TiHo Bibliothek elib - Tierärztliche Hochschule Hannover

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Milliliter frisches Erhaltungsmedium (1% FCS, 37°C) enthielten, gegeben. Die Zellen
wurden drei Tage unter warmen Erhaltungsmedium (37° C, 1% FCS) belassen und
jeden Tag kontrolliert. Nach drei Tagen wurden die Plaques nach einstündiger
Ethanol-Fixierung (96%) und 24-stündiger Raumtemperatur-Lufttrocknung mit einem
monoklonalen Antikörper gegen das F-Protein (MCA NDV-F, lot. MAB040226DM,
exp. MAB-0320-102D, MSD Tiergesundheit) und einem fluoreszierenden
Zweitantikörper (Alexa Fluor ® 488 goat anti-mouse IgG (H+L), Lot: 861163,
Invitrogen TM Eugene, Oregon, USA) sichtbar gemacht. Anschließend wurde unter
einem Inversmikroskop bei 25-facher Vergrößerung ausgezählt (Inverses Mikroskop
IM 35, Carl Zeiss, Göttingen, Deutschland). Zytopathische Effekte (Plaques) wurden
mikroskopisch detektiert und die Anzahl der positiven immunfluoreszierenden
Plaques gezählt. Die positiven Plaques wurden drei Tage nach Inkubation gezählt,
die Durchschnittsanzahl der Plaque Forming Units (PFU) pro Tier und pro Tiergruppe
angegeben (Daten nicht gezeigt).
4.3 Versuchsaufbau
Es wurden zwei Tierversuche mit SPF-Hühnern und kommerziellen Broilern
durchgeführt (Abbildungen 1 und 2). Im ersten Versuch wurden Eier von SPF-
Hühnern in der Klinik für Geflügel in Hannover ausgebrütet. Die Tiere wurden per
Zufall in vier verschiedene Gruppen eingeteilt und gegen die Newcastle Disease
geimpft. Die erste Gruppe wurde ungeimpft als Kontrollgruppe belassen. Der dritten
und vierten Gruppe wurde die ND-Lebendvakzine per Augentropfen verabreicht.
rHVT-ND wurde der zweiten sowie vierten Gruppe subkutan im Nackenbereich
appliziert. Am 10. und 35. Tag nach der Impfung wurden 7 Tiere pro Gruppe durch
Kopfschlag betäubt, durch Blutentzug getötet und anschließend seziert. HVT wurde
am 10. Tag nach Impfung durch Co-Kultivierung der Milzellen in
Hühnerembryofibroblasten detektiert. Hardersche Drüse, Konjunktiva, Trachea,
Lunge und Zäkaltonsille wurden zur immunhistochemischen Analyse auf
verschiedene Immunzellpopulationen entnommen. Ebenfalls wurden Proben zur
histologischen Untersuchung von Lunge, Trachea und Harderschen Drüsen am 10.