TiHo Bibliothek elib - Tierärztliche Hochschule Hannover

43
4.4.1.2 Hämagglutinations-Hemmungstest
Durch die Neutralisation der Viren durch NDV-Antikörper kann die durch APMV-1
verursachte Erythrozytenagglutination gehemmt werden und somit der NDV-
Antikörpergehalt in Seren nach Erstellen einer Verdünnungsreihe (log 2-Verdünnung)
bestimmt werden. Der Hämagglutinations-Hemmungstest (HAH-Test) wurde nach
den Richtlinien der Welttiergesundheitsorganisation (OIE 2008) in Mikrotiterplatten
mit rundem Boden durchgeführt. Anstelle von phosphatgepufferter Salzlösung wurde
sterile Kochsalzlösung (9 g/L) verwendet. Der HAH-Test wurde mit einer
Antigenkonzentration von vier hämagglutinierenden Einheiten (HAU) des APMV-1
Stammes LaSota durchgeführt. Die Serumproben wurden mit der Antigenlösung in
Kochsalzlösung 30 Minuten bei Raumtemperatur inkubiert. Anschließend wurde eine
1%ige Hühnererythrozyten-Suspension für 30 Minuten in jede Reaktionsvertiefung
gegeben. Als Hemmtiter gilt die höchste Antiserumverdünnung, die vier
Viruseinheiten vollständig hemmt. Die Nummer der letzten Vertiefung, bei dem eine
Hämagglutinationshemmung vorliegt, ist die Titerkennzahl. Der Titer ist dargestellt
als 2er Potenz.
4.4.2 Klinischer Score
Der klinische Score für respiratorische klinische Symptome wurde nach dem Scoring
System von Jones et al. (JONES et al. 1992) durchgeführt. Er wurde jeden Tag für
10 Tage nach der Belastungsinfektion erhoben. Score 0 = keine klinischen
Symptome; Score 1 = klares nasales Exsudat; Score 2 = trübes nasales Exsudat;
Score 3 = Schwellung des Sinus Infraorbitalis.
4.4.3 Histologische Untersuchungen
Histologische Proben von Harderscher Drüse, Trachea und Lunge wurden sofort
nach ihrer Entnahme in 4 %igem gepuffertem Formalin fixiert, in Paraffinwachs
eingebettet und nach herkömmlichen Methoden bearbeitet
(DUMRONGSOONTORNCHAI 1999). Hierbei wurden die Proben in einer