TiHo Bibliothek elib - Tierärztliche Hochschule Hannover

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Tiergesundheit) verdünnt. Ein Tropfen entsprach einer Impfdosis von mind. 6,0 log 10
Embryo-infektiöse Dosis 50 % (EID 50 ). Der APMV-1 Stamm LaSota (Charge: A002D;
Code:027908, MSD Tiergesundheit) fungierte als Belastungsinfektionsvirus und
wurde ebenfalls mit einem wässrigen Lösungsmittel (für 1000 Dosen, Diluent Oculo
Nasal, B408A01, Verfallsdatum 06-2013, (MSD Tiergesundheit) verdünnt (1 Dosis:
mind. 6,0 log 10 EID 50 ).
Im zweiten Versuch wurde rHVT-ND (Innovax®-ND, 4000 Dosen, Lot-Nr.: 91790024,
Verfallsdatum: 01-2013 (MSD Tiergesundheit) mit 6945 PFU/Dose (200 µl)
eingesetzt. Der Titrationsstandard HVT CA 126 (Nobilis® Marexine CA 126, 1000
Dosen, Lot-Nr.: A267B, MSD Tiergesundheit) wurde als Kontrolle bei der rHVT-ND-
Impftitrierung verwendet. Der APMV-1 Stamm Lasota (Nobilis® ND LaSota, 1000
doses, Lot-Nr.: A002D, MSD Tiergesundheit) fungierte mit einer Dosis von mind. 6,0
log 10 EID 50 als Belastungsvirus. ND Clone 30 (Nobilis® ND Clone 30, 1000 Dosen,
MSD Tiergesundheit) wurde mit einer Dosis (mind. 6,0 log 10 EID 50 , ein Augentropfen
pro Tier) als Lebendvakzine per Augentropfen verwendet.
4.2.1 Titration des Impfvirus
Zur Bestätigung des Titers und Quantifizierung des Virusgehalts wurde rHVT-ND auf
sekundären Hühnerembryofibroblasten (0,3 -0,4 x 10 6 Zellen/ml, M6B8 (MSD Animal
Health)) Medium (199/F10, MSD Animal Health/Medium+0,1% NPPT (v/v)
(Neomycin, Polymyxin, Pimafucin, Tylosin)) mit 1% bovinem Kälberserum (FCS) als
Erhaltungsmedium und 5% im Nährmedium in Polystyrene Zellkulturplatten (Corning
Cell Culture Dish, 430196, mit 2 mm Zählgitter oder Costar, cat. No. 3060 mit 2mm
Zählgitter) angezüchtet. Der Virusgehalt wurde im Plaquetest nach serienmäßiger
Verdünnung der Ausgangsimpfvirussupension unter einem flüssigen Overlay-
Medium (M6B8 (MSD Animal Health) zweimal konzentriert mit 0,2% NPPT plus
Bactoagar 2,25 % und 5% NaHCO 3 ) bestimmt. 24 Stunden nach der Infektion wurde
das Medium gewechselt und das Agaroverlay für drei Tage hinzugefügt. Die Platten
wurden jeden Tag kontrolliert und bei Ablösen der Fibroblasten sofort für eine Stunde
mit 96% Ethanol fixiert und für 24 Stunden bei Raumtemperatur getrocknet. Jede