Forschungsbericht 2006 des Drk-Blutspendedienstes Baden ...

Blutspendedienst
Forschungsbericht 2006
des DRK-Blutspendedienstes
Baden-Württemberg – Hessen gGmbH
Entwicklung der Forschung 2001-2006
Deutsches Rotes Kreuz

Inhalt
Entwicklung der Forschung im fusionierten Blutspendedienst von 2001 bis 2006........................................................................... 3
Forschungstätigkeiten im Jahr 2006............................................................................................................................................. 11
Forschungsstruktur der Standorte ................................................................................................................................................ 16
11 QQuuaal lli iit ttäät ttssssi iicchheer ruunngg iinn i ddeer r
1
BBl lluut ttvveer
rssoor rgguunngg.................................................................................................26
• Bakterielle Kontamination von Blutprodukten ....................................................................................................................... 27
• Prävalenz von Bakterien in Pool- und Apherese-Thrombozytenkonzentraten und Strategien zur Reduktion des
Transfusionsassoziierten Sepsisrisikos ................................................................................................................................ 29
• Blood and organ transmitted infectious agents (BOTIA Studie) ............................................................................................ 31
• Prävalenz von Parvovirus B19 bei Blutspendern .................................................................................................................. 33
• Prävalenz von Anti-HBc bei Blutspendern ............................................................................................................................ 35
• Entwicklung und Evaluation eines automatisierten Wägemoduls für die NAT-Pooltestung ................................................... 37
• Dokumentation der photochemischen Pathogeninaktivierung von Thrombozytenkonzentraten unter Verwendung von
Amotosalen und UVA Licht mittels PCR und Bioanalyzer..................................................................................................... 39
• Einfluss der Pathogeninaktivierung von gefrorenem Frischplasma (GFP) mittels Amotosalen und UVA-Bestrahlung auf
die Gerinnungsaktivität......................................................................................................................................................... 41
• Qualitätssicherung der D-negativen Erythrozyten-Präparate durch Ausschluss von DEL-Blutpräparaten ............................. 43
• Nationale Qualitätssicherung der derzeit empfohlenen Rhesus-Typisierungsstrategie ......................................................... 45
• Leistungsbewertungsstudie eines neuen Verfahrens zur Blutgruppenbestimmung mittels Lateral-Flow-Technik:
„MDmulticard ABO-D-Rhsubgroups-K for patients“............................................................................................................... 47
• Screening der Blutspender auf seltene Blutgruppen und Entwicklung von Antikörper-Identifizierungs-Panels ...................... 49
• Qualitätsmanagement .......................................................................................................................................................... 50
• Europäisches Twinningprojekt Malta-Deutschland: Verbesserung der Qualität und Sicherheit in der Gewinnung und
Herstellung von Blutkomponenten........................................................................................................................................ 53
• Europäisches Projekt EU-Q-Blood-SOP: Entwicklung von Standards zur Etablierung von
Qualitätsmanagementsystemen in der Transfusionsmedizin ................................................................................................ 55
• Europäisches Projekt EU-Blood-Inspection (EUBIS): Entwicklung von Standards und Kriterien entsprechend Direktive
2002/98/EC und 2005/62/EC für die Inspektion von Blutspendeeinrichtungen...................................................................... 57
• Entwicklung neuer Filter für die Leukozytendepletion bei Blutprodukten............................................................................... 60
22 SSt ttaammmmzzeel lll lleenn uunndd ZZeel lll llt tthheer raappi iiee .................................................................................................................62
• Markierung von Stammzellen für die Detektion von Migration und Homing – Interaktion von Nanopartikeln mit
Stammzellpopulationen ........................................................................................................................................................ 63
• Charakterisierung von immunogenen Leukämie-assoziierten Antigenen zur Peptid-Vakzinierung von Patienten mit
Leukämie ............................................................................................................................................................................. 65
• Genetische Markierung und Modifikation von hämatopoetischen und mesenchymalen Stammzellen zum direkten in
vivo-Nachweis und Verbesserung des Therapieeffektes ...................................................................................................... 67
• Erythrozyten aus Stamm- und Vorläuferzellen...................................................................................................................... 69
• Stammzellen der Leukämie.................................................................................................................................................. 71
• Charakterisierung und Optimierung der Migration Mesenchymaler Stammzellen (MSCs) als kritischer Schritt in der
Toleranzinduktion gegenüber Allotransplantaten.................................................................................................................. 73
• Rolle von Rho-GTPasen in der Tumorangiogenese.............................................................................................................. 75
• Zentralprojekt: Mausmodelle der Leukämie (Teil der Forschergruppe: „Pathologische Genprodukte und ihre
Wirkungsmechanismen“)...................................................................................................................................................... 77
• Isolation und Charakterisierung endothelialer Vorläuferzellen aus Nabelschnurblut, Subprojekt des Teilprojektes C3
„Analysis of the multistep nature of homing and incorporation of circulating progenitor cells during tumor angiogenesis“
im Rahmen des TR-SFB 23 ................................................................................................................................................. 79
• Vergleichende Analyse mesenchymaler Stammzellen aus Knochenmark, Nabelschnurblut oder Fettgewebe...................... 81
• OsteoCord Bone from Blood: Optimised isolation, characterisation and osteogenic induction of mesenchymal stem cells
from umbilical cord blood...................................................................................................................................................... 83
• Standardisierung für die Regenerative Medizin (START-MSC) Stammzellbank mesenchymaler Stammzellen aus
Nabelschnurblut und Entwicklung GMP-konformer Prozessierungstechniken....................................................................... 85
• Deutsches Register für Stammzelltransplantationen............................................................................................................. 87
• Adoptive Immuntherapie maligner Erkrankungen mittels der immortalisierten natürlichen Killerzelllinie NK-92 ..................... 89
• Adoptive Immuntherapie der chronischen CMV-Infektion nach allogener Knochenmark- oder peripherer
Blutstammzelltransplantation: eine Phase I/II-Studie ............................................................................................................ 91
• Stammzellen für die regenerative Medizin ............................................................................................................................ 93
• Genomische Stabilität von hämatopoetischen Stammzellen nach Bestrahlung mit hochenergetischen schweren Ionen....... 95

Inhalt
• Langzeit-Sicherheitsbeobachtung im Rahmen der Gewinnung allogener Blutstammzellen (alloPBSC) von gesunden
Fremdspendern nach Vorbehandlung mit rhuG-CSF (Filgrastim oder Lenograstim)............................................................. 97
• CD34-positive Stammzellen im peripheren Blut als "Repair-Mechanismus" nach cerebralem ischämischem Insult .............. 99
• Knochenmarkstammzellen zur intrakoronaren Therapie bei akutem Myokardinfarkt im Rahmen einer placebokontrollierten,
randomisierten, doppelt-blind Studie ............................................................................................................ 101
• Untersuchungen zu mesenchymalen Stammzellen: Isolierung, Charakterisierung, Differenzierung, Seneszenz, GMPkonforme
ex vivo Expansion und Migrations-Monitoring ..................................................................................................... 103
33 TTr raannssppl llaannt ttaat tti iioonnssmmeeddi iizzi iinn uunndd IImmmmuunnggeenneet
I tti iikk...........................................................................................106
• Immunregulation von natürlichen Killer Zellen und Krankheitsprädisposition bei Autoimmunität ......................................... 107
• Forschergruppe - Universitätsklinikum Frankfurt: Induktion immunologischer Toleranz durch Übertragung
hämatopoetischer Stammzellen ......................................................................................................................................... 109
• Individuell angepasste Immunsuppression nach allogener Transplantation durch molekulardiagnostisches
Immunmonitoring ............................................................................................................................................................... 111
• Entwicklung von Reagenzien zur automatisierten Sequenz-basierten HLA-Typisierung ..................................................... 113
• Einfluss von Zytokin- und Gerinnungsfaktor-Genpolymorphismen auf das Überleben von Nierentransplantaten ................ 115
• Einfluss von immunologisch relevanten Nicht-HLA-Genpolymorphismen in der Stammzelltransplantation ......................... 117
• Immunrekonstitution nach Blutstammzelltransplantation: Entwicklung von Methoden und Untersuchungsstrategien für
HLA- und KIR-Differenzen im Rahmen der Gewebeverträglichkeit bei Blutstammzelltransplantation.................................. 119
44 MMool lleekkuul llaar ree
PPaat tthhoopphhyyssi iiool llooggi
iiee, ,, DDi iiaaggnnoosst tti iikk uunndd TThheer raappi iiee............................................................................122
• Analyse und Genreparatur angeborener Immun- und Hämatopoesedefekte I .................................................................... 123
• Analyse und Genreparatur angeborener Immun- und Hämatopoesedefekte II.................................................................... 125
• Diagnostik und Therapie der PNH ...................................................................................................................................... 127
• Stammzelltransplantation bei aplastischer Anämie und paroxysmaler nächtlicher Hämoglobinurie..................................... 129
• BloodGen: Blutgruppen-Bestimmung und Genotypisierung ................................................................................................ 131
• Aufklärung des Polymorphismus im Rhesus-Blutgruppensystem ....................................................................................... 133
• Identifizierung und Aufklärung der klinischen Relevanz von RhCcEe-Varianten ................................................................. 135
• Molekulare Grundlagen abgeschwächter Antigeneigenschaften im ABO und RhCE System.............................................. 137
• Charakterisierung der molekularen Grundlagen des Aspirin-like Defekts bei pädiatrischen Patienten und deren Familien . 139
• Identifizierung und Charakterisierung neuer Rezeptoren bei Thrombozyten ....................................................................... 141
• Genetische Variabilität von Genen der Blutgerinnung in der Normalbevölkerung ............................................................... 143
• Pharmakogenetik der oralen Antikoagulation ..................................................................................................................... 145
• Molekulare Diagnostik von erblich bedingten hämorrhagischen und thromboembolischen Krankheitsbildern der
Blutgerinnung..................................................................................................................................................................... 147
• Molekulargenetische Analysen bei Hämophilie A-Patienten zur Analyse des Hemmkörperrisikos bei Anwendung von
ADVATE - FVIII-Konzentrat................................................................................................................................................ 149
• Gentherapie der Hämophilie mittels intravaskulärer Administration von nicht-viralen Vektoren........................................... 151
• Optimierung einer rekombinanten FVIII Produktion in heterologen Zellsystemen und Analyse des FVIII-
Sekretionsweges................................................................................................................................................................ 153
• Entwicklung eines gentherapeutischen Ansatzes zur Behandlung der Hämophilie A.......................................................... 155
• Pharmakokinetik und thrombotische Aktivität von FVIII – Etablierung und Analyse eines Mausmodels mit
fluoreszensgekoppelten FVIII (FVIII-GFP).......................................................................................................................... 157
• Prospektive Untersuchung zur Bedeutung von Einflussfaktoren auf die Blutungsinzidenz hämophiler Patienten................ 159
• Untersuchung der Interaktion von Blutgerinnung und zellulärem Immunsystem bei Reif- und Frühgeborenen und deren
Korrelation mit postnatalen Erkrankungen. ......................................................................................................................... 160
Finanzierung der Forschung 2006.............................................................................................................................................. 161
Publikationen 2006..................................................................................................................................................................... 162
Wissenschaftlichen Vorträge, publizierte Abstracts 2006............................................................................................................ 167
Wissenschaftspreise / Posterpreise 2006................................................................................................................................... 176
Ausgerichtete wissenschaftliche Kongresse, Symposien 2006................................................................................................... 177
Lehrveranstaltungen 2006.......................................................................................................................................................... 178
Fortbildungsveranstaltungen 2006 ............................................................................................................................................. 181
Akademische Ausbildung 2006 .................................................................................................................................................. 184
Mitgliedschaften/Funktionen 2006.............................................................................................................................................. 185
Organe der Gesellschaft ............................................................................................................................................................ 187
Impressum ................................................................................................................................................................................. 189
2

Entwicklung der Forschung 2001 - 2006
Entwicklung der Forschung im fusionierten
Blutspendedienst von 2001 bis 2006
Sehr geehrte Leserin,
Sehr geehrter Leser,
die Landesverbände Baden, Baden-Württemberg und Hessen des Deutschen Roten Kreuzes
sowie die Städte Frankfurt am Main und Kassel realisierten den Zusammenschluss ihrer
Blutspendedienste im Jahr 2001. Hintergrund waren vor allem Überlegungen, der großen
Herausforderung durch die sich ändernde Demographie im Blutspendewesen adäquat zu
begegnen. Die Zahl der BlutspenderInnen zeigt eine rückläufige Tendenz, währenddessen der
Bedarf an Blut und Blutpräparaten in Deutschland permanent steigt. Darüber hinaus bestehen
wachsende Anforderungen an die Sicherheit und Qualität der Blutpräparate. Die Entwicklung
der modernen Hochleistungsmedizin verlangt auch von Seiten der Blutspendedienste und der
Transfusionsmedizin eine zunehmende Vielseitigkeit und eine wachsende Kompetenz auf allen
Feldern unseres Fachgebietes. Aus herkömmlichen Blutspendeeinrichtungen und Blutbanken
entstehen hoch differenzierte und hochleistungs-fähige Institute für eine moderne und kompetente
Transfusionsmedizin mit dem Anspruch, auch den höchsten Erwartungen der
Krankenhäuser der Maximalversorgung und der Universitäts-klinika in unserem Versorgungsbereich
gerecht zu werden und diesen in jedweder Weise ein kooperativer und
konstruktiver Partner zu sein. Dies gilt auch und insbesondere im Hinblick auf eine gemeinsame
und partnerschaftliche Weiterentwicklung zukunftsweisender Zelltherapie-formen bis hin zu
gentherapeutischen Anwendungen. Mit dem Zusammenschluss war klar, dass der fusionierte
Blutspendedienst sich vorgenommen hat, eine forschende Einrichtung an der Spitze der
Entwicklung des Fachgebietes in engem Schulterschluss mit forschenden Ein-richtungen an
den Universitäten zu sein.
Im Folgenden sei der Versuch einer kurzen Übersicht über das bisherig Geleistete gewagt:
Da wir trotz des Zusammenschlusses eine im internationalen Vergleich kleine Einrichtung sind,
haben wir uns entschlossen, bei der Profilgebung unserer Forschungsaktivitäten vier
Schwerpunkte auszuwählen:
3
• Qualitätssicherung in der Blutversorgung
• Stammzellen und Zelltherapie
• Transplantationsmedizin und Immungenetik
• Molekulare Pathophysiologie, Diagnostik und Therapie
Im Hinblick auf die Qualitätssicherung in der Hämotherapie war unsere Einrichtung weltweit
die erste, der es gelungen ist, die so genannte Polymerase-Ketten-Reaktion (polymerase chain
reaction = PCR) methodisch so zu entwickeln und in einer Weise in das Blutspendewesen zu
integrieren, dass es möglich war, Erythrozyten- und Thrombozytenkonzentrate sowie gefrorenes
Frischplasma (GFP) auf der Basis eines virusfreien Ergebnisbefundes für die in unserem
Versorgungsgebiet zu transfundierenden Patienten freizugeben. Das Ergebnis dieser Arbeiten
schlug sich in einer Erstpublikation in der Fachzeitschrift “The Lancet“ nieder. Dies hat dazu
geführt, dass wir in der zurückliegenden Phase für die DRK-Blutspendedienste Rheinland-Pfalz,
Thüringen, Nordrhein-Westfalen, für die Bundeswehr, für die österreichischen Blutspendedienste
in Kärnten, Vorarlberg, Wien und Graz sowie für das Luxemburgische Rote Kreuz und
auch für andere Einrichtungen getestet haben. Die Methode wurde darüber hinaus auch an
andere Blutspendedienste wie z. B. das Bayerische Rote Kreuz transferiert, das bis zum
heutigen Tage nicht nur die eigenen, sondern auch die Blutspenden für die Blutspendedienste
in Innsbruck und Salzburg mit der in Frankfurt entwickelten Methode testet. Zahlreiche weitere
Blutspendedienste haben angefragt, konnten jedoch wegen stringenter Lizenzverträge mit
Patentinhabern nicht bedient werden. Im Oktober 2006 ist es gelungen, für unsere Inhouse-
Methode die CE-Zertifizierung zu erhalten. Damit ist die in unserem Blutspendedienst
entwickelte PCR-Methode zum direkten Virusnachweis beim Blutspendescreening weltweit die
erste und einzige Inhouse-Methode, der eine CE-Zertifizierung erteilt wurde. Nicht wenige
wissenschaftliche Publikationen aus diesem Bereich unseres Blutspendedienstes sind bis heute
wegweisend.

