TiHo Bibliothek elib - Tierärztliche Hochschule Hannover
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VI 2.2.6 Einschätzen des Impferfolgs ................................................................. 22 2.2.7 Rekombinante Impfstoffe ...................................................................... 23 2.3 Immunität gegen die Newcastle Disease ....................................................... 26 2.3.1 Angeborene Immunmechanismen ........................................................ 26 2.3.2 Zellvermittelte Immunität ....................................................................... 27 2.3.3 Humorale Immunität .............................................................................. 27 2.3.4 Maternal vermittelte Immunität .............................................................. 28 2.3.5 Lokale Immunität ................................................................................... 28 3 Fragestellung der eigenen Untersuchung .......................................................... 33 4 Material und Methoden ...................................................................................... 35 4.1 Tiere ............................................................................................................... 35 4.2 Impfstoffe ....................................................................................................... 35 4.2.1 Titration des Impfvirus ........................................................................... 36 4.3 Versuchsaufbau ............................................................................................. 38 4.4 Untersuchungsmethoden ............................................................................... 42 4.4.1 Serologische Untersuchungen .............................................................. 42 4.4.2 Klinischer Score .................................................................................... 43 4.4.3 Histologische Untersuchungen ............................................................. 43 4.4.4 Immunhistochemische Untersuchungen ............................................... 44 4.4.5 Virus-RNA Isolierung ............................................................................ 47 4.4.6 Nachweis von APMV-1 mittels qRT-PCR (quantitative Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction) ........................................... 47 4.4.7 PCR (Polymerase Chain Reaction) des Impfvirus ................................ 49 4.4.8 Zellzählung............................................................................................ 50 4.4.9 Durchflusszytometrie ............................................................................ 50 4.5 Statistische Analyse ....................................................................................... 51 5 Ergebnisse ......................................................................................................... 53 5.1 Titration des Impfvirus .................................................................................... 53 5.2 Nachweis des rHVT-ND nach Impfung durch Anzucht in vitro (Exp. 1) oder mittels Polymerase Kettenreaktion (Exp. 2) ................................................... 53
VII 5.3 Immunhistochemische Untersuchungen von Immunzellpopulationen ........... 54 5.4 Immunzellpopulationen 5 Tage nach der Impfung bei Broilern ...................... 55 5.5 Immunzellpopulationen 10 Tage nach der Impfung bei SPF- Hühnern und Broilern ........................................................................................................... 61 5.6 Virusdetektion von Tracheal- und Kloakaltupfern durch qRT-PCR ................ 72 5.6.1 Virusanzucht im embryonierten Hühnerei ............................................. 73 5.7 Serologische Untersuchungen - humorale Immunantwort ............................. 76 5.8 Durchflusszytometrische Untersuchungen ..................................................... 82 6 Diskussion .......................................................................................................... 86 6.1 Zielsetzung der Studie ................................................................................... 86 6.2 Klinisches Bild nach Impfung mit rHVT-ND und ND-Lebendimpfstoff sowie nach APMV-1 Stamm LaSota Belastungsinfektion ........................................ 87 6.3 Pathologische und histopathologische Läsionen nach ND-Impfung .............. 88 6.4 Einfluss von rHVT-ND und dem ND-Lebendimpfstoff auf Immunparameter .. 89 6.4.1 Systemische Immunparameter ............................................................. 89 6.4.2 Lokale Immunität ................................................................................... 93 6.5 Virusausscheidung....................................................................................... 100 6.6 Vergleich von SPF-Hühnern und Broilern .................................................... 102 6.7 Weiterführende Untersuchungen ................................................................. 103 6.8 Fazit ............................................................................................................. 104 7 Zusammenfassung........................................................................................... 105 8 Summary .......................................................................................................... 107 9 Literaturverzeichnis .......................................................................................... 109 10 Anhang ........................................................................................................ 133 10.1 SPF-Liste ................................................................................................... 133 10.2 Lösungen, Puffer, Medien ......................................................................... 134 11 Danksagung ................................................................................................. 138
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2.2.7 Rekombinante Impfstoffe ...................................................................... 23<br />
2.3 Immunität gegen die Newcastle Disease ....................................................... 26<br />
2.3.1 Angeborene Immunmechanismen ........................................................ 26<br />
2.3.2 Zellvermittelte Immunität ....................................................................... 27<br />
2.3.3 Humorale Immunität .............................................................................. 27<br />
2.3.4 Maternal vermittelte Immunität .............................................................. 28<br />
2.3.5 Lokale Immunität ................................................................................... 28<br />
3 Fragestellung der eigenen Untersuchung .......................................................... 33<br />
4 Material und Methoden ...................................................................................... 35<br />
4.1 Tiere ............................................................................................................... 35<br />
4.2 Impfstoffe ....................................................................................................... 35<br />
4.2.1 Titration des Impfvirus ........................................................................... 36<br />
4.3 Versuchsaufbau ............................................................................................. 38<br />
4.4 Untersuchungsmethoden ............................................................................... 42<br />
4.4.1 Serologische Untersuchungen .............................................................. 42<br />
4.4.2 Klinischer Score .................................................................................... 43<br />
4.4.3 Histologische Untersuchungen ............................................................. 43<br />
4.4.4 Immunhistochemische Untersuchungen ............................................... 44<br />
4.4.5 Virus-RNA Isolierung ............................................................................ 47<br />
4.4.6 Nachweis von APMV-1 mittels qRT-PCR (quantitative Reverse<br />
Transcription Polymerase Chain Reaction) ........................................... 47<br />
4.4.7 PCR (Polymerase Chain Reaction) des Impfvirus ................................ 49<br />
4.4.8 Zellzählung............................................................................................ 50<br />
4.4.9 Durchflusszytometrie ............................................................................ 50<br />
4.5 Statistische Analyse ....................................................................................... 51<br />
5 Ergebnisse ......................................................................................................... 53<br />
5.1 Titration des Impfvirus .................................................................................... 53<br />
5.2 Nachweis des rHVT-ND nach Impfung durch Anzucht in vitro (Exp. 1) oder<br />
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