TiHo Bibliothek elib - Tierärztliche Hochschule Hannover

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aufsteigenden Alkoholreihe (Isopropanol 50 %, 70 %, 80%, 90%, 100% für jeweils 60
min 2x, Isopropanol/Azeton 1:1 für 90 min, Aceton für 60 min, 2x) entwässert und
anschließend in Paraffinblöcke eingebettet. Die Paraffinblöcke wurden über Nacht im
Kühlschrank (4°C) gelagert und anschließend mit einem Mikrotom (Model 2040
Autocut (Reichert-Jung, Cambridge Instrument GmbH, Nußloch) mit einer
Schnittdicke von 2 µm geschnitten. Die Gewebeschnitte wurden in ein 40°C warmes
Wasserbad überführt und anschließend von dort aus auf mit Serum-Glycerin
(Waldeck GmbH, Division Chroma, Münster, Deutschland) beschichtete
Glasobjektträger verbracht. Im Anschluss erfolgte eine Trocknung für eine Stunde bei
Raumtemperatur. Anschließend wurden die Schnitte mittels Hämatoxylin-Eosin
(H&E) gefärbt. Hierbei wurde zuerst eine Deparaffinierung und Rehydratation der
Schnitte mit absteigender Alkoholreihe durchgeführt. Anschließend wurden die
Objektträger in Hämatoxylin- und Eosin (1%)- Lösungen gefärbt. Die Schnitte wurden
danach mit DePEx Mounting Medium (BDH Laboratory Supplies, England)
überschichtet und mit einem Deckglas abgedeckt. Danach erfolgte die
mikroskopische Begutachtung und wurde nach folgendem Score, angelehnt an die
histopathologischen Veränderung nach NDV-Infektion (CATTOLI et al. 2011),
bewertet: Score 0 - keine Veränderung; Score 1 - milde lymphozytäre oder
heterophilzellige Infiltrationen in Epithelschicht oder lamina propria und ein oder
mehrere lymphoide Zellansammlungen; Score 2 - massive Infiltration von
Entzündungszellen in Epithelschicht oder Lamina propria, fokal oder diffus,
Hypertrophie von mukösen Drüsen; Score 3 - massive fokale und diffuse Infiltration
von Entzündungszellen im Epithel oder in der Lamina propria und Ablösung des
zilientragenden Epithels.
4.4.4 Immunhistochemische Untersuchungen
Hardersche Drüse, Konjunktiva, Trachea, Lunge und Zäkaltonsille wurden den
Tieren während der Sektion entnommen, mit Einbettmedium für Gefrierschnitte
(Jung, Leica Microsystems Nussloch GmBH, Heidelberg, Batch-Nr.:03655539) auf
herkömmlichem Papier fixiert, in flüssigem Stickstoff gefroren und anschließend bei