Entwicklung der Forschung 2001 - 2006
Der Blutspendedienst hat, beginnend mit 2001, nacheinander sämtliche Institute und Tochtergesellschaften
nach DIN EN ISO 9001:2001 zertifiziert und die Laboratorien nach DIN EN ISO
15189 akkreditiert. Damit war unser Blutspendedienst der Erste des Deutschen Roten Kreuzes,
dem es gelungen ist, ein zertifiziertes Qualitätsmanagementsystem in allen seinen Bereichen zu
etablieren. Aus dieser Arbeit heraus ist ein Profil des Blutspendedienstes erwachsen, das zu
mehreren Projekten im Europäischen Bereich geführt hat: Außer der Restrukturierung des
Blutspendedienstes in Malta wurden uns von der Europäischen Kommission zwei große EU-
Projekte übertragen, in denen wir unter Teilnahme von jeweils 16 bis 18 EU-Ländern
konsensuell Bestandteile eines Qualitätsmanagementsystems auf der Basis des von uns bereits
Etablierten erarbeiten (Europäisches Projekt EU-Q-Blood-SOP: Entwicklung von Standards zur
Etablierung von Qualitätsmanagementsystemen in der Transfusionsmedizin). In einem zweiten,
bis 2010/2011 dauernden Projekt sollen unter unserer Federführung Kriterien für das
Inspektionswesen und die Auditierung von Blutspendeeinrichtungen festgelegt werden
(Europäisches Projekt EU-Blood-Inspection (EUBIS): Entwicklung von Standards und Kriterien
entsprechend Direktive 2002/98/EC und 2005/62/EC für die Inspektion von Blutspendeeinrichtungen).
Es ist vorgesehen, die Ergebnisse in zwei Manuals zusammenzufassen
und diese dann mehrsprachig unter der EU-Kommission als Herausgeberin zu publizieren.
Darüber hinaus beteiligen wir uns an einem neuen Projekt der EU zur korrekten Anwendung
von Blutpräparaten (EU Optimal Blood Use Project) und dem BOTIA (Blood and Organ
Transmitted Infectious Agents)-Projekt.
Ein besonderer und innovativer Schwerpunkt unserer Arbeit ist die Weiterentwicklung der
Stammzell- und Zelltherapien. Von Anbeginn der Knochenmarktransplantation war unser
Institut in Ulm unverzichtbarer Partner der Abteilung Hämatologie am Universitätsklinikum Ulm.
Beginnend in 1992 wurden wissenschaftlich und für die Versorgung der Patienten auch in den
Instituten Frankfurt, Mannheim und Kassel entsprechende Strukturen aufgebaut. Mittlerweile
sind zahlreiche Arbeitsgruppen an den verschiedenen Standorten sowohl mit den
Universitätsklinika als auch untereinander derartig vernetzt, dass es gelungen ist, eine Reihe
Fördermittel z. B. von der Deutschen Forschungsgemeinschaft, der José-Carreras-Stiftung, der
Deutschen Krebshilfe usw. zu erhalten. Die wissenschaftliche Kompetenz und letztlich die
dadurch bedingte fachliche Akzeptanz führte dazu, dass wir zu einem stabilen und großen
Partner renommierter Einrichtungen bei der Versorgung mit Stammzellpräparaten geworden
sind (siehe Abbildungen 6 u. 7). Herausragender Höhepunkt dieser Arbeit war die Septemberausgabe
des international renommierten wissenschaftlichen Journals „New England Journal of
Medicine“ 2006, in der in drei von vier dort publizierten Originalarbeiten unsere Einrichtung in
der Autorenschaft vertreten war (N Engl J Med 2006;355:1210-21; N Engl J Med
2006;355:1222-32; N Engl J Med 2006;355:1233-43). Insbesondere die Stammzelltherapie bei
der Behandlung von Patienten mit akutem Herzinfarkt stellt eine faszinierende Perspektive dar.
Der Bereich der Transplantationsmedizin und Immungenetik wäre ohne hochqualifizierte
und bestausgestattete HLA-Laboratorien nicht vorstellbar. Durch die Implementierung der
jeweils modernsten Methoden einschließlich der Entwicklung von Inhouse-Methoden und deren
CE-Zertifizierung ist es nicht nur gelungen, wissenschaftlicher Partner der klinischen Kollegen
zu sein, sondern über diesen Weg und über die enge Verflechtung der Arbeit vor Ort mit den
klinischen Kollegen, verantwortungsvolle Aufgaben zu übernehmen: So sind wir an unseren
wichtigsten Standorten eines der großen so genannten „Suchzentren“; dies bedeutet, dass wir
im Auftrag der Hämatologen geeignete Stammzell- bzw. Knochenmarkspender zur Therapie
vital bedrohter Patienten suchen (siehe Abbildung 7). Basis für diese Zusammenarbeit ist die
Jahrzehnte lange Aufbauarbeit von wissenschaftlicher und klinischer Expertise auf dem Gebiet
der HLA-Diagnostik, die Etablierung und Entwicklung eigener Knochenmark- und
Stammzellspenderdateien sowie die Etablierung des Zentralen Knochenmarkregister
Deutschlands (ZKRD) in Ulm. Sowohl über unsere eigenen Dateien als auch über das ZKRD
gelingt es in sehr vielen Fällen, Spender zu finden und damit Leben zu retten.
Die auf diesem Weg aufgebaute wissenschaftliche Kompetenz und Logistik führte im Weiteren
dazu, dass die „Deutsche Stiftung Organtransplantation“ (DSO) unsere Einrichtung in Frankfurt
als „Referenzzentrum für die Organtransplantation Deutschland Mitte“ ausgewählt hat. Jedes
Jahr werden auf der Basis der Tag und Nacht an sieben Tagen in der Woche durchgeführten
Untersuchungen Organe transplantiert. Diese Entwicklung zeigt in anschaulicher Weise die
Verknüpfung wissenschaftlicher Arbeit mit klinischem Nutzen.
4

Entwicklung der Forschung 2001 - 2006
Im Bereich der Molekularen Pathophysiologie, Diagnostik und Therapie wurden in den
letzten Jahren vier Gebiete wissenschaftlich bearbeitet: An unserem Institut Ulm untersucht
unsere Arbeitsgruppe „Analyse und Genreparatur angeborener Immun- und Hämatopoesedefekte“
die Hintergründe und Therapiemöglichkeiten bei Erkrankungen der Abwehrzellen und
der Blutbildung. Eine weitere renommierte Forschungsgruppe beschäftigt sich eingehend mit
der molekularen Diagnostik von Antigenen auf roten Blutzellen. Auch hier wird im Rahmen
eines EU-Projektes europaweit im Bereich Immunhämatologie kooperiert (BloodGen:
Blutgruppen-Bestimmung und Genotypisierung). Auch mit den an der Blutgerinnung beteiligten
Blutplättchen, den Thrombozyten, und deren Interaktionen beschäftigen sich Forschungsgruppen
unserer Institute im Verbund mit klinischen Kollegen. Und schließlich versuchen
Arbeitsgruppen, über Gentransfer die Hämophilie = Bluterkrankheit zu heilen. Hierbei ist es
bisher gelungen, eine Methode zu etablieren, die bei Hämophiliemäusen zu einer Heilung der
Blutungsneigung führte. Es dürfte außergewöhnlich schwierig sein, diese Verfahren bis zum
Einsatz am Menschen weiterzuentwickeln.
Daneben wurden wissenschaftliche Arbeiten auf dem Gebiet der Genetik der Gerinnungskrankheiten
durchgeführt, worauf über lange Zeit hinweg unsere Einrichtung international
führend war. Hierzu zählt auch die Erstentdeckung des so genannten „Vitamin K-Gens“, das
regulativ in die Synthese von Gerinnungsfaktoren eingreift. Diese Erstentdeckung einer
Arbeitsgruppe unseres Blutspendedienstes in enger Zusammenarbeit mit Forschungsgruppen
in Würzburg und München führte zu einer Publikation in „Nature“ – einem der renommiertesten
internationalen Publikationsorgane der Naturwissenschaften – und ist derzeitig Gegenstand
zahlreicher internationaler wissenschaftlicher Arbeiten im Hinblick auf die biologische
Bedeutung des Vitamin K-Gens in unterschiedlichsten physiologischen und
pathophysiologischen Zusammenhängen.
Die nur exemplarische Darstellung einiger wissenschaftlicher Arbeiten zeigt, dass es gelungen
ist, für unseren Blutspendedienst ein klares wissenschaftliches Profil zu erarbeiten. Einige
wissenschaftliche Arbeiten fanden direkt Eingang in die klinische Anwendung, andere waren
wegweisend für die Weiterentwicklung und die weitere wissenschaftliche Arbeit auf diesen
Gebieten. Die wissenschaftliche Profilbildung führte dazu, dass eine immer weitergehende
Vernetzung mit Universitätsklinika erfolgt ist: Neben Lehrstühlen für Transfusionsmedizin an
den medizinischen Fakultäten in Frankfurt, Mannheim und Ulm und der Ernennung der
Institutsdirektoren zu Universitätsprofessoren (C4) ist eine enge formale Kooperation mit den
Fakultäten in Heidelberg und Tübingen entstanden. Darüber hinaus sind zwei ehemalige
Oberärzte aus unseren Instituten zum wissenschaftlichen Vortrag vor Berufungskommissionen
zweier medizinischer Fakultäten eingeladen worden, was in beiden Fällen zu erfolgreichen
Berufungen auf Lehrstühle verbunden mit der Leitung universitärer transfusionsmedizinischer
Institute geführt hat.
Die wissenschaftliche Arbeit führte zu mehreren Habilitationen und Ernennungen von
außerplanmäßigen Professuren in den verschiedenen Instituten. Der tägliche Umgang mit
Studenten und die Übernahme von Lehrverpflichtungen trugen auch dazu bei, dass immer mehr
Studenten das Fachgebiet der Transfusionsmedizin für interessant genug befanden, ihre
Doktorarbeit auf diesem Gebiet zu fertigen: Derzeit sind 33 Doktoranden an unseren Instituten
beschäftigt; seit 2001 haben mehr als 20 ihren Doktortitel bei uns erworben. Unser Engagement
auf dem Gebiet der Lehre und Studentenausbildung spiegelt sich nicht nur wider in der Zahl der
Vorlesungen und Unterrichtsveranstaltungen, sondern auch in der Tatsache, dass einer unserer
ärztlichen Direktoren zum Studiendekan einer medizinischen Fakultät berufen wurde.
Einige Kennzahlen der Forschungsleistungen 2001 – 2006 sind nachfolgend grafisch
dargestellt.
Die Wahlen leitender Wissenschaftler zu Vorstandsmitgliedern bzw. zu Vorsitzenden der
wissenschaftlichen Fachgesellschaften „Deutsche Gesellschaft für Transfusionsmedizin und
Immunhämatologie“ (DGTI), der „Deutschen Gesellschaft für Immungenetik“ (DGI) und der
„International Society of Blood Transfusion“ (ISBT) belegen die Akzeptanz unserer Arbeit in der
nationalen und internationalen Fachwelt. Erfolge waren die Durchführung der nationalen
Kongresse der DGTI in Mannheim 2004 (Prof. Klüter) und in Frankfurt a. M. 2006 (Prof.
Seifried) sowie der DGI in 2001 in Frankfurt a. M. und 2004 in Dresden (Prof. Seidl). In 2009
wird der Kongress der „European Federation of Immunogenetics“ (EFI) in Kombination mit der
„Deutschen Gesellschaft für Immungenetik“ (DGI) in Ulm (PD Mytilineos) stattfinden. Ein Höhepunkt
wird der Weltkongress der „International Society of Blood Transfusion“ (ISBT) sein, der
als „Joint Congress“ mit der DGTI 2010 in Berlin (Prof. Seifried) stattfinden wird.
5

Anzahl (gesamt)
70
60
50
40
30
20
10
0
53
53
Entwicklung der Forschung 2001 - 2006
51
2001 2002 2003 2004 2005 2006
Abbildung 1: Anzahl der laufenden Forschungsprojekte 2001 – 2006
Anzahl (gesamt)
140
120
100
80
60
40
20
0
58
48
68
61
64
57
107
65
127
2001 2002 2003 2004 2005 2006
Abbildung 2: Anzahl der Publikationen 2001 – 2006: Insgesamt wurden 472 Artikel publiziert.
6

Entwicklung der Forschung 2001 - 2006
Abbildung 3 zeigt, dass im Blutspendedienst Baden-Württemberg – Hessen seit der Fusion eine
kontinuierliche Zunahme des jährlichen kumulativen Impakt-Faktors erreicht wurde, mit einem
Anstieg für 2006 auf beinahe das Dreifache des Wertes im Jahre 2001.
Eingeworbene Drittmittel zur Finanzierung von Forschung und Entwicklung
Für die Finanzierung von Forschung und Entwicklung im Blutspendedienst werden außer
Eigenmitteln von extern eingeworbene Geldmittel genutzt. In einigen Instituten stehen
außerdem in begrenztem Umfang auch strukturelle Mittel aus dem Haushalt der Universitäten
zur Verfügung. Im Berichtszeitraum ist es den Instituten des DRK Blutspendedienstes Baden-
Württemberg – Hessen gemeinsam mit Forschungsgruppen aus dem In- und Ausland
gelungen, insgesamt etwas mehr als elf Millionen Euro an Mitteln einzuwerben. Der größte
Anteil entspricht dabei sogenannten „Peer-Review“-unterworfenen Mitteln: Hierbei werden
kompetitive Forschungsanträge durch unabhängige externe Fachgutachter zur Förderung
ausgewählt. Abbildung 4 stellt diese Entwicklung der Drittmitteleinwerbung im Blutspendedienst
für den Berichtszeitraum dar.
7
Impaktfaktor (kumulativ)
600,0
500,0
400,0
300,0
200,0
100,0
0,0
175,9
194,8
218,1
261,1
409,6
552,3
2001 2002 2003 2004 2005 2006
Abbildung 3: Entwicklung der Qualität der Publikationen 2001 – 2006, ausgedrückt durch den sog. Impaktfaktor des
„Science Citation Index“. Dieser Faktor bewertet, kategorisiert nach Zeitschriften, von wem und wie oft in einer be-stimmten
Zeit die publizierten Artikel von anderen Autoren zitiert werden. Der Impaktfaktor ist nicht nach (Co-) Autorenschaft
berichtigt. Der kumulative Impaktfaktor liegt bei 1811,8.

