Programmreport 2012 - DORIS - Bundesamt für Strahlenschutz

Ergebnisse
TB 01
Thema
Analyse epigenetischer Effekte (microRNAs) in ehemaligen Wismutbeschäftigten
Subject
Analysis of epigenetic effects (microRNAs) in former workers of the SAG/SDAG Wismut
Kennzeichen
3610S10001
Beginn
01.12.2010
Ende
31.05.2012
Fördermittel
EUR 97.210,-
Forschungs- / Auftragnehmer
Institut für Prävention und Arbeitsmedizin der Deutschen Gesetzlichen Unfallversicherung, Institut der
Ruhr-Universität Bochum (IPA)
Projektleitung
Dr. G. Johnen
Prof. Dr. T. Brüning
Fachbetreuung BfS
Dr. M. Gomolka / SG1.1
verantwortlich für den Text
Dr. G. Johnen
Dr. D. G. Weber
1. ZIELSETZUNG
In diesem Vorhaben sollte die Expression von micro-Ribonukleinsäuren (miRNAs) in Blutproben von 60 ehemaligen
strahlenexponierten Uranbergarbeitern der SAG/SDAG Wismut mittels Oligonukleotid-Microarrays
analysiert werden, um mögliche Biomarker einer Strahlenexposition zu identifizieren. Die Blutproben von
hochexponierten (> 750 Working Level Month (WLM)) und niedrigexponierten (< 50 WLM) Probanden stammten
aus dem Projekt „Aufbau einer Bioproben-Bank von ehemaligen Beschäftigten der SAG/SDAG Wismut -
Pilotstudie“ (StSch 3607S04532).
2. EINZELZIELSETZUNG
Folgende Teilaufgaben sollten innerhalb des Projekts bearbeitet werden:
- Herstellung und Austestung von Microarrays für die Analyse von miRNA-Expressionsprofilen;
- Durchführung und Auswertung der Microarray-Experimente. Bestimmung von signifikant veränderten
miRNAs zwischen hoch- und niedrigexponierten Probanden;
- Verifizierung einzelner miRNAs mittels quantitativer Real-Time Polimerase Chain Reaction (qRT-PCR).
3. METHODIK
Für das Screening der Blutproben wurden selbstgespottete Oligonukleotid-Microarrays verwendet. Die Microarray-Technik
erlaubt die parallele, qualitative Bestimmung einer Vielzahl von miRNAs eines Probanden in
einem einzigen Experiment.
Die aus dem Vergleich von hoch- und niedrig-exponierten Probanden erhaltenen miRNA-Expressionsmuster
wurden mit geeigneten Bioinformatik-Verfahren auf signifikant veränderte miRNAs analysiert.
Zur Verifizierung der Microarray-Ergebnisse wurden diese veränderten miRNAs anschließend in Einzelmessungen
mittels qRT-PCR (TaqMan Assays) in allen Proben genauer quantifiziert.
4. DURCHFÜHRUNG
4.1 STUDIENKOLLEKTIV
Aus dem Projekt 3607S04532 wurden 60 männliche Probanden ausgewählt und in 30 Matchingpaare, bestehend
aus jeweils einem hochexponierten (WLM > 750) und einem niedrigexponierten Probanden (WLM < 50),
eingeteilt. Im Rahmen des Projekts wurde die Gesamt-RNA bereits isoliert und in eine Bioprobenbank am Institut
für Prävention und Arbeitsmedizin der Deutschen Gesetzlichen Unfallversicherung, Institut der
Ruhr-Universität Bochum (IPA) eingelagert. Die Bioprobenbank wurde inzwischen an das Bundesamt für
Strahlenschutz (BfS) überführt.
4 Ergebnisse der abgeschlossenen Forschungsvorhaben im Jahr 2012 - TB 01