Programmreport 2012 - DORIS - Bundesamt für Strahlenschutz

2.6 UNTERSUCHUNG DER RET-EXPRESSION AN FÄLLEN DER PILOTSTUDIE MIT VORLIEGEN-
DEN ERGEBNISSEN ZU RET-REARRANGIERUNGEN
Für die Fälle der Pilotstudie sollte die mRNA (messenger RNA)-Expression des RET (eine Rezeptor-Tyrosinkinese)-Gens
bestimmt werden, um sie in weiterführenden Analysen mit den vorliegenden Ergebnissen zu
genomischen RET-Rearrangierungen zu korrelieren.
3. METHODIK
3.1 ZUSAMMENSTELLUNG DER TUMORKOHORTE
Um geeignete Brustkrebspatientinnen für diese Studie zu identifizieren, wurden das nationale Krebsregister
der Ukraine und das staatliche Tschernobyl Register, in dem die Liquidatoren des Reaktorunfalls erfasst sind,
abgeglichen.
3.2 DOSISREKONSTRUKTION
Es wurde damit begonnen, die individuellen Dosen für die Liquidatorinnen unter Verwendung der RADRUE
(Radiation Dose Reconstruction with Uncertainty Estimates)-Methode zu rekonstruieren. Die nötigen Informationen
wurden in Interviews erhoben. Die erhobenen Daten wurden von einem Experten ausgewertet, der mit
der Art und dem Ablauf der Aufräumarbeiten nach dem Reaktorunfall vertraut ist. Die aufbereiteten Daten wurden
in die RADRUE-Software übertragen. Am Ende der Analyse wurden die Dosisrekonstruktionen auf ihre
Konsistenz hin überprüft und mit unabhängigen Dosisinformationen für die untersuchte Person verglichen.
TB 03
3.3 PROBENVORBEREITUNG
Von allen Paraffinblöcken wurden in Kiew Serienschnitte angefertigt, die für die einzelnen Untersuchungen
(array-CGH (comparativ genomic hybridisation), FISH (Fluoreszenz-In-situ-Hybridisierung), Immunhistochemie,
miRNA-Analyse) verwendet werden sollen. Dadurch werden alle Untersuchungen an demselben Tumorbereich
durchgeführt. Für weiterführende Untersuchungen wurden die Paraffinschnitte zudem mikrodissektiert,
um die Tumorzellen anzureichern und unerwünschte Kontaminationen mit Stromagewebe auszuschließen.
3.4 ARRAY-BASIERTE miRNA-ANALYSE
Die miRNA-Expression der Tumorfälle wurde unter Verwendung von Agilent miRNA Microarrays (1 205
miRNA Sonden) untersucht. Mittels statistischer Analyse wurden die Expressionswerte der miRNAs auf Korrelation
mit Strahlenexposition und weiteren klinischen Daten/Tumorphänotypen getestet.
3.5 EXPRESSIONSANALYSE VON RET
Die mRNA-Expression des RET-Gens wurde mittels qRT-PCR (quantitative Reverse Transkriptase Polymerase
Kettenreaktion) untersucht. Die Auswertung der qRT-PCR-Daten erfolgte mit der delta-delta-CT-Methode;
die relative Genexpression wurde auf differentielle Expression zwischen zwei Gruppen getestet.
4. DURCHFÜHRUNG
4.1 ETABLIERUNG EINES MAMMAKARZINOM-KOLLEKTIVS UND ERHEBUNG KLINISCHER
VERLAUFSDATEN
Das Brustkrebs-Kollektiv für die Gruppe der Liquidatorinnen wurde wie unter 3.1 beschrieben zusammengestellt.
Es wurden angeglichene Kontrollfälle ausgewählt. Die Paraffinblöcke wurden asserviert und Mikrotom-
Schnitte hergestellt. Die klinischen Verlaufsdaten für die Pilotstudie wurden aus den Krankenakten zusammengestellt.
4.2 DOSISREKONSTRUKTION
Es wurden 45 exponierte Patienten mit vorliegenden Gewebeproben identifiziert, die für Interviews und die
anschließende Dosisrekonstruktion mittels RADRUE ausgewählt wurden.
Statusberichte TB 03: Strahlenbiologie - Wirkung von ionisierender Strahlung, Strahlenempfindlichkeit 147