Gesamtsumme eingeworbener Drittmittel [Mio. Euro]
3
2,5
2
1,5
1
0,5
0
Entwicklung der Forschung 2001 - 2006
sonstige Drittmittel
begutachtete Drittmittel
2001 2002 2003 2004 2005 2006
Abbildung 4: Entwicklung der eingeworbenen Drittmittel zur Projektförderung unter Beteiligung von Wissenschaftlern
des Blutspendedienst Baden-Württemberg – Hessen gGmbH 2001-2006. Die bewilligten Gesamtbeträge für ein Projekt
wurden jeweils dem Jahr der Bewilligung zugeordnet. Der kumulative Betrag (Gesamteinwerbung) von 2001 bis 2006
liegt bei etwas über 11 Millionen €.
Wissenschaftliche Fort- und Weiterbildung, Förderung des wissenschaftlichen
Nachwuchses, Promotionen, Habilitationen und Berufungen
Insgesamt schlossen an unseren Instituten zwischen 2001 und 2006 mehr als 20 Doktoranden
ihre Dissertation erfolgreich ab. Vier Oberärzte habilitierten sich an ihren jeweiligen
medizinischen Fakultäten. Drei Oberärzte erlangten die Bezeichnung „außerplanmäßiger
Professor“, und zwei ehemalige Oberärzte erhielten einen Ruf auf eine C3- bzw. C4-Professur.
Zwischen 2001 und 2006 wurden 33 wissenschaftlichen Veranstaltungen und Kongresse
ausgerichtet. Für die zahlreichen Lehrveranstaltungen an den Universitäten sei auf die
Aufstellung am Ende dieses Berichtes verwiesen.
Unter Federführung des ersten Vorsitzenden der Forschungsgemeinschaft geben die DRK-
Blutspendedienste seit 2003 bundesweit gemeinsam das Fachmagazin „hämotherapie –
Beiträge zur Transfusionsmedizin“ heraus. Ziel ist die kontinuierliche Fort- und Weiterbildung
der klinisch tätigen Ärzte und medizinisch-technischen AssistentInnen (MTA) auf unserem
Fachgebiet. Die Auflage liegt derzeit bei 32.000 Stück pro Ausgabe. 70.000 zusätzliche
Downloads (www.drk-blutspende.de/haemotherapie) bestätigen die Qualität und Relevanz der
publizierten Beiträge.
In den bisher acht Ausgaben haben Autorengruppen unserer Institute für mehr als 40% der
Beiträge die wissenschaftliche und inhaltliche Verantwortung übernommen (Abbildung 5).
8

Entwicklung der Forschung 2001 - 2006
Abbildung 5: Autorenanteil des DRK Blutspendedienstes Baden-Württemberg – Hessen in der Zeitschrift
„hämotherapie – Beiträge zur Transfusionsmedizin“ (Ausgaben 1/2003 bis 8/2006; Gesamt: 51 Beiträge im Mantelteil).
Entwicklung der Knochenmarkfremdspender-Dateien der Institute Frankfurt, Mannheim
und Ulm sowie der Sucheinheiten in Frankfurt und Ulm
Neben dem „Zentralen Knochenmarkspender-Register Deutschland“ (ZKRD), einem 100%igen
Tochterunternehmen unseres Blutspendedienstes in Ulm, in welchem bundesweit die Spendersuchen
für alle deutschen Patienten zusammengeführt werden, betreibt der DRK-Blutspendedienst
Baden-Württemberg – Hessen gGmbH an seinen Instituten in Frankfurt,
Mannheim und Ulm eigenständige Knochenmarkspender-Register, in welchen sich gesunde
Freiwillige als potentielle Knochenmarkstammzell-Fremdspender für Patienten mit Leukämien
und anderen Bluterkrankungen registrieren und HLA-typisieren lassen können. Im Zeitraum
2001 bis 2006 konnte die Zahl der typisierten Spender von unter 48.000 auf über 112.000
gesteigert werden (Abbildung 6).
Anzahl Spender (n)
9
120000
100000
80000
60000
40000
20000
0
Ausgaben 1/2003 bis 8/2006 (n = 51): Autorenschaften
27%
Freiwillige Knochenmark-Spender in den Dateien Frankfurt,
Mannheim und Ulm von 2001 bis 2006
gesamt:
47.598
14%
8%
Mannheim
Ulm
Frankfurt
2001 2002 2003 2004 2005 2006
Jahr
gesamt:
112.503
Abbildung 6: Entwickung der Zahl der in den Dateien in Frankfurt, Mannheim und Ulm registrierten freiwilligen
Knochenmarkstammzell-Spender.
6%
4%
BSD Ba-Wü-He
B
C
D
E
F
41%

Entwicklung der Forschung 2001 - 2006
Im gleichen Zeitraum stiegen die peripheren Stammzellentnahmen von freiwilligen Spendern
aus unseren drei Dateien von 23 im Jahr 2001 auf 122 im Jahr 2006, während im gleichen
Zeitraum die Knochenmarkentnahmen in etwa konstant blieben und zwischen 10 und 20 pro
Jahr schwankten (Abbildung 7).
Jährlich führen wir für 500 bis 700 leukämiekranke Kinder und erwachsene Patienten der
Universitätskliniken Frankfurt und Ulm sowie weiteren ca. 20 Transplantationskliniken in
Deutschland Knochenmark-Fremdspender-Suchen aus den weltweiten Dateien durch.
Anzahl (n)
140
120
100
80
60
40
23
Entnahmeformen/Jahr bei Spendern aus den Dateien
Frankfurt, Mannheim und Ulm
40
kumulativ 2001-2006:
PBSC-E: 426
KM-E: 83
60
20
15
16
13
11
10
18
0
2001 2002 2003
Jahr
2004 2005 2006
77
104
PBSC-E
KM-E
Abbildung 7: Entwicklung der Entnahmen pro Jahr bei Spendern aus unseren freiwiligen Knochenmarkspender-
Dateien. Dargetellt ist die Zahl der jährlichen Entnahmen nach Entnahmeform. PBSC-E: Entnahme von ins periphere
Blut mobilisierten Stammzellen; KM-E: Entnahme von Stammzellen aus dem Knochenmark.
Wenngleich die Entwicklung der letzten fünf Jahre Grund zu Optimismus ist, sind wir uns
bewusst, dass die ersten Erfolge der Vergangenheit keine Garantie für die Zukunft sind. Wir
sind daher alle gewillt, unsere Anstrengungen auf dem Gebiet der Wissenschaft in der Transfusionsmedizin
zu intensivieren.
Unser Dank und gleichzeitig auch unsere Hoffnung in diesem Zusammenhang gilt nicht nur
allen unseren engagierten MitarbeiterInnen, sondern auch unseren Förderern und
Drittmittelgebern, nicht zuletzt den Kollegen und MitarbeiterInnen aus den kaufmännischen,
Verwaltungs- und technischen Bereichen sowie der konstruktiv-wohlwollenden Begleitung durch
die Aufsichtsratmitglieder und Gesellschafter unseres Blutspendedienstes.
Prof. Dr. med. Erhard Seifried
122
10

Forschung 2006
Forschungstätigkeiten im Jahr 2006
Schwerpunkt I: Qualitätssicherung in der Blutversorgung
Dieser Bereich vereinigt die Aktivitäten in Forschung und Entwicklung zur Sicherstellung der
bestmöglichen Qualität auf dem Gebiet der Blutversorgung. Der Handlungsbedarf für
intensivierte Forschungs- und Entwicklungstätigkeiten auf diesem Gebiet begründet sich vor
allem durch die derzeit bekannten Ursachen für unerwünschte Wirkungen von Blutpräparaten
und den hieraus abzuleitenden Notwendigkeiten zur weiteren Verbesserung der
transfusionsmedizinischen Versorgung. Er betrifft Herstellung, Testung, Freigabe, Abgabe
sowie Dienstleistungen für Krankenhäuser.
In dem Schwerpunkt werden gegenwärtig folgende Hauptziele verfolgt:
11
• Entwicklung diagnostischer Methoden zur bestmöglichen Sicherheit hinsichtlich viraler
und bakterieller Kontaminationen der Blutpräparate
• Pathogeninaktivierungsverfahren zur Reduktion von Viren, Bakterien und weiteren
infektiösen Agenzien
• immunhämatologische Fragestellungen
• Risikominimierung durch ein zertifiziertes Qualitätsmanagementsystem
Auf dem Gebiet der bestmöglichen Diagnostik zur Verbesserung der Virus- und
bakteriellen Sicherheit von Blutpräparaten konzentrieren sich die Aktivitäten auf die Institute
in Frankfurt und Ulm. Die Studie der Forschungsgemeinschaft der DRK-Blutspendedienste zur
Erfassung der bakteriellen Kontamination in Apherese- und Pool-Thrombozytenkonzentraten
(Transfusion 47:644, 2007) zeigte eine vergleichbare, jedoch signifikante bakterielle
Kontaminationsrate der beiden Produkte. Zudem zeigte sich, dass trotz Testung jedes
Produktes wegen der nicht vermeidbaren zeitlichen Verzögerung leider nicht jedes
kontaminierte Produkt von der Anwendung ausgeschlossen werden konnte.
Weitere Projekte im Institut Frankfurt nahmen die im Jahre 2006 eingeführte generelle Testung
aller Blutspender auf die Anwesenheit des Infektionsmarkers anti-HBc für die Hepatitis B
Infektion zum Anlass, die Charakteristika der derzeit zur Verfügung stehenden Tests zu
vergleichen und erbrachten neue Daten zur Validität insbesondere von Messergebnissen im
Bereich des sog. „Cutoff“ Werts. Außerdem beschäftigte sich der Bereich mit
• der Verbesserung der Aussagen bei Vorliegen positiver Befunde für das mit der PCR
untersuchte Parvovirus B19
• der generellen Erfassung auch neuartiger Erreger wie z.B. des SARS-Virus im Rahmen
des europäischen Konsortiums BOTIA
• der Entwicklung eines CE-zertifizierten PCR-Testkits zum direkten Virusnachweis in
Blutpräparaten
• der Entwicklung eines automatisierten Verfahrens der PCR-Testung.
Eine weitere Strategie zur Steigerung der Infektionssicherheit von Blutpräparaten stellen die
sogenannten Pathogeninaktivierungsverfahren dar, deren Funktionsweise auf der Zugabe
von in die DNA interkalierenden Substanzen und UV-Bestrahlung der Blutprodukte beruht.
Nach den Vorarbeiten der Gruppe um Prof. Klüter und Frau Dr. Janetzko im Institut in
Mannheim zur Verträglichkeit von mittels Apherese hergestellten Thrombozytenkonzentraten,
die mit dem Psoralenderivat Amotosalen und UV-A Bestrahlung behandelt wurden, wurde in
Mannheim ein PCR-Verfahren zur Messung der Vollständigkeit der Inaktivierung in jedem
Produkt entwickelt. Für das Psoralen-Verfahren wurde im Institut Frankfurt die Inaktivierung von
Plasmapräparaten und mögliche Auswirkungen auf wichtige Gerinnungsparameter untersucht.
Gegenwärtig gibt es Planungen für einen limitierten klinischen Einsatz pathogeninaktivierter
Thrombozytenkonzentrate im Rahmen einer Anwendungsbeobachtung.

Forschung 2006
Im Bereich Immunhämatologie steht die Bereitstellung einer national und international
führenden Qualität in der Sicherheit und Aktualität der Blutgruppendiagnostik im Vordergrund
der Aktivitäten. Hierzu werden aus Ulm die im Rahmen der nationalen DGTI-Studie zur
Qualitätssicherung erhobenen Ergebnisse von schwachen D Typen in Transfusionsempfängern
vorgestellt. Ergänzend hierzu beschäftigt sich eine Arbeitsgruppe in den Instituten in Mannheim
und Baden-Baden mit der Optimierung des Blutspenderscreenings bei der
Blutgruppenbestimmung und Antikörperidentifizierung. Der besonders schnellen,
notfallangepassten Detektion des Rhesus-Untergruppenstatus und der ABO-
Blutgruppenmerkmale dienen die im Institut Frankfurt in einer Anwendungsstudie untersuchten
Kartensysteme auf serologischer Basis.
Ein wesentliches weiteres Element innerhalb des Schwerpunkts „Qualitätssicherung in der
Blutversorgung“ bildet der Aufbau der Risikoanalyse und –bewertung sowie der Vermeidung
von Risiken durch ein professionelles Qualitätsmanagementsystem. Hierbei ist zu beachten,
dass für Blutspendedienste die zur Verfügung stehende Methodik im Bereich
Qualitätsmanagementsysteme, insbesondere der transfusionsmedizinischen Risikobewertung,
zunächst oft praktisch nicht existent war und in Eigenarbeit zunächst erst entwickelt werden
musste. Die Arbeitsgruppe um MUDr. W. Sireis in Frankfurt berichtet als wesentlichen
Meilenstein die erfolgreiche Rezertifizierung der bereits seit 2001 zertifizierten Institute und die
2006 abgeschlossene Zertifizierung sämtlicher Institute der Tochtergesellschaften. Weiterhin
wurden neue Systeme und Dokumente zur Erfassung und Bewertung von Risiken erarbeitet.
Zusätzlich gelang es seit 2005 mit dem ersten EU-weiten Projekt im Rahmen des
Förderprogramms „Öffentliche Gesundheit“, unter der Projektleitung von Prof. Dr. E. Seifried im
Institut Frankfurt eine zentrale Stelle für Forschungs- und Entwicklungstätigkeiten im Rahmen
der Harmonisierung von Qualitätsstandards im Bereich der Transfusionsmedizin zu etablieren.
Die 2006 bearbeiteten Projekte befassen sich mit der Erstellung eines Handbuches zur
Abfassung von Standardarbeitsanweisungen (EU-Q-BLOOD-SOP Projekt), der Erarbeitung von
Richtlinien für die Inspektion von Blutspendeeinrichtungen (EUBIS-Projekt), sowie in einer
bilateralen Zusammenarbeit mit Strategien zur Qualitätssicherung gemeinsam mit dem
Blutspendedienst in Malta.
12

Forschung 2006
Schwerpunkt II: Stammzellen und Zelltherapie
Seit jeher ist die Bereitstellung von Blutzellen zur intravenösen Anwendung eine Kernaufgabe
der Transfusionsmedizin. Gegenwärtig werden in diesem Schwerpunkt die Klinische
Anwendung von Stammzellen und Zelltherapeutika sowie die Entwicklung präklinischer Modelle
für Stammzelltherapien bearbeitet.
Im Bereich der klinischen Anwendung von Stammzellen und Zelltherapeutika gelang es
zunehmend, Kooperationspartner für Anwendungen neuer innovativer Zelltherapieformen zu
gewinnen und mit ihnen gemeinsam klinische Studien mit im Blutspendedienst hergestellten
Zellpopulationen zu initiieren.
Im Institut Frankfurt sind dies seitens des Universitätsklinikums Frankfurt
• die Klinik für Kinderheilkunde III (Pädiatrische Hämatologie und Onkologie) und
• die Medizinische Klinik II (Hämatologie / Onkologie, Rheumatologie, Infektiologie):
Natürliche Killerzellen (Zellinie NK-92) bei Patienten mit Tumoren und Leukämien
• die Medizinische Klinik III (Kardiolologie, Angiologie/ Hämostaseologie):
Stammzellen bei Patienten mit akutem Herzinfarkt
• sowie seitens des Universitätsklinikums Würzburg die Medizinische Klinik II:
CMV-spezifische T-Lymphozyten bei immunsupprimierten Patienten
im Institut Mannheim
• die Universitätsklinik für Dermatologie, Venerologie und Allergologie in Mannheim mit
dem Deutschen Krebsforschungszentrum Heidelberg:
dendritische Zellen bei Patienten mit Tumoren
im Institut Ulm
• die Klinik für Innere Medizin III (Hämatologie, Onkologie, Rheumatologie und
Infektionskrankheiten):
dendritische Zellen bei Patienten mit Leukämien
• die Klinik für Innere Medizin II (Kardiologie, Angiologie, Pneumologie, Sport- und
Rehabilitationsmedizin):
Stammzellen bei Patienten mit Myokardinfarkt
• die Klinik für Hals-Nasen- und Ohrenheilkunde:
opsonisierte Lymphozyten bei Patienten mit Tumoren.
• die Klinik für Kinder- und Jugendmedizin
Transplantation hochaufgereinigter Stammzellen bei Immundefekten
Als wichtige Voraussetzung für klinische Studien mit zellulären Therapien wird als strategisches
Ziel die Etablierung präklinischer Modelle verfolgt:
Im Bereich der Stammzell-Therapie wurde zwischen den Arbeitsgruppen an vier Standorten
eine umfassende Initiative zur präklinischen Untersuchung und GMP-Produktion
Mesenchymaler Stammzellen (MSC) aufgebaut. Hierbei übernehmen die einzelnen
Arbeitsgruppen anteilig unterschiedliche Aufgaben, die in Tabelle 1 zusammengefasst sind:
Tabelle 1: Aufgabenverteilung der Bearbeitung präklinischer Entwicklung Mesenchymaler Stammzellen
(MSC) im DRK Blutspendedienst Baden-Württemberg – Hessen.
Aufgabe Isolierung Sortierung Markierung Tiermodell GMP-Reagenzien
Institut MA TÜ, UL TÜ, UL F MA, UL
Diese Initiative wird seit 2006 im Rahmen einer Kooperation mit dem nationalen französischen
Blutspendedienst EFS, ebenfalls mit dem gemeinsamen Ziel der bald möglichen klinischen
Anwendung dieser Zellen z.B. innerhalb eines europäischen Konsortiums weiter ausgebaut.
Zu weiteren Zelltherapieformen wurden Mausmodelle entwickelt. Ziel ist die Charakterisierung
und Herstellung von
• Vorläuferzellen, welche die Gefäßneubildung von Tumoren regulieren in Frankfurt und
Mannheim
• Stammzellen der Leukämie als therapeutisches Target in Frankfurt
• Stammzellen zur Immunmodulation bei der Transplantatabstoßung in Frankfurt
• Mesenchymalen Stammzellen zur Wundheilung in Kooperation mit der Klinik für
Dermatologie in Ulm.
13

Schwerpunkt III: Transplantationsmedizin und Immungenetik
Die Hauptziele der Forschungs- und Entwicklungsaktivitäten bestanden 2006
Forschung 2006
• in der Erforschung der Bedeutung von Zelloberflächenrezeptoren sowie von
Polymorphismen von Zytokingenen für den Transplantationserfolg
• in der Translation laboranalytischer Marker aus der Forschung in die Routinediagnostik.
Im Fokus der Forschungsaktivitäten steht die Definition weiterer Laborparameter und Faktoren
für den Transplantationserfolg. Hierzu zählen die Untersuchungen zur Bedeutung von
Rezeptoren auf Natürlichen Killerzellen (Frankfurt) und von Gen-Polymorphismen von Zytokinen
(Ulm). Das Institut Heidelberg beteiligte sich mit einer Studie zur individuell angepassten
Immunsuppression nach Fremdspender-Stammzelltransplantation.
In Frankfurt wurde darüber hinaus eine interdisziplinäre Forschergruppe zur Ermittlung von
Mechanismen der Toleranzinduktion bei Diabetes mellitus infolge der Transplantation
hämatopoetischer Stammzellen unter der Beteiligung des Blutspendedienstes konstituiert.
Die Aktivitäten im Entwicklungsbereich waren 2006 wesentlich geprägt von den Fortschritten bei
den Techniken zur DNA-Sequenzanalyse transplantationsrelevanter Gene. Im Institut Ulm
wurde hierbei die CE-Zertifizierung eines solchen Verfahrens erreicht. Im Institut Frankfurt
konnte die automatisierte Extraktion von DNA und die Einbindung der Abläufe in eine Labor-
Informationssystem (LIMS) erfolgreich etabliert werden. Darüber hinaus wurde ein
elektronischer Spenderfragebogen für die Aufnahme in Knochenmark-Spenderdateien und ein
elektronischer Datentransfer zur Zentraldatei ENDIS (ZKRD) entwickelt.
Schwerpunkt IV: Molekulare Pathophysiologie, Diagnostik und Therapie
Die Forschung in diesem Bereich vereinigt Aktivitäten zur Aufklärung der genetischen Ursachen
von Krankheiten und weiterer, diagnostisch und therapeutisch nutzbarer genetischer Anomalien
und Varianten. Sie umfasst folgende Bereiche:
• Genetische Stammzelldefekte und Genreparatur
Der in Ulm bereits langjährig bestehende Forschungsbereich, der sich mit Gendefekten in
hämatopoetischen Stammzellen und undifferenzierten Vorläuferzellen des Immunsystems
beschäftigt, berichtet 2006 über mehrere neu entdeckte Gendefekte, die sich im Bereich der
Lymphopoese oder der Erythropoese krankheitsrelevant auswirken. Parallel dazu wurden neue
Ansätze zur gezielten Genkorrektur mit Hilfe kurzer, in vitro synthetisierter DNA-Stränge
etabliert, was in Modellzellinien bereits gelingt. Außerdem stehen hier die Untersuchungen zur
Pathophysiologie und Therapie der aplastischen Anämie und der paroxysmalen nächtlichen
Hämogobinurie im Mittelpunkt des Interesses. Diese sind durch mehrere Kooperationen mit den
neuesten Therapieansätzen und klinischen Behandlungsprotokollen z.B. im Rahmen der
„European Bone Marrow Transpantation“ (EBMT) auch international und europaweit vernetzt.
• Immunhämatologie
Die bereits langjährig bekannten Aktivitäten im Institut Ulm beschrieben und charakterisierten im
Jahre 2006 neue Varianten am Rhesus-Genort und untersuchten ihre klinische Relevanz. In
dem EU-geförderten BloodGen Projekt wurde darüber hinaus eine neue marktreife
Anwendungstechnologie zur Diagnostik von Blutgruppen entwickelt. Im Institut Mannheim
werden neue molekularbiologische Verfahren verfolgt, die Varianten im ABO-System erfassen
können und damit die Blutgruppendiagnostik ergänzen können.
• Thrombozytenimmunologie
Das Institut Mannheim bearbeitet Fragestellungen zur Bedeutung thrombozytärer Rezeptoren
bei der Entstehung thromboembolischer Erkrankungen, z.B. bei Herzinfarkt oder Schlaganfall.
Außerdem sind hier die zur Verfügung gestellten Methoden zur molekularbiologischen
14

Forschung 2006
Bestimmung von Allelen der Human Platelet Antigen (HPA) Thrombozytenantigene sowie
neuartige Ansätze zur Erfassung weiterer thrombozytärer Antigene von Bedeutung. Ein
weiteres Drittmittel-gefördertes Forschungsprojekt befasst sich mit den genetischen Grundlagen
einer thrombozytär bedingten Gerinnungsanomalie.
15
• Hämostaseologie
Der Schwerpunkt Hämostaseologie im Institut Frankfurt zielt auf die Analyse genetischer
Risikofaktoren und ursächlicher Faktoren für Gerinnungsdefekte und Thromboembolien, sowie
die Entwicklung einer Gentherapie für Patienten mit Hämophilie. Eine Arbeitsgruppe beschreitet
neue Wege auf dem Gebiet der Hämophilie (Bluterkrankheit) durch die Etablierung einer
Gentherapie. Nach der Kartierung des Sektretionswegs und des intrazellulären „Trafficking“ von
F.VIII wurden diese Ansätze in neue. effizientere Zielzellen überführt und nutzen die
Beeinflussung intrazellulärer Signalwege zur Optimierung der F.VIII Produktion und Sekretion.
Parallel arbeitet die Arbeitsgruppe an vektorgebundenen, jedoch zellfreien Therapieformen zur
Therapie der Hämophilie-Typen A und B. Darüber hinaus werden der Korrelation zwischen
Genotyp und Phänotyp bei Patienten mit Hämophilie A und die genetische Variabilität weiterer
Gene der Blutgerinnung verfolgt. Nach der 2004 erfolgten Entdeckung des „Vitamin K-Gens“
Vitamin-K-Epoxid-Reduktase Komplex (VKORC)-1 stehen hier Untersuchungen zu VKORC-1
abhängigen Gerinnungsdefekten und ihre Assoziation mit Störungen der Blutgerinnungsfunktion
im Mittelpunkt. Am Hämophiliezentrum Frankfurt werden prospektive Untersuchungen
verschiedener Einflussfaktoren bei Patienten mit Hämophilie A und B durchgeführt.
Prof. Dr. med. E. Seifried PD Dr. med. R. Henschler

Forschungsstruktur der Standorte
Das Institut Baden-Baden
Institut Baden-Baden
(Institutsleitung: Dr. med. Ekkehard Richter)
DRK Blutspendedienst Baden-Württemberg – Hessen gGmbH
Gunzenbachstr. 35
76530 Baden-Baden
Telefon: +49-(0)7221-214-0
Telefax: +49-(0)7221-214-435
Forschungsstruktur der Standorte
Das Institut für Transfusionsmedizin und Immunhämatologie Baden-Baden des DRK-
Blutspendedienstes Baden-Württemberg – Hessen ist ein Versorgungsstandort mit zentralen
Aufgaben. Die ausschließlich anwendungsorientierten Forschungsprojekte betreffen die
Qualitätssicherung in der Blutversorgung und dienen der Optimierung der Abläufe bei der
Herstellung von Blutkomponenten, der Verbesserung der Qualität und Haltbarkeit der
Blutpräparate und der Untersuchung immunhämatologischer Fragestellungen, wie z.B. die
Frequenz seltener erythrozytärer Antigene in der Bevölkerung bzw. unter Blutspendern.
In den Abteilungen laufen routinebegleitende Analysen sowie Applikations-, Entwicklungs- und
Industrieauftragsforschung. Die personellen und materiell-technischen Voraussetzungen sind
darauf beschränkt. Es bestehen Kooperationen mit entsprechenden DGTI Arbeitsgruppen,
Arbeitgruppen der BEST Collaborative (Conventional Component Team), des Internationalen
Referenzlabors für Blutgruppen in Bristol, SCARF (Philadelphia) und dem New York Blood
Center.
Das am Institut ansässige Reisemedizinische Beratungszentrum organisiert jährlich in
Zusammenarbeit mit „Reisen und Gesundheit“ den „Baden-Badener Tag der Impf- und
Reisemedizin“, der am 07.10.2006 zum 8. Mal stattgefunden hat. Die Wissenschaftliche Leitung
obliegt hierbei dem Institut Baden-Baden des DRK-Blutspendedienstes Baden-Württemberg –
Hessen.
Am Institut Baden-Baden konnten in den Jahren 2001 bis 2006 insgesamt sechs Ärztinnen bzw.
Ärzte die Weiterbildung zum Facharzt für Transfusionsmedizin abschließen.
Dr. med. E. Richter
16

Forschungsstruktur der Standorte
Das Institut Frankfurt
Institut für Transfusionsmedizin und Immunhämatologie Frankfurt
Klinikum der Johann Wolfgang Goethe-Universität
DRK-Blutspendedienst Baden-Württemberg – Hessen gGmbH
(Institutsleitung: Univ. Prof. Dr. med. Erhard Seifried)
Sandhofstrasse 1
60528 Frankfurt
Telefon: +49-69-6782 201
Telefax: +49-69-6782 231
Das Institut Frankfurt nimmt die Versorgung und hämotherapeutische Beratung sowie die
immunhämatologischen Laborleistungen für das gesamte Universitätsklinikum Frankfurt wahr
und betreut damit das Universitätsklinikum in allen transfusionsmedizinischen Belangen.
Weiterhin stellt das Institut in Mittel- und Südhessen die Versorgung von insgesamt mehr als
100 Krankenhäusern mit Blutprodukten sicher und ist Referenzlabor für andernorts nicht lösbare
immunhämatologische Fragestellungen. Neben mehr als 180.000 Vollblutspenden pro Jahr, die
von mehr als 100.000 Blutspendern entgegen genommen werden, werden mehrere hundert
Stammzellapheresen in der Abteilung Zellseparation durchgeführt. Der Lehrstuhl (C4) für
Transfusionsmedizin und Immunhämatologie am Universitätsklinikum Frankfurt stellt Lehre und
Forschung im Fachgebiet sicher.
In vier Forschungsschwerpunkten wurden die Forschungsaktivitäten auch im Jahr 2006 von den
Ärzten und Wissenschaftlern des Frankfurter Institutes in enger Kooperation mit dem
Universitätsklinikum und weiteren assoziierten Instituten kontinuierlich ausgebaut.
Im Schwerpunkt Qualitätssicherung in der Blutversorgung ist das Frankfurter Institut mit
seiner Vorreiterrolle bei der Einführung molekularbiologischer Untersuchungsmethoden in das
Blutspenderscreening weltweit führend. Das von medizinischen Geschäftsführung initiierte und
gemeinsam mit der Arbeitsgruppe molekulare Virusdiagnostik entwickelte, auf der PCR-
Technologie basierende Pool-Testverfahren stellt seit 1997 den hohen Sicherheitsstandard der
Blutprodukte sicher. Die durch Einführung dieser Technik belegte, ausgeprägte Reduktion des
Risikos transfusionsassoziierter Virusinfektionen trug dazu bei, dass das molekularbiologische
Blutspenderscreening auf Hepatitis C bzw. den AIDS-Erreger HIV von der Bundesoberbehörde,
dem Paul-Ehrlich-Institut, seit 1999 bzw. 2004 bundesweit gesetzlich vorgeschrieben ist sowie
in vielen Ländern weltweit zum Standard wurde.
Aktuelle Forschungsaktivitäten der Arbeitsgruppe Molekulare Pathogendiagnostik (PD Dr. med.
M. Schmidt) sind konsequent darauf ausgerichtet, die Sicherheit der Blutprodukte weiter zu
steigern. Neben der Entwicklung optimierter PCR Kits und deren CE-Zertifizierung sowie
innovativer Automationskonzepte für die Virusdiagnostik umfassen diese Aktivitäten auch
epidemiologische Untersuchungen zu viralen Infektionsmarkern mit möglichem Einfluss auf die
Sicherheit der Blutprodukte. Einen neuen Schwerpunkt stellt die Entwicklung von Verfahren zur
Reduktion bakterieller Kontaminationen von Blutprodukten dar. Vor dem Hintergrund des bereits
sehr geringen Restrisikos transfusionassoziierter Virusinfektionen gewinnen diese
Forschungsaktivitäten zur Reduktion des bakteriellen Risikos zunehmend an Stellenwert. Die
Arbeitsgruppe führte die bundesweit etablierte Anti-HBc-Studie der DRK-Blutspendedienste als
Prüfzentrum mit durch und prüfte die Prävalenz von West-Nil-Virus in der Spenderpopulation.
Im Bereich des Qualitätsmanagements unter MUDr. W. Sireis und Prof. Dr. med E. Seifried wird
für das seit dem Jahre 2002 akkreditierte und zertifizierte Institut Frankfurt mit der
Strukturierung eines effektiven Risikomanagementsystems die Qualität unserer Blutpräparate
weiter gestärkt. Ein modernes Qualitätsmanagementsystem wie in unserem Unternehmen
bedarf der ständigen Weiterentwicklung und anwendungsorientierten Forschung, um den
steigenden Anforderungen der Zukunft gerecht zu werden. Die Europäische Kommission hat
die Vorreiterrolle des Instituts Frankfurt in Deutschland und Europa auf diesem Gebiet erkannt
und entsprechend gefördert: Mit der Leitung europaweiter Projekte im Bereich des
Qualitätsmanagements („EU-Q-Blood-SOP Project“, „EU-Blood-Inspection Project“) werden die
im Institut Frankfurt entwickelten Standards zur Erstellung von Arbeitsanweisungen zwischen 16
europäischen Ländern gemeinsam diskutiert, angepasst, verabschiedet und eingeführt.
17

Forschungsstruktur der Standorte
Im Bereich des Schwerpunktes Stammzellen und Zelltherapie besteht je eine Arbeitsgruppe
im klinischen (PD Dr. med. T. Tonn) und im präklinischen Bereich (PD Dr. med. R. Henschler).
Im Rahmen einer Langzeitsicherheitsbeobachtung nach der Gewinnung allogener
Blutstammzellen von gesunden Fremdspendern werden die Auswirkungen der Vorbehandlung
mit Wachstumsfaktoren (G-CSF) untersucht (Dr. med. M. M. Müller, PD Dr. med. T. Tonn). Bei
der Entwicklung innovativer Zelltherapien des akuten Herzinfarktes ist die Arbeitsgruppe im
Rahmen einer multizentrischen Phase III Studie (REPAIR-AMI) für die GMP-gerechte
Herstellung von Knochenmarkstammzellen zur intrakoronaren Applikation verantwortlich
gewesen und begleitet diesen neuen Therapieansatz nun bis zur klinischen Einführung.
Die adoptive Immuntherapie maligner Erkrankungen mittels einer Natürlichen Killerzelllinie (NK-
92), die gerichtete Antitumorimmuntherapie zur Behandlung des Neuroblastoms mit natürlichen
Killerzellen, eine adoptive Immuntherapie chronischer CMV-Infektionen nach Knochenmark-
oder Stammzelltransplantationen durch Transfusion von hocheffizienten Immunzellen sind
Beispiele der Forschungsschwerpunkte dieser Gruppe. Die genannten Studien sind in mehreren
Bereichen bereits in die klinische Anwendung übergegangen und zeigen deutlich, dass hier
ebenfalls Forschung und Anwendung in der Klinik eng zusammen liegen.
Die Arbeitsgruppe Stammzellbiologie (PD Dr. med. R. Henschler) ergänzt diese
Untersuchungen. Sie arbeitet im präklinischen Bereich mit Hilfe von Tiermodellen. Dabei
untersucht die Gruppe Bedingungen, unter denen Blutstammzellen auch in der Tumortherapie
eingesetzt werden können, indem sie dort die Bildung von Tumor-Blutgefäßen verhindern und
die Blutversorgung im Tumor selektiv unterbinden. Weiterhin fand die Gruppe heraus, dass
sogenannte „mesenchymale Stammzellen“ nach intravenöser Verabreichung einem geregelten
gewebespezifischen „Homing“ unterliegen. Die Kenntnis dieser Mechanismen wird für die
Verbesserung neuer zelltherapeutischer Therapieansätze nutzbar gemacht. Auch maligne
Erkrankungen wie Leukämien werden durch stammzellartige, bösartig veränderte Zellen
ausgelöst. Die Biologie der leukämischen Stammzellen wird in Kooperation mit der
Medizinischen Universitätsklinik Frankfurt näher untersucht, um neue therapeutische Ansätze
zur Behandlung von Leukämien zu finden.
Im Schwerpunkt Transplantationsmedizin und Immungenetik fokussiert die
Forschungsgruppe unter der Leitung von Prof. Dr. med. C. Seidl auf die immunologischen
Mechanismen bei Autoimmunerkrankungen und nach Transplantation solider Organe, wie z. B.
nach Nierentransplantationen, aber auch Knochenmark- und peripheren
Stammzelltransplantationen. In enger Zusammenarbeit mit den klinischen Kollegen der
Universität Frankfurt aus den Kliniken für Kinderheilkunde, Hämatologie und Onkologie,
Nephrologie und Transplantationschirurgie sowie weiteren klinischen Abteilungen werden die
Auswirkungen von Fehlregulationen des Immunsystems bei Autoimmunerkrankungen
untersucht, das Repertoire inhibitorischer Rezeptoren von Killerzellen (KIR) bei Patienten mit
Autoimmunerkrankungen und Patienten nach allogener Stammzelltransplantation beschrieben
und die Bedeutung retroveraler Insertionen im Bereich des HLA-Systems für
Autoimmunerkrankungen untersucht. Ein weiterer Forschungsschwerpunkt dieser Abteilung ist
die Wechselwirkung zwischen kindlichem und mütterlichem Immunsystem in der
Schwangerschaft und die Regulation der immunologischen Toleranz. Das gleichzeitige
Vorhandensein von Spender- und Empfängerstammzellen nach Stammzell- und
Knochenmarktransplantation, der sogenannte Chimärismus und die damit
zusammenhängenden immunologischen Auswirkungen für Patienten nach Transplantationen
sind ein weiterer Forschungsschwerpunkt dieser Arbeitsgruppe.
Der Schwerpunkt Molekulare Pathophysiologie, Diagnostik und Therapie umfasst in
Frankfurt die Arbeiten im Bereich der genetischen Grundlagen angeborener
Gerinnungsstörungen sowie der Gentherapie angeborener monogener Erkrankungen des
Blutes und der Blutgerinnung. Im letztere Bereich sind Arbeitsgruppen (PD Dr. med. T. Tonn;
Dr. med. J. Schüttrumpf) mit der Entwicklung sicherer und effektiver Verfahren zur
gentherapeutischen Behandlung der Bluterkrankheit (Hämophilie) beschäftigt. Eine wichtige
Grundlage hierzu ist die Untersuchung der Expression von rekombinanten Gerinnungsfaktoren
VIII und IX.
Unter der Leitung von Dr. med. C. Geisen beschäftigt sich eine weitere Arbeitsgruppe mit der
Aufdeckung der molekularen Mechanismen des Vitamin K-Stoffwechsels. Dadurch lässt sich die
Behandlung mit „blutverdünnenden“ Vitamin K-Antagonisten wie Marcumar® in der Klinik
18

Forschungsstruktur der Standorte
besser vorhersagen und steuern. Ein weiterer Arbeitsbereich ist die Variabilität von Genen der
Blutgerinnung in der Normalbevölkerung und ihr Einfluss auf die Ausprägung verschiedener
Krankheitsbilder wie Blutungsneigung oder Thromboseneigung und auf die Wirksamkeit der für
die Behandlung von Gerinnungsstörungen verwendeten therapeutischen Substanzen.
Die Arbeitsgruppe „Hämophilie“ unter der Leitung von PD Dr. med. R. Großmann beschäftigt
sich mit klinischen Aspekten von Gerinnungsstörungen, insbesondere bei der schweren
Bluterkrankheit. Weiterhin steht die Verträglichkeit von Gerinnungstherapeutika (speziell von
DDAVP) im Mittelpunkt des wissenschaftlichen und klinischen Interesses. In Kooperation mit
der Kinderklinik der Universitätsklinik Würzburg wird die Rolle von Thrombozyten, Leukozyten
und deren Interaktionen untersucht. Im Mittelpunkt stehen hier die Zell-Zell-Interaktionen und
deren Ausprägung im Normalkollektiv sowie bei Patienten mit entzündlichen Erkrankungen und
bei Patienten nach Stammzelltransplantation.
Prof. Dr. med. E. Seifried
19

Das Institut Heidelberg
Forschungsstruktur der Standorte
Institut für Immunologie
(Ärztlicher Direktor: Univ. Prof. Dr. med. Stefan Meuer)
Institut für Klinische Transfusionsmedizin und Zelltherapie Heidelberg
(Geschäftsführer: Prof. Dr. S. Meuer und Dipl.-Volkswirt M. Stähle)
Im Neuenheimer Feld 305
69120 Heidelberg
Telefon: +49-6221-4000
Telefax: +49-6221-5990
Im Jahr 2006 wurde im Forschungsschwerpunkt Transplantationsmedizin und Immungenetik
das Projekt „Individuell angepasste Immunsuppression nach allogener Transplantation durch
molekulardiagnostisches Immunmonitoring“ bearbeitet.
Ziel dieser Untersuchungen ist die Etablierung einer verbesserten Diagnostik nach
Organtransplantation, welche pathophysiologische Risikofaktoren des einzelnen Patienten
identifiziert, die Abstoßungsreaktionen frühzeitig und sicher erkennt und die durch funktionelle
Analyse des Immunsystems eine individuell adaptierte Immunsuppression ermöglicht. Wir
konnten zeigen, dass das individuelle Risiko von frühen Komplikationen nach
Lebertransplantation schon aus dem Genexpressionsmuster der Reperfusionsbiopsie
feststellbar ist. Durch die quantitative Expressionsanalyse von zentralen Genen der
Immunantwort ist es uns gelungen, den funktionellen Grad der Immunsuppression individuell zu
erfassen. Besonders in der Langzeitbetreuung transplantierter Patienten ist dieses Wissen von
klinischer Relevanz, da Patienten deren Immunsystem durch die Therapie zu stark supprimiert
wird, ein erhöhtes Risiko für gehäufte Infektionen und Tumore haben. Erstmalig ist durch diese
Methode eine Orientierung gegeben, welche eine individuell auf den Grad der
Immunsuppression angepasste Dosierung von Cyclosporin A erlaubt.
Prof. Dr. med. S. Meuer
20

Forschungsstruktur der Standorte
Das Institut Mannheim
Institut für Transfusionsmedizin und Immunologie Mannheim
DRK Blutspendedienst Baden-Württemberg – Hessen gGmbH
Institut Mannheim
(Institutsleitung: Univ. Prof. Dr. med. Harald Klüter)
Friedrich-Ebert-Str. 107
68167 Mannheim
Telefon: +49-621-3706-817
Telefax: +49-621-3706-818
Im Jahr 2006 sind am Institut Mannheim drei Forschungsschwerpunkte innerhalb des
Forschungsprofils des DRK-Blutspendedienst Baden-Württemberg - Hessen mit den folgenden
Themen bearbeitet worden:
Schwerpunkt: Qualitätssicherung in der Blutversorgung
Arbeitsgruppe Pathogeninaktivierung (Dr. Janetzko)
Eines der vorrangigen Themen in diesem Schwerpunkt ist die photochemische
Pathogeninaktivierung von Thrombozytenkonzentraten mittels Amotosalen in Kombination mit
UVA-Bestrahlung. In den vergangenen Jahren wurden Studien für die Beurteilung der
Thrombozytenqualität in-Vitro und in-Vivo durchgeführt. Die Herstellungserlaubnis für diese
Präparate ist uns vom Regierungspräsidium erteilt worden. Der Antrag auf Zulassung beim
Paul-Ehrlich-Institut findet sich z. Zt. in Arbeit.
Daneben wurden neue Prüfverfahren entwickelt, die es ermöglichen, auf der Basis von PCR-
Untersuchungen die erfolgreiche Amotosalen-UVA Behandlung zu dokumentieren.
Aktuell sind Untersuchungen für die Etablierung einer quantitativen Auswertung dieser PCR
Ergebnisse mittels Bioanalyser in Arbeit.
Arbeitsgruppe Molekulare Immunhämatologie (PD Dr. Bugert)
Die Projekte dieser Arbeitsgruppe zielen auf die molekulargenetische Charakterisierung
abgeschwächter Blutgruppeneigenschaften im ABO-System und bei den Rh-Untergruppen.
Schwerpunkt: Stammzellen und Zelltherapie
Arbeitsgruppe (Dr. rer. nat. K. Bieback, Dr. med. X. D. Nguyen) „Zell- und Immuntherapie“
Die Arbeitgruppe fokussiert sich auf die Untersuchung verschiedener Stammzellpopulationen.
Dabei stehen Verfahren zur GMP-konformen Herstellung und Qualitätskontrollen im
Vordergrund. Stammzellen, insbesondere die Interaktion von hämatopoetischen und
mesenchymalen Stammzellen aus Nabelschnurblut, sind ein weiteres Thema. Darüber hinaus
wird ein möglicher therapeutischer Einsatz von mesenchymalen Stammzellen und weiteren
Vorläuferzellen in der Geweberegeneration evaluiert. Die Herstellung und klinische Anwendung
dendritischer Zellen z.B. bei der Behandlung von Tumoren bilden einen weiteren Schwerpunkt
unter der Leitung von Herrn Dr. Nguyen.
Schwerpunkt: Molekulare Pathophysiologie, Diagnostik und Therapie
Arbeitsgruppe Thrombozytenimmunologie (PD Dr. Bugert)
Die Arbeitsgruppe befasst sich in verschiedenen Projekten mit der Identifizierung und
funktionellen Charakterisierung neuer Rezeptoren bei Thrombozyten. Ein wichtiger
Arbeitsschwerpunkt bildet dabei die Microarrayanalyse des thrombozytären Transkriptoms.
Kandidatengene werden durch Exon-Resequenzierung auf DNA-Ebene hinsichtlich
Genvarianten untersucht. Die Häufigkeitsverteilung der Varianten wird dann bei bestimmten
Patientengruppen (mit thromboembolischen Komplikationen) und gesunden Kontrollen
untersucht. Die Untersuchung der molekularen Grundlagen des Aspirin-like Defekt bildet einen
weiteren Schwerpunkt der Arbeitgruppe. Hierbei handelt es sich um ein Kooperationsprojekt,
das durch die Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) gefördert wird.
Prof. Dr. med. H. Klüter
21

Das Institut Tübingen
Forschungsstruktur der Standorte
Institut für Klinische und Experimentelle Transfusionsmedizin
Universitätsklinikum Tübingen
(Institutsleitung: Univ. Prof. Dr. med. H. Northoff)
Zentrum für Klinische Transfusionsmedizin
(Geschäftsführer: Prof. Dr. med. H. Northoff und Dipl.-Volkswirt M. Stähle)
Otfried-Müller-Strasse 4/1
72076 Tübingen
Telefon: +49-7071-81601
Telefax: +49-7071-5040
Die Aufgabenstellung des Zentrums für Klinische Transfusionsmedizin (ZKT) in Tübingen
umfasst die Abnahme und Herstellung von Blutprodukten und die transfusionsmedizinische
Krankenversorgung. In Personalunion geführt wird das für Forschung und Lehre zuständige
Institut für klinische und experimentelle Transfusionsmedizin (IKET). Das Budget des IKET wird
vom ZKT zu ca. 25 % unterstützt.
Die Forschung am ZKT umfasst im Schwerpunkt Stammzellen und Zelltherapie die
Darstellung von Pankreasinselzellen, die zusammen mit der Abteilung Chirurgie entwickelt und
durch die Erteilung einer Herstellungserlaubnis, erstmalig in Deutschland, gekrönt wurde. Im
Rahmen der Anpassung des Herstellungsprozesses an die GMP-Anforderungen wurde u.a. ein
geschlossenes System zur Durchflusskühlung großer Flüssigkeitsmengen entwickelt, das
Blutkultursystem BacT/Alert zur Sterilitätsprüfung von Zelltherapeutika validiert und der
Endotoxinnachweis nach Ph. Eur. etabliert. Weitere Entwicklungsarbeiten werden geleistet bei
der Herstellung eines GMP-geregelten AB-Serums zur Verwendung für Zellkulturen mit
Anwendung beim Patienten. Das Serum wird ebenfalls im Rahmen einer Herstellungserlaubnis
produziert und ist verfügbar.
Am IKET läuft eine breite Palette an weiterer Forschungstätigkeit. Dazu gehört zum einen die
Entwicklung einer diagnostischen Plattform auf Basis von Schwingquarzsensorik. Dieses
BMBF-geförderte Projekt wird in einer breiten Kooperation mit Industrie und anderen
universitären Instituten vorangetrieben. Entwicklungsziele sind derzeit der Einsatz von
Schwingquarzen bei hämostaseologischem Monitoring und in der Malariaforschung. Die
Kernarbeitsgruppe umfasst insgesamt 8 Drittmittelgeförderte Physiker, Chemiker,
Pharmazeuten und Informatiker. Der Höhepunkt in 2006 war die Ausstellung einer
Forschungsplattform auf dem Stand des BMBF auf der Medica.
Als weiteres Forschungsgebiet im IKET läuft und lief in 2006 die Herstellung und der Einsatz
von Genexpressionschips für die Stressforschung. Dieser wurde u.a. auch bei der umfassenden
Untersuchung der Antwort des Organismus auf erschöpfende Ausdauerbelastungen unter
verschiedenen Umgebungsbedingungen eingesetzt, einem weiteren drittmittelgeförderten
Forschungsgebiet des IKET.
Im Rahmen eines weiteren wesentlichen Forschungsgebiets des IKET wird die Präparation,
Purifikation und Funktion von mesenchymalen Stammzellen untersucht, unter anderem in
Interaktion mit Kontrastmitteln. Diesbezüglich wurde im September 2006 in Tübingen von uns in
Zusammenarbeit mit der Pädiatrie ein Kongress veranstaltet, der sehr gut besucht und
angenommen wurde und vermutlich den Beginn einer Serie markiert.
Im Schwerpunkt Transplantationsimmunologie und Immungenetik wurden neue und
bereits bewährte Methoden (LCT, MAIPA, ELISA) bei der Antikörpersuche (HLA-Klasse I, II,
HPA) in verschiedenen Phasen der Nierentransplantationen verglichen. Um die vorgeschaltete
zelluläre Immunaktivierung untersuchen zu können, wird der ELISPOT-Test etabliert, der auch
bei Verdacht auf thrombozytäre Antikörper hilfreich ist.
Prof. Dr. med. H. Northoff
22

Forschungsstruktur der Standorte
Das Institut Ulm
Institut Ulm
(Institutsleitung: Univ. Prof. Dr. med. H. Schrezenmeier)
DRK-Blutspendedienst Baden-Württemberg – Hessen gGmbH
Helmholtzstraße 10
89081 Ulm
Telefon: +49-731-150-0
Telefax: +49-731-150-575
Aufgaben
Das Institut für Klinische Transfusionsmedizin und Immungenetik Ulm (IKT Ulm) versorgt neben
dem Universitätsklinikum Ulm über 130 Einrichtungen mit Blutprodukten, Stammzell- und
Zelltherapiepräparaten und transfusions-medizinischer, immunhämatologischer sowie
transplantationsimmunologischer Diagnostik. Das vom DRK-Blutspendedienst Baden-
Württemberg – Hessen gGmbH und der Universität Ulm gemeinsam getragene Institut für
Transfusionsmedizin der Universität Ulm nimmt die Aufgaben in Forschung und Lehre war.
Entwicklung 2006
Aufbauend auf schon bestehenden Schwerpunkten und Kompetenzen wurden im Institut im
Jahr 2006 die Entwicklungen vor allem in zwei Feldern weiter intensiviert: 1) Molekulare
Diagnostik in den Bereichen Blutgruppenbestimmung, Immungenetik und Immun-
/Hämatopoese-Defekte und 2) Entwicklung von Stammzellpräparaten und Zelltherapeutika zur
klinischen Anwendung.
Im Schwerpunkt Molekulare Pathophysiologie, Diagnostik und Therapie sind die
Arbeitsgruppe „Molekulare Diagnostik erythrozytärer Antigene“, die Arbeitsgruppe
„Transplantationsimmunologie“ und die Arbeitsgruppe „Molekulare Pathophysiologie und
Diagnostik von Immun- und Hämatopoese-Defekten und deren Gentherapie“ aktiv. Zwischen
diesen bestehen methodische Überschneidungen, aber ein komplementäres
Untersuchungsprofil. Die Fragestellungen der jeweiligen Untersuchungen knüpfen an
diagnostische Fragestellungen an, welche schon jetzt zum Leistungsprofil des Instituts zählen
und entwickeln entweder neue Methoden und/oder Ausweitungen der Methoden auf weitere
Parameter. Ein Beispiel ist die Blutgruppendiagnostik, welche als serologische Diagnostik zum
Standard-Repertoire gehört. Die in der Arbeitsgruppe „Molekulare Diagnostik erythrozytäre
Antigene“ gewonnenen Erkenntnisse zur molekularen Grundlage der Blutgruppenantigene,
insbesondere zur genomischen Organisation des Rhesus-Lokus, stellten eine essentielle Basis
für die Entwicklung eines Blutgruppen-Biochips in einem EU-geförderten Kooperationsprojektes
dar. Ein weiteres Beispiel ist die Aufklärung der molekularen Ursache von Defekten der
Blutbildung, wodurch eine gezielte Diagnostik überhaupt erst möglich wird. Gleichzeitig wird
damit auch die Möglichkeit eines Brückenschlags zur Therapie eröffnet. Die in dem Projekt
gewonnen Erkenntnisse definieren die Zielstrukturen für Genkorrekturansätze.
Im Schwerpunkt Stammzellen und Zelltherapie beschäftigen sich die Arbeitsgruppen
„Zelluläre Immuntherapie und Stammzelltransplantation“, „Pathophysiologie und Therapie von
hämatopoetischer Insuffizenz“ und „Deutsches Register für Stammzelltransplantationen“ mit der
Entwicklung, Etablierung und Auswertung von Therapien mit Stammzellen und neuen
Zelltherapeutika. Dabei geht es zum einen um die GMP-gerechte Herstellung von Stammzell-
und Zelltherapiepräparaten, aber auch deren funktioneller Charakterisierung. Zu den
Forschungsaktivitäten gehören die Untersuchungen von Zelltypen wie mesenchymalen
Stammzellen (MSC), welche ein breites therapeutisches Potential besitzen, und der Einsatz von
Knochenmarkzellen, welche schon lange in der Stammzelltransplantation eingesetzt werden, in
neuen Indikationen, z. B. dem akuten Myokardinfarkt. Mit der Anwendung von Stammzellen in
neuen Indikationen bzw. dem Einsatz neuer Zelltherapeutika sind immer auch Fragen zum
Verhalten der Zellen im Organismus verbunden. Um verfolgen zu können, in welchen Geweben
sich die Zelltherapie-Präparate ansiedeln und wie sich die Zellen dort verhalten, wird an
Methoden zur Markierung dieser Zellen durch Transfektion oder Nanopartikel gearbeitet.
23

Forschungsstruktur der Standorte
Weitere Detailinformationen finden sich in der nachfolgenden Kurzzusammenfassung
wesentlicher F&E-Aktivitäten der Arbeitsgruppen im Jahr 2006 und in den ausführlicheren
Einzelprojekt-Beschreibungen.
Die Arbeitsgruppe "Molekulare Diagnostik erythrozytärer Antigene“ (Prof. Dr. W.A. Flegel, Frau
Dr. I. von Zabern) erforscht Zusammenhänge zwischen Genotyp, Phänotyp, Struktur und Funktion
der blutgruppentragenden Proteine, um Transfusionen sicherer und wirtschaftlicher zu
machen.
Die in Ulm entwickelten genetischen Methoden werden einer breiten Anwendung zugeführt. Die
Prototyp-Entwicklung des Blutgruppen-Biochips in einem EU-geförderten Projekt (BloodGen) ist
abgeschlossen. In verschiedenen internationalen Kooperationen wurde die klinische Relevanz
von 11 neuen Rhesus-D-Varianten veröffentlicht. Wir haben die molekulare Basis des Crawford-
Antigens gefunden. Ein Testkit wurde vorgestellt für ein in Ulm nachgewiesenes, klinisch
wichtiges „DEL“-Antigen, welches jeder dritte D-negative Blutspender in Ostasien trägt.
Die Arbeitsgruppe „Transplantationsimmunologie“ (PD Dr. J. Mytilineos, Dr. K. Hirv, A. Vigh)
beschäftigt sich im Schwerpunkt Transplantationsimmunologie und Immungenetik mit der
HLA-Genetik, der Bedeutung der Zytokingenpolymorphismen sowie weiteren
Histokompatibilitäts-fragestellungen bei Transplantationskandidaten. Ein Verfahren zum
Nachweis von Polymorphismen verschiedener Gene (Zytokine, Chemokine, NOD2/CARD15)
mit Luminex-Technologie (Liquid Chip) wurde entwickelt. In Kooperation mit der
transplantationsimmunologischen Abteilung der Universität Heidelberg (Prof. Dr .G. Opelz)
wurde eine Studie über den Einfluss von Polymorphismen im Blutgerinnungssystem (Faktor II,
F.V und MTHFR) in der Nierentransplantation durchgeführt.
Zur Verbesserung von Dauer und Erfolg einer nichtverwandten Stammzellspendersuche wurde
basierend auf den Erfahrungen der Ulmer Sucheinheit ein Suchalgorithmus entwickelt. Zur
Optimierung der Stammzellspendersuche wurde im Institut eine Methode zur hochauflösenden
HLA-Diagnostik durch Sequenzierung entwickelt und im Jahr 2006 zur CE-Zertifizierung geführt.
Eine Reihe neuer HLA-Allele wurde entdeckt, charakterisiert und in der internationalen
Sequenzdatenbank angemeldet.
Weitere Projekte beschäftigen sich mit Entwicklung von Verfahren zur Detektion von HLA-Null-
Allelen, Durchführung eines ELISA-Crossmatch für die Organtransplantation und Evaluation des
Einflusses von Minor-Histokompatibilitäts-Polymorphismen auf die Stammzelltransplantation
In der Arbeitsgruppe "Molekulare Charakterisierung angeborener Immun- und Hämatopoese-
Defekte und deren Gentherapie“ (Dr. K. Schwarz, Dr. D. Niewolik, Dr. U. Pannicke, Dr. F.
Radecke) wurde die molekulare Diagnostik angeborener Immundefekte, angeborener
Autoimmunitätserkrankungen und primärer Erythrozytendefekte (mit Dr. H. Cario, Klinik für
Kinder- und Jugendmedizin, und Prof. emerit. Dr. H. Heimpel) um neu charakterisierte Defekte
ergänzt. Die Patientenanalysen erhellten das Verständnis molekularer Abläufe der Entwicklung
und Funktion von Lymphozyten und Erythrozyten. Die biochemische Analyse von Faktoren
eines bestimmten DNA-Reparatursystems („non- homologous end joining“, NHEJ) wurde
intensiviert.
In Publikationen zur Fortentwicklung der nukleotidgenauen Genkorrektur angeborener
Erkrankungen mit modifizierten Einzelstrang-Oligonukleotiden konnten wir zeigen, dass die
Ausnutzung von DNA-Doppelstrangbrüchen zur Korrektur von Einzelkopie-Genen führt, und
dass mit hoher Wahrscheinlichkeit auch Zellen manipulierbar sein sollten, die keine hohe
Replikationsrate haben (z. B. hämatopoetische Stammzellen). In Zusammenarbeit mit Prof. Dr.
T. Cathomen (Charité, Berlin) werden DNA-sequenzspezifische Nukleasen zur DNA-
Doppelstrangbruchgenerierung und Oligonukleotidmanipulation von Genomen im Rahmen
eines EU-Kooperationsprojekts erprobt.
In der „molekularen Virusdiagnostik“ (Dr. U. Mayr-Wohlfart, Dr. K. Koerner) wurden Untersuchungen
im Rahmen der CE-Zertifizierung der im Institut Frankfurt entwickelten Methode zum
Screening der Blutprodukte auf die transfusionsrelevanten Viren HCV, HIV und HBV
durchgeführt.
Die Arbeitsgruppe "Zelluläre Immuntherapie und Stammzelltransplantation" (Dr. V. Mailänder,
Dr. M. Marx, Dr. P. Reinhardt, Dr. M. Rojewski, Dr. P. Schauwecker, Dr. M. Wiesneth)
beschäftigt sich mit der Weiterentwicklung klinisch anwendbarer Zelltherapeutika.
24

Forschungsstruktur der Standorte
In Kooperation mit den Kliniken für Innere Medizin II und Innere Medizin III werden Patienten mit
akutem Myokardinfarkt im Rahmen einer placebo-kontrollierten, doppelt-blinden Studie autologe
Knochenmarkzellen intrakoronar appliziert. Weiterhin werden Methoden zur nicht-viralen
Transfektion erarbeitet, um Stammzellen zu markieren und in ihrer Funktion zu modulieren.
Verfahren zur GMP-gerechten Ex-vivo-Expansion von mesenchymalen Stammzellen (MSC) für
die klinische Anwendung werden optimiert und die funktionellen Eigenschaften der MSC
untersucht.
Parallel wurde eine Linien-spezifische Chimärismusanalyse nach allogener
Stammzelltransplantation weiterentwickelt.
Zur Markierung von Stammzellen/Zelltherapeutika werden zusammen mit dem Institut für
Organische Chemie III (Prof. Dr. K. Landfester) superparamagnetische Nanopartikel zum nichtinvasiven
Nachweis mit bildgebenden Verfahren getestet.
In der Arbeitsgruppe „Diagnostik und Therapie hämatpoietischer Insuffizienz“ werden im
Rahmen internationaler Studien in Kooperation mit der Klinik für Innere Medizin III Patienten mit
paroxysmaler nächtlicher Hämoglobinurie (Dr. B. Höchsmann) mit innovativen Biologika
therapiert.
Die Datenzentrale des Deutschen Registers für Stammzelltransplantationen (DRST) (Dr. Dr. C.
Müller) konnte in einem von der Deutschen José Carreras Leukämie-Stiftung unterstützten
Projekt die Auswertungen zu den in Deutschland seit 1998 durchgeführten Stammzelltransplantationen
fortsetzen.
Ausblick 2007
Wichtige Projekte für das Jahr 2007 liegen in den beiden Schwerpunkten Entwicklung von
Zelltherapeutika und molekulare Diagnostik:
• Optimierung GMP-gerechter Produktion von mesenchymalen Stammzellen (MSC) für
Studien zur regenerativen Therapie, zur Immunmodulation und zur Durchführung von
Zellmarkierungsstudien in Kooperation mit verschiedenen Kliniken im Universitätsklinikum
Ulm.
• Entwicklung und Erprobung weiterer Nanopartikel zur Markierung und Modulation von
Stammzellen in enger Kooperation mit der Abt.Organische Chemie III der Universität Ulm.
• CE-Zertifizierung des BloodGen-Biochips und Beginn des Routine-Einsatzes zur Genotypisierung
von Blutgruppenmerkmalen.
• Erprobung der Genreparatur mit Oligonukleotiden und Analyse der Genotoxizität dieser
DNA-Korrekturmethode mit und ohne DNA-Bruch.
• Molekularpathophysiologische Analyse von neu aufgeklärten Immundefekten und Anämien.
• Entwicklung weiterer In-vitro-Diagnostika zur Optimierung der Spenderauswahl für die
Stammzelltransplantation, insbesondere Diagnostik von Zytokin-, Chemokin- und KIR-Gen-
Polymorphismen und Untersuchung ihrer Bedeutung für die Verbesserung von
Transplantationergebnissen durch Optimierung von Spenderauswahl
Prof. Dr. med. H. Schrezenmeier
25

1 Qualliitätssiicherung iin der Bllutversorgung
EUBIS
European blood inspection and quality management system
18 Participants from
EU member states:
BE, CZ, DE, EE, FR, IE, IT,
CY, HU, MT, NL, PL, UK
(acceding) new member states:
BG, RO
EFTA states:
IS
26

Qualtiätssicherung in der Blutversorgung
Bakterielle Kontamination von Blutprodukten
Hintergrund und Projektbeschreibung
Die Einführung hochsensitiver Screeningmethoden (Realtime-PCR) reduzierten das Restinfektionsrisiko für HIV-1 und
HCV auf ca. 1:30 Millionen. Dagegen steht ein Risiko für bakteriell Infektionen von 1:2000. Gerade die
Thrombozytenkonzentrate, die bei Raumtemperatur unter ständiger Agitation gelagert werden, stellen für viele
Bakterien nahezu ideale Kulturbedingungen dar. Anders als bei den viralen Infektionsübertragungen besteht bei den
Bakterien die besondere Herausforderung, dass zunächst nur eine sehr geringe Konzentration an Bakterien im
Thrombozytenkonzentrat vorliegt. Der ideale Test verfügt daher über eine extrem hohe Sensitivität und auch Spezifität.
Ferner stellt sich die Frage, ob sich die unterschiedlichen Thrombozytenkonzentrate (Pool-Thrombozytenkonzentrate
und Apheresekonzentrate) bezüglich des bakteriellen Restrisikos unterscheiden. Neben bereits kommerziell erhältlichen
Nachweismethoden bestand eine weitere Aufgabe darin, eigene Schnellmethoden zu entwickeln. Alternativ besteht
jedoch auch die Möglichkeit zur Durchführung einer Pathogeninaktivierung.
Data are reported as number (%). p Values (chi-square test; p values for the four main comparisons with correction for
testing of multiple hypotheses according to Holm32) for potentially positive cultures: ap = 0.001, plasma-PPCs vs.
APCs; bp = 0.02, T-Sol PPCs vs. APCs; cp < 0.001 (not adjusted), pooled PCs (plasma-PPCs and T-Sol-PPCs) vs.
APCs. p Values for confirmed-positive cultures: dp = NS, plasma-PPCs vs. APCs; ep = NS, T-Sol PPCs vs. APCs; fp =
0.42 (not adjusted), pooled PCs (plasma-PPCs and T-Sol PPCs) vs. APCs. † Number of apheresis procedures; in 3,376
apheresis procedures a single product and in 11,822 apheresis 2 units were produced; that is, the overall number of
PCs from apheresis is 27,020. ‡ Two centers tested both APCs and pooled PCs.
Wichtigste Ergebnisse
Es konnte gezeigt werden, dass sich die unterschiedlichen Thrombozytenkonzentrate (Apheresen und
Pool-TKs) nicht bezüglich ihrer bakteriellen Kontaminationsrate unterscheiden. Ferner gab es keine
signifikanten Unterschiede bezüglich des Restinfektionsrisikos zwischen Pool-TKs in Plasma und Pool-
TKs in Additivlösung. Im direkten Vergleich zwischen kommerziell verfügbaren Screeningmethoden
zeichnete sich BacT/Alert aufgrund einer hohen Sensitivität aus. Die hohe Sensitivität ging jedoch einher
mit einer höheren Rate an unspezifischen Befunden. Internationale Untersuchungsergebnisse bezüglich
einer geringen klinischen Effizienz bei der Anwendung von Kulturmethoden konnten bestätigt werden. Es
zeigte sich beim BacT/Alert, dass ca. 50% der reaktiven TKs zum Zeitpunkt des Bakteriennachweises
bereits transfundiert waren. Ferner besteht bei den Kulturmethoden die Gefahr des Probenfehlers.
Alternativ entwickelte Schnellmethoden bieten zwar potentiell die Möglichkeit einer späten Probenziehung,
sind aber zum gegenwärtigen Zeitpunkt noch nicht routinetauglich. Im direkten Vergleich zeichnete sich
die 16s Realtime-PCR Methode gegenüber der FACS-Methode und der Scansystem-Methode durch eine
hohe Sensitivität aus. Dem gegenüber stellt die Pathogeninaktivierung eine gute Alternative dar, mit der
die Sicherheit der Thrombozytenkonzentrate erhöht werden kann, ohne dass es dadurch zu einer
zeitlichen Verzögerung kommt.
Summary
The Research Group initiated a prospective multicenter study to assess prevalence and nature of bacterial
contamination of pooled buffy-coat platelet concentrates (PPCs) and apheresis platelet concentrates (APCs) by routine
screening with a bacterial culture system. In nine centers overall, 52,243 platelet (PLT) concentrates (15,198 APCs,
37,045 PPCs) were analyzed by aerobic and anaerobic cultures (BacT/ALERT, bioMérieux). In 135 PLT concentrates
(PCs; 0.26%), bacteria could be identified in the first culture (0.4% for APCs vs. 0.2% for PPCs; p < 0.001). In 37
(0.07%) of these PC units, the same bacteria strain could be identified in a second culture from the sample bag and/or
the PC unit. The rate of confirmed positive units did not differ significantly between APC (0.09%; 1/1169) and PPC units
(0.06%; 1/1544). Bacteria from skin flora (Propionibacterium acnes, Staphylococcus epidermidis) were the most
prevalent contaminants. Median times to first positive culture from start of incubation were 0.7 and 3.7 days in aerobic
and anaerobic cultures for confirmed-positive units. With a “negative-to-date” issue strategy, most PC units (55%) had
already been issued by time of the first positive culture. The rate of confirmed bacterial contamination of PC units was
low. Nevertheless, clinicians must be aware of this risk. The risk of bacterial contamination does not warrant universal
preference of APCs. It must be questioned whether routine bacterial screening by a culture method can sufficiently
prevent contaminated products from being transfused due to the delay until a positive signal in the culture system and
due to false-negative results.
In a second study a solid-phase scanning cytometer (optimized Scansystem, Hemosystem), fluorescence-activated cell
sorting (FACS) analysis, and 16S RNA in-house nucleic acid testing (NAT) was evaluated by spiking PCs with four
transfusion relevant bacteria (Staphylococcus aureus, Bacillus cereus, Klebsiella pneumoniae, and Escherichia coli ).
Two different inocula (10 colony-forming units [CFUs]/mL and 10 CFUs/bag) were used to simulate real-life conditions.
Samples were taken at 12, 16, 20, and 24 hours after spiking. With the high inoculum, NAT had a 100 percent rate of
positive testing for all four types of bacteria (10/10 replicates) at each time point. With the exception of E. coli, the
27

Qualitätssicherung in der Blutversorgung
sensitivity of FACS and optimized Scansystem was comparable for the high inoculum. With the low inoculum, 60
percent of E. coli, 80 percent of B. cereus, 90 percent of K. pneumoniae, and 100 percent of S. aureus were NATpositive
12 hours after spiking. In contrast, only 20 percent of E. coli, 10 percent of B. cereus, and 70 percent of K.
pneumoniae were FACSpositive with the low inoculum 12 hours after spiking. In summary, the preliminary data revealed
a higher sensitivity for NAT in comparison to FACS and optimized Scansystem under the defined study conditions. To
imitate real-life conditions, further spiking studies with a low inoculum (10 CFUs/bag) and slower growing organisms
should be conducted to examine the sensitivity of available detection systems.
Fig. 1. Platelet concentrates (PCs) spiked with four types of bacteria with 10 CFUs per mL. PCs were spiked with a high
inoculum (10 CFUs/mL). Test samples were taken after 12, 16, 20, and 24 hours and analyzed with the optimized
Scansystem, FACS, and NAT. Before scanning samples with FACS, a 120-min incubation step in a special bacteria
growth medium was completed. The number of bacteria was controlled immediately after spiking and again at each time
point. To determine the bacterial number in each PC, 1 mL was diluted in eight serialized steps, pipetted to Columbia
blood agar plates, and incubated at 37∞C for at least 24 hours. Up to 500 colonies per plate could be counted. If more
than 500 colonies were identified, the plate was considered uncountable and the next dilution step was analyzed. Bars
indicate CFUs per mL ± 1 SD.
Standort Frankfurt, Multicenter Studie der DRK Blutspendedienste
Arbeitsgruppe Bakterielle Kontamination von Blutprodukten
Projektleiter Prof. Dr. E. Seifried
Mitarbeiter PD Dr. M. Schmidt, Kai Hourfar
Kooperationen DRK Forschungsgemeinschaft unter Beteiligung der
Blutspendedienste des
Bayerischen Roten Kreuzes
DRK Nord-Rhein-Westfalen
DRK Niedersachsen (NSTOB)
Förderung DRK-Blutspendedienst Baden-Württemberg - Hessen gGmbH
Laufzeit des Projektes 01.02.2004 - 31.03.2006
Weitere Informationen
• Schmidt M, Hourfar MK, Wahl A, et al. Fluorescence quencher improves SCANSYSTEM for
rapid bacterial detection. Vox Sang 2006;90(4):276-8.
• Schmidt M, Hourfar MK, Nicol S-B, et al. A comparison of three rapid bacterial detection
methods under simulated real-life conditions. Transfusion 2006;46(8):1367-73.
• Schmidt M, Hourfar MK, Nicol SB, et al. FACS technology used in a new rapid bacterial
detection method. Transfusion Medicine 2006; 16(5):355-361.
28

Qualtiätssicherung in der Blutversorgung
Prävalenz von Bakterien in Pool- und Apherese-
Thrombozytenkonzentraten und Strategien zur Reduktion des
Transfusionsassoziierten Sepsisrisikos
Hintergrund und Projektbeschreibung
Dies ist eine Studie der Forschungsgemeinschaft der Blutspendedienste. In einer prospektiven
Untersuchung werden mehr als 50.000 Thrombozytenkonzentrate auf bakterielle Kontamination
untersucht. Der Standort Ulm beteiligte sich an dieser Studie durch Sterilitätstestung von 6.000
Pool-Thrombozytenkonzentraten mit additiver Lösung.
29
Art des
Thrombo-
Zyten-
Präparates
APC
Plasma
PPC
T-Sol PPC
Gesamt
Gesamtzahl
untersuchter
Präparate
15.198 (29.1%)*
22.044 (42.2%)
15.001 (28.7%)
52.243 (100 %)
P-Werte: (Chi-square test)
Anzahl
der
Zentren
6
3
2
9†
Ergebnisse der Sterilitätstestung
Falsch positiv
n (%)
54 (0.36%)
54 (0.24%)
39 (0.26%)
147 (0.28%)
Potentiell
positiv
n (%)
48 (0.32%) ║
26 (0.12%)‡
║
24 (0.16%)§║
98 (0.19%)
Potentiell positive Kulturen: ‡
p = 0.001 Plasma PPC vs. APC
§ p = 0.02 T-Sol PPC vs. APC
║ p < 0.001 (not adjusted) Pooled PC (Plasma PPC and T-Sol PPC) vs. APC
Bestätigt positive Kulturen : ¶
p = n.s. Plasma PPC vs. APC
** p = n.s. T-Sol PPC vs. APC
† † p = 0.42 (not adjusted) Pooled PC (Plasma PPC and T-Sol PPC) versus APC
Anzahl untersuchter Thrombozytenkonzentrate und Anteil positiver Ergebnisse
Bestätigt
positiv
n (%)
13 (0.09%) † †
16 (0.07%) ¶
† †
8 (0.05%)**
37 (0.07%)
† †
Wichtigste Ergebnisse
In 52.243 untersuchten Thrombozytenkonzentraten betrug der Anteil bestätigt positiver
Einheiten 0,07 %. Dabei zeigte sich kein signifikanter Unterschied in der Kontaminationsrate
zwischen Apherese-Thrombozytenkonzentraten (0,09 %) und Pool-Thrombozytenkonzentraten
aus Buffycoat (0,06 %). Bakterien der Hautflora (Propionibacterium acnes; Staphylococcus
epidermidis) waren die am häufigsten nachgewiesenen Kontaminanten. Die mediane Zeit bis
zur ersten positiven Kultur vom Beginn der Inkubation betrug 3,7 Tage.

Qualitätssicherung in der Blutversorgung
Summary
In this prospective study of the „Forschungsgemeinschaft der Blutspendedienste“ overall 50.243
platelet concentrates PC were analysed by aerobic and anaerobic cultures. The rate of
confirmed positive PC-units was 0.07 %. The rate of confirmed positive units did not differ
significantly between apheresis PCs (0.09 %) and pooled PC-unit (0.06 %). Bacterial from skin
flora (Propionibacterium acnes; Staphylococcus epidermidis) were the most prevalent
contaminants. Median time to first positive culture from start of incubation was 3.7 days. With a
“negative-to-date” issues strategy the majority of PC units (55 %) had already been issued by
time of the first positive culture.
Standort Ulm und Frankfurt
Arbeitsgruppe Bakterielle Kontamination von Thrombozytenkonzentraten
Projektleiter Prof. Dr. H. Schrezenmeier
Mitarbeiter Frau Dr. B. Höchsmann, Dr. K. Koerner, Dr. M. Wiesneth
Kooperationen Dr. Schmidt, Dr. Sireis, Prof. Seifried, Institut für
Transfusionsmedizin Frankfurt
Weitere Institute im Rahmen der Forschungsgemeinschaft der
DRK-Blutspendedienste
Förderung Forschungsgemeinschaft der DRK-Blutspendedienste
Laufzeit des Projektes 2004 – 2006
Weitere Informationen
• Schrezenmeier H., Walther-Wenke G., Müller T.H., Weinauer F., Younis A., Holland-Letz T.,
Geis G., Asmus J., Bauerfeind U., Burkhart J., Deitenbeck R., Förstemann E., Gebauer W.,
Höchsmann B., Karakassopoulos A., Liebscher U.-M., Sänger W., Schmidt M., Schunter F.,
Sireis W., Seifried E.: Bacterial contamination of platelet concentrates: Results of a
prospective multicenter study comparing pooled whole blood-derived platelets and
apheresis platelets. Transfusion 47:644-652 (2007)
30

Qualtiätssicherung in der Blutversorgung
Blood and organ transmitted infectious agents (BOTIA Studie)
Hintergrund und Projektbeschreibung
Vermehrte Anstrengungen in den vergangenen Jahren in Bezug auf Spenderselektion und auch
der Implementierung von modernen Screeningmethoden führten zu einer wesentlichen
Zunahme an Sicherheit. Dennoch bleibt ein potentielles Restrisiko, welches auch durch neue
Pathogene bedingt ist, die derzeit nicht in die Routinediagnostik eingeschlossen sind. So
breitete sich das West-Nil-Virus in den USA epidemisch Anfang dieses Jahrtausends von der
Ost- zur Westküste aus und führte dazu, dass eine West-Nil-PCR in den USA eingeführt wurde.
Andere neue Pathogene, wie zum Beispiel SARS oder H5N1, spielen in der
Transfusionsmedizin nur eine geringe Rolle, da der Hauptinfektionsweg oral erfolgt.
In Vorbereitung auf neue bisher unbekannte Pathogene wurde eine europäische Studie initiiert,
in der Proben-Paare zwischen Spender und Empfänger gebildet werden. Unter Beteiligung von
sieben europäischen Ländern sollen insgesamt 30.000 Spender-Empfänger-Paare gewonnen
werden. Dabei werden beim Empfänger eine Blutentnahme vor der Transfusion sowie zwei
weitere Entnahmen nach der Transfusion entnommen. Im Anschluss werden alle Proben mit
RAPD-Primern auf DNA untersucht. Im Falle einer neuen Epidemie werden die Proben erneut
herangezogen, um zeitnah untersuchen zu können, ob dieses Pathogen zum einen damals
schon in der Population vorhanden war und zum anderen eine transfusionsmedizinische
Relevanz besteht. Bei der Identifizierung von neuen Pathogenen sollen die Proben auch für die
Entwicklung von neuen diagnostischen Tests genutzt werden.
Ausbreitung von neuen Pathogenen weltweit. Während einige Viren, wie zum Beispiel das West Nil Virus, sich lokal auf
ein Gebiet fokussieren, breiten sich andere Viren, wie zum Beispiel das SARS Virus, innerhalb weniger Tage weltweit
aus.
Wichtigste Ergebnisse
Die Studie wurde im Jahr 2006 gestartet und befindet sich zurzeit noch in der Phase1, die darin
besteht, die Spender-Empfänger-Paare zu sammeln.
31

Qualitätssicherung in der Blutversorgung
Die BOTIA Studie verläuft in insgesamt 5 Phasen. Nach dem Probensammeln (Phase 1), dem Aufbau einer Datenbank
(Phase 2) und dem unspezifischen Screening mit RAPD Primern (Phase 3) werden in den Phasen 4 und 5 die Entwicklung
von neuen diagnostischen Untersuchungstests angestrebt, sofern neue Pathogene innerhalb der Studie detektiert werden.
Standort Frankfurt, Multicenter Studie der Europäischen Union
Arbeitsgruppe BOTIA Studie
Projektleiter Prof. Dr. E. Seifried
Mitarbeiter PD Dr. M. Schmidt, Kai Hourfar
Kooperationen
Förderung Europäische Union (SP23-CT-2006-006487)
Laufzeit des Projektes 01.06.2006 - 30.05.2009
32

Qualtiätssicherung in der Blutversorgung
Prävalenz von Parvovirus B19 bei Blutspendern
Hintergrund und Projektbeschreibung
Parvovirus B19 wurde zum ersten Mal 1975 in einem Blutprodukt von einem klinisch gesunden
Spender entdeckt. Obwohl der Hauptinfektionsweg über Tröpfcheninfektionen verläuft, sind in
der Literatur Übertragungen durch Blutprodukte beschrieben worden. Beim Parvovirus B19
handelt es sich um ein kleines nicht umhülltes Virus mit einem Durchmesser zwischen 18 und
26 mm. Aufgrund der fehlenden Lipidhüllen lässt es sich nur schwer inaktivieren. Infektionen
sind 20% asymptomatisch oder gehen mit milden Symptomen wie eine vorübergehende Rötung
einher. In seltenen Fällen kann sich auch eine Vaskulitis, Myokarditis, Glomerlusonephritis und
eine Erythroblastopenie bilden. Das Virus befällt die erythrozytären Vorläuferzellen und induziert
in diesen den programmierten Zelltod (Apoptose). Gerade während einer Schwangerschaft, für
Neugeborene oder immunsupprimierte Menschen besteht somit eine größere Gefahr.
Inzidenz von B19 positiven Konserven mit einer Konzentration >105IU/ml. Es zeigt sich eine undulierende Zunahme
von Februar bis Juni sowie im Jahr 2004.
Wichtigste Ergebnisse
Seit April 2000 wurden alle Blutspenden mit Hilfe einer In-House Realtime-PCR Methode auf
Parvoviren B19 untersucht. Positive Blutspenden mit einer Viruskonzentration größer 105 IU/ml
werden gesperrt. Spender mit einer Viruskonzentration kleiner 105 IU/ml in der Pool-PCR
wurden nicht aufgelöst. In einer prospektiven Studie wurden 50 B19 positive Spender über 1
Jahr gemonitort und auch auf B19 Antikörper untersucht. Dabei zeigte sich, dass Spender mit
einer hohen Viruslast (in der Anfangsphase einer Infektion) nur sehr selten neutralisierende
Antikörper (VP-2 Antikörper) aufwiesen, wohingegen Spender mit einer geringen
Viruskonzentration ausschließlich auch neutralisierende Antikörper besaßen. Es zeigte sich
somit, dass man auf die Auflösung von schwach positiven Spenderpools aufgrund der
Anwesenheit von neutralisierenden Antikörpern verzichten kann, ohne dadurch eine
Sicherheitslücke bei den Blutprodukten zu bekommen. Diese Aussage soll in einer
retrospektiven Studie in Zusammenarbeit mit dem IKT Ulm durch Untersuchungen bei
Empfängern von B19 virämischen Blutprodukten verifiziert werden.
33

Qualitätssicherung in der Blutversorgung
Summary
Although the main transmission pathway of B19 is normally via the respiratory route, several
transfusion-transmitted infections have been reported. In order to increase blood safety, all
blood donations to our blood donor service have been screened by a B19 mini-pool real-time
NAT since April 2000 and from additional customers since summer 2003.
Study design: In total, 2.8 million donations from Europe were screened for B19 by real-time
mini-pool NAT. A subgroup of 50 B19 positive donors was screened for B19 IgG and IgM
antibodies and B19 DNA over a six month period. The results were compared to those of 100
B19 DNA negative donors.
Results: Data accumulated over the last six years indicates massive epidemics, in spring and
summer 2004 and 2005. In total, the incidence was 11.06 and 192.79 per 100,000 donations
with virus loads over 10 5 and below 10 5 IU/mL, respectively. Median virus concentration in the
case group was 4.85X10 7 IU/mL at time point T0 and reduced to 4X10 2 IU/mL at the next
donation (three months later). Neutralizing antibodies (VP2) were detected in all donations if
virus load was reduced to less than 10 5 IU/mL.
Conclusion: The release of B19 positive blood products with a concentration 10 5 IU/mL), some of which did not contain
neutralizing antibodies, were discarded in order to protect at risk persons.
Abfall der Viruskonzentration über den Beobachtungszeitraum von 6 Monaten. Im gleichen Zeitraum wurde ein Anstieg
an neutralisierenden Antikörpern (VP-2) beobachtet.
Standort Frankfurt
Arbeitsgruppe Molekulare Virussicherheit
Projektleiter PD Dr. M. Schmidt
Mitarbeiter Kai Hourfar
Kooperationen IKT Ulm Prof. Dr. H. Schrezenmeier, Frau Dr. Mayr-Wohlfart
Förderung DRK-Blutspendedienst Baden-Württemberg - Hessen gGmbH
Laufzeit des Projektes 01.08.2006 - 31.12.2007
34

Qualtiätssicherung in der Blutversorgung
Prävalenz von Anti-HBc bei Blutspendern
Hintergrund und Projektbeschreibung
Obgleich das transfusionsbedingte beobachtete Restinfektionsrisiko bezüglich HIV-1 und HCV Infektionen aktuell mit 1
zu 31 Millionen angegeben wird, liegt das Restinfektionsrisiko bezüglich Hepatitis B Infektionen um ca. 1 log Stufe
höher bei 1:620.000. Die Ursache liegt zum einen an der Biologie des Virus. Während die genomische
Verdoppelungszeit von HCV nur 10 h und für HIV nur 17 h beträgt, verdoppelt sich das HB-Virus nur alle 2,56 Tage.
Ferner ist die Infektiösität von HBV gegenüber HCV und HIV-1 deutlich erhöht. Dies führt dazu, dass man für die HBV
Diagnostik einen sehr sensitiven Screeningtest benötigt. Die Einführung der Mini-pool-PCR in das Blutspenderscreening
1997 detektierte bei einer Untersuchung von mehr als 31 Millionen Spenden 43 HBV DNA positive Proben, die HBsAg
negativ waren. Allerdings waren ca. 50% dieser Spenden auch Anti-HBc reaktiv. Seit Oktober 2006 ist das Screening
mit Anti-HBc gesetzlich vorgeschrieben. Spenden die Anti-HBc reaktiv sind werden zusätzlich mit einer Einzel-PCR mit
erhöhter Sensitivität (Votum 31

Qualitätssicherung in der Blutversorgung
Analysis of 188 antibody to hepatitis B core antigen (anti-HBc)-reactive samples: comparison between nine anti-HBc
assays. Anti-HBc assays were divided into competitive (Murex, AxSYM, PRISM® HBcore, PRISM® HBc, COBAS
Immulite and Behring) and non-competitive (ADVIA and Ortho) assays. Sample cut-off values (S/Co) differed
significantly between anti-HBc-only reactive samples and anti-HBc + antibody to hepatitis B envelope antigen (anti-
HBe)-reactive samples.
Summary
Background and Objectives: Since voluntary introduction of hepatitis B virus (HBV) minipool nucleic acid amplification
technology (NAT) at the German Red Cross, the expected residual risk of a transfusion-associated HBV infection has
been estimated to be 1:500 000 – about 10 times higher than for human immunodeficiency virus (HIV) or hepatitis C
virus (HCV) infection. Donors demonstrating chronic positivity for antibody to hepatitis B core antigen (anti-HBc),
negativity for hepatitis B surface antigen (HBsAg) and polymerase chain reaction (PCR)-negative with a low virus load
are a major cause of this increased risk.
Materials and Methods: Ten-thousand blood donors from our blood-donation centre were screened for anti-HBc using
the current PRISM ® HBc and the new PRISM® HBcore assay to evaluate the diagnostic sensitivity and specificity of
these tests. PRISM® HBcor PRISM® HBcore-reactive samples were further analysed using seven additional tests for
anti-HBc, two tests for antibody to hepatitis B surface antigen (anti-HBs), one test for antibody to hepatitis B envelope
antigen (anti-HBe) and three HBV NAT assays.
Results: From a total of 10 000 donors, nine and 14 samples were reactive only in the PRISM® HBc and the PRISM®
HBcore, respectively, whereas 165 samples were reactive in both anti-HBc assays. Further analysis of these 188 anti-
HBc-reactive specimens in a total of nine different anti-HBc assays revealed concordant results for 162 (86·2%)
secimens. Sample cut-off values for anti-HBc were significantly (P < 0·01) lower for anti-HBc-only reactive samples
compared with specimens that were also reactive for anti-HBs or anti-HBe.
Conclusions: Both PRISM anti-HBc assays revealed that ≈ 1·8% of non-prescreened blood donors from Germany
were reactive for anti-HBc. Although sensitivity was comparable between both assays, specificity was increased
significantly with the PRISM® HBcore. High anti-HBc sample cut-off values were indicative for reactivity in other HBV
parameters and for concordant results in the nine different anti-HBc assays. Look-back investigations are necessary to
estimate the infection risk both of anti-HBc-only positive and of anti-HBc/anti-HBs-positive blood transfusions..
Standort Frankfurt,
Arbeitsgruppe Molekulare Virussicherheit
Projektleiter PD Dr. M. Schmidt
Mitarbeiter Kai Hourfar
Förderung DRK-Forschungsgemeinschaft
Laufzeit des Projektes 01.01.2004 - 31.12.2007
Weitere Informationen
• Schmidt M, Nubling CM, Scheiblauer H, Chudy M, Walch LA, Seifried E, Roth WK, Hourfar MK. Anti-HBc
screening of blood donors: a comparison of nine anti-HBc tests. Vox Sang. 2006 Oct;91(3):237-43.
36

Qualtiätssicherung in der Blutversorgung
Entwicklung und Evaluation eines automatisierten
Wägemoduls für die NAT-Pooltestung
Hintergrund und Projektbeschreibung
Seit dem Beginn der NAT-Testung in den DRK-Blutspendediensten Ende der 1990er Jahre bis zum
heutigen Tage wurden die NAT-Testverfahren stetig verfeinert, um die virale Sicherheit der Blutprodukte
zu steigern. Durch die Einführung der Real-time-PCR sowie durch die Mitführung von internen Kontrollen
sowie Positivkontrollen ist der Prozess der NAT-Testung heute ein hochgradig überwachter Prozess.
Invalide Testresultate können anhand der Ergebnisse der Reaktionskontrollen zuverlässig erkannt werden.
Lediglich bei dem Teilprozess der Poolings – worunter das Zusammenfassen von mehreren
Einzelspenden zu einem sogenannten Minipool mit Hilfe von Pipettierrobotern verstanden wird – konnten
seit den Anfangstagen der NAT-Testung keine substanziellen Fortschritte hinsichtlich einer umfassenden
Dokumentation und Überwachung erzielt werden.
Bei Anwendung der Minipool-Testung ist es unerlässlich, dass ein ausreichendes Plasmavolumen jeder
Blutspende zuverlässig in einen Minipool dispensiert wurde. Andernfalls besteht die Gefahr, dass eine
virämische Blutspende aufgrund eines negativen Ergebnisses eines Minipools freigegeben wird, der eine
für einen Nachweis nicht ausreichende Menge Plasma eines infizierten Spenders enthielt.
Ziel des Projektes war es, in enger Kooperation mit der Firma Tecan das Konzept einer automatisierten
Feinwaage zu evaluieren, Schwachstellen des Konzeptes zu identifizieren und ein routinetaugliches
gravimetrisches Testverfahren bis zu seiner Markteinführung zu begleiten..
Automatisiertes Wägemodul Te-PoolSafeTM ermöglicht die gravimetrische Überprüfung jedes einzelnen
Pipettierschrittes zu den Pool-Gefäßen
Wichtigste Ergebnisse
Auf Basis der im Rahmen dieser Studie gewonnenen Erkenntnisse konnte seitens der Firma
Tecan ein routinetaugliches Wägemodul für die Überwachung des Poolings entwickelt werden.
Die Feinwaage, die auf der Arbeitsfläche des Pipettierroboters platziert wird, hat eine
Genauigkeit von ca. ± 2mg und dokumentiert jeden einzelnen Pipettierschritt zu einem Minipool.
Abweichungen der dispensierten Menge vom vorgegebenen Wert können aufgrund der
Genauigkeit des Moduls sicher identifiziert werden. Fehlerhaft pipettierte Proben können durch
Anbindung des Moduls an das LIMS direkt von einer weiteren Verarbeitung ausgeschlossen
werden. In der Studie konnte belegt werden, dass das System in der Lage ist, fehlerhafte
Pipettierschritte zu detektieren, welche nicht durch die bisherigen Sicherheitsfunktionen der
Pipettierroboter erkannt wurden. So wurden unter 10.156 pipettierten Plasmaproben
37

Qualitätssicherung in der Blutversorgung
fortgeschrittenen Alters (3-7 Tage) 18 fehlpipettierte Proben ausschließlich das neu entwickelte
Wägemodul identifiziert. Jedoch wurde ebenfalls offenkundig, dass bei dem bisher
angewandten Pooling-Procedere die Frequenz solcher sicherheitsrelevanter Pipettierfehler
extrem selten ist. Zudem wird in der Routinetestung zusätzlich eine visuelle Kontrolle von
Archivplatten durchgeführt, welche ebenfalls geeignet ist, Pipettierfehler bei dem
Poolingprozess zu identifizieren. Nichtsdestotrotz stellt das Verfahren einen erheblichen
Fortschritt, vor allem auf die Dokumentation des Poolingprozesses bezogen, dar.
Summary
When performing minipool-testing of blood donations for transfusion transmissible viruses, it is
crucial to correctly dispense plasma from each donation into the pools. However, concerns
regarding the monitoring and documentation of the pooling process exist.
A balance module with a tube holder has been developed, which can be easily integrated into
liquid handling platforms. The existing software monitors and evaluates every single dispensing
from primary samples to the minipool to confirm liquid arrival. The weighing accuracy of the
balance module is approx. 2 mg per dispensing episode.
10,156 blood donations were tested on a Tecan Genesis RSP pipetting system. 31 donations
were not pipetted because the pipetting workstation identified a clot or sample shortage in the
primary tube. The balance module exclusively detected another 18 mispipettings, which were
outside of the acceptance criteria of 100 +/- 10%. The mean pipetted volume for these samples
was 34.2 µl (range 0 – 87 µl). Visual inspection of the corresponding primary tubes showed
blood clots, short sample or no apparent cause. The average deceleration of the pooling
process, using the balance, was determined to be about 22%.
With the novel liquid arrival check system, complete and consistent process documentation of
pooling for NAT-testing is feasible. It enables blood banks to monitor and compare every single
dispense made with predefined, required volumes. Results can be transferred to the laboratory
information management system (LIMS) for automated selective exclusion of inaccurately
dispensed samples...
Standort Frankfurt,
Arbeitsgruppe Sicherheit von Blutprodukten
Projektleiter Apotheker Kai Hourfar / PD Dr. med. M. Schmidt
Mitarbeiter Apotheker Kai Hourfar; Lucy Reichelt (MTA)
Kooperation Tecan Schweiz AG
Förderung Tecan Schweiz AG
Laufzeit des Projektes 01.06.2005 - 31.12.2006
Weitere Informationen
• Hourfar MK, Koller M, Roth WK, Kehrli R, Seifried E, Schmidt M. Balance module allows
consistent monitoring and documentation of the pooling process for nucleic acid
amplification technology testing. Vox Sanguinis in press.
38

Qualtiätssicherung in der Blutversorgung
Dokumentation der photochemischen Pathogeninaktivierung
von Thrombozytenkonzentraten unter Verwendung von
Amotosalen und UVA Licht mittels PCR und Bioanalyzer
Hintergrund
Mit der Einführung photochemisch behandelter, pathogeninaktivierter Thrombozytenkonzentrate
in die Routine stellt sich die Frage nach einer möglichen Qualitätskontrolle, die die Effizienz
dieses Verfahrens dokumentiert.
Die bisherigen Möglichkeiten beschränken sich auf die Messung der Bestrahlungsdauer und –
intensität des UVA Lichts, sowie der Bestimmung des Amotosalengehalts und der
Photoprodukte mittels HPLC-Methode. Da diese Messmethode sehr komplex und aufwendig ist,
kann sie z. Zt. nur in einem Speziallabor durchgeführt werden.
Vorergebnisse
Wir konnten in Vorarbeiten zeigen, das mittels PCR-Verfahren die Effizienz der
Pathogeninaktivierung dokumentiert werden kann. Hierfür haben wir ein PCR System unter
Verwendung von mitochondraler DNA etabliert:
Das PCR-System besteht zum einen aus einem Fragment, das klein genug ist, damit statistisch
gesehen Kreuzvernetzungen zwischen Genom und Amotosalen ausbleiben und somit
unabhängig von der photochemischen Behandlung diese Sequenz in der PCR amplifiziert
werden kann. Dieses Fragment dient als interne Kontrolle zum Nachweis einer korrekten PCR.
Zum anderen haben wir ein Fragment ausgewählt, dass groß genug ist, damit
Kreuzvernetzungen zwischen Genom und Amotosalen stattfinden. Diese Kreuzvernetzungen
bedingen eine Inhibition der PCR, so dass die korrekt stattgefundene photochemische
Behandlung nachgewiesen wird.
Bisher erfolgte die qualitative Auswertung der PCR Ergebnisse anhand der
Agarosegelelektrophorese.
Ziel der Untersuchungen
Mit den aktuellen Untersuchungen soll eine quantitative Auswertung der PCR-Ergebnisse
mittels Bioanalyser etabliert und standardisiert werden, mit dem Ziel einen Cut off Wert zu
definieren, ab dem die photochemische Behandlung als effizient angesehen werden kann.
39
A
Kleines Fragment
B
Kleines Fragment
Vor
PCT
Großes Fragment
Nach
PCT
Großes Fragment
Abbildung A: Auswertung der PCR Ergebnisse aus einer Probe vor photochemischer Pathogeninaktivierung.
Darstellung des kleinen Fragmentes, d.h. der internen PCR Kontrolle zum Nachweis der korrekten PCR sowie des
großen Fragmentes, d.h. dem Amplicon, dass den Nachweis für die korrekte Behandlung erbringen soll. In dieser Probe
lassen sich beide Fragment nachweisen. Abbildung B: Auswertung der PCR Ergebnisse aus einer Probe nach
photochemischer Pathogeninaktivierung. Darstellung des kleinen Fragmentes, d.h. der internen PCR Kontrolle zum
Nachweis der korrekten PCR sowie des großen Fragmentes, d.h. dem Amplicon, das den Nachweis für die korrekte
Behandlung erbringen soll. In dieser Probe lässt sich das große Fragment als Zeichen der stattgefundenen Amotosalen-
Genom-Kreuzvernetzung deutlich abgeschwächt nachweisen

Qualitätssicherung in der Blutversorgung
Wichtigste Ergebnisse
Wir konnten bisher zeigen, dass die Auswertung der PCR Ergebnisse mittels Bioanalyser
möglich ist. Der Cut off Wert (Inaktivierungsfaktor) berechnet als Quotient aus der „area under
the curve“ der beiden Fragmente vor und nach der photochemischen Behandlung weist
allerdings noch eine große Streubreite auf.
P1
Kleines Fragment
P1
P2
P2
Großes Fragment
Inaktivierungsfaktor:
P2 : P1
P2 : P1
Nach PCT
Vor PCT
Die beiden Kurvendarstellungen einer Probe vor photochemischer Behandlung (rot) und nach photochemischer
Behandlung (blau) überereinander gelegt: Aus der „area under the curve“ der beiden Fragmente vor und nach der
photochemischen Behandlung kann ein Quotient berechnet werden (Inaktivierungsfaktor).
Summary
We could demonstrate that the bioanalyser is compatible for documentation of the PCR results.
Until now the investigations show a wide range for a cut off value estimated from values gained
from samples taken after versus before photochemical treatment.
Standort Mannheim
Arbeitsgruppe Sicherheit in der Hämotherapie
Projektleiter Dr. med. Karin Janetzko
Mitarbeiter PD. Dr. rer. nat. