei Zellpopulationsbestimmungen in Konjunktiva-assoziertem lymphoiden Gewebe
und in der Zäkaltonsille wurde aufgrund der hohen Zellzahlen ein alternatives
Scoring System angewandt. Dieses basierte auf dem Score von McDonald und
Pilgram (MCDONALD u. PILGRAM 1999), bei dem bei 200-facher mikroskopischer
Vergrößerung Zellvorkommen prozentual eingeschätzt wurden: Score 0 = 0% der
Zellen im mikroskopischen Sichtfeld sind bräunlich gefärbt; Score 1 = weniger als 25
% der Zellen im mikroskopischen Sichtfeld sind bräunlich gefärbt; Score 2 = weniger
als 50 % der Zellen im mikroskopischen Sichtfeld sind bräunlich gefärbt; Score 3 =
mehr als 50 % der Zellen im mikroskopischen Sichtfeld sind bräunlich gefärbt.
4.4.5 Virus-RNA Isolierung
Gesamt-RNA wurde von Tracheal- und Kloakal-Tupferproben mit peqGOLD
TriFast (peqlab, Erlangen, Deutschland) entsprechend den Angaben des
Herstellers isoliert. Die RNA in den Tupferproben wurde mit Chloroform, Isopropanol
und Ethanol (75%) isoliert und anschließend in 30 µl RNAse/DNAse-freiem Wasser
gelöst. Die Probe wurde daraufhin mit einem Spektrophotometer auf den RNA-
Gehalt und ihre Qualität untersucht und entweder bei -80°C gelagert oder direkt
untersucht.
4.4.6 Nachweis von APMV-1 mittels qRT-PCR (quantitative Reverse
Transcription Polymerase Chain Reaction)
Vermehrungsfähige und inaktive Viruspartikel des APMV-1 können mit der qRT-PCR
nachgewiesen werden. Bei der APMV-1 One-Step Real-Time PCR wird eine
Gensequenz auf dem Polymerase L-Gen über mehrere Vervielfältigungszyklen
amplifiziert und durch Fluoreszenzfärbung sichtbar gemacht. Hierbei ist ein
qualitativer und quantitativer Nachweis des Virus möglich. Der Cycle threshold (Ct)
gibt den Zyklus an, bei dem die Fluoreszenz signifikant über das