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Tabelle 3: Antikörper zur immunhistochemischen Detektion von verschiedenen
Immunzellpopulationen
Antikörper Cat.No.* µg/ml
Mouse Anti-Chicken CD 4 8210-01 1
Mouse Anti-Chicken CD 8β 8280-01 1
Mouse Anti-Chicken BU-1 8395-01 1
Mouse Anti-Chicken KUL01 8420-01 1
Mouse Anti-Chicken IgA 8330-01 0,05
(*=Cat.No., Southern Biotechnology Associates, Inc. (Alabama, USA))
Alle Antikörper außer Mouse Anti-Chicken IgA wurden 1:500 in PBS verdünnt und
mit Biotin versetzt (Vectastain ®, Vector Laboratories, Inc., Burlingame. USA). Mouse
Anti-Chicken IgA wurde 1:10000 in PBS verdünnt. Nach einem Waschschritt wurde
der biotinylierte Zweitantikörper für 30 Minuten bei Raumtemperatur auf die
Objektträger gegeben. Als Zweitantikörper wurde ein biotinylierter Antikörper aus
dem Vectastain ABC Kit (Mouse IgG, PK-6102, Vectastain ®, Vector Laboratories,
Inc., Burlingame, USA) verwendet. Danach wurde das ABC Konjugat für 30 Minunten
auf die Schnitte gegeben. Dieses besteht aus einem Avidin und biotinyliertem
Enzymkomplex (Horseradisch Peroxidase=HRP), welcher sich durch die hohe
Affinität von Avidin zu Biotin irreversibel an den Zweitantikörper bindet. Die Färbung
erfolgte mittels DAB (3,3'-Diaminobenzidin) als Enzymsubstrat, welches nach
Reaktion mit der HRP des Enzym-Avidinkomplexes ein braunes Endprodukt erzeugt
und somit positive Zellen braun darstellt. Anschließend wurde noch eine
Gegenfärbung mit Hämatoxylin für 10 Sekunden durchgeführt und die Schnitte unter
fließendem Wasser für zwei Minuten gespült. Dann wurden die Objektträger mit drei
bis vier Tropfen eines wässrigen Eindeckmittels (Aquatex ®, Merck KGaA,
Darmstadt, Deutschland) und Deckgläßchen (24 x 60 Millimeter) abgedeckt und für
einen Tag zum Trocknen bei Raumtemperatur belassen.
Die positiv markierten Zellen wurden bei 400-facher Vergrößerung in drei bis fünf
Feldern mikroskopisch ausgezählt und ein Mittelwert pro Tier gebildet. Aus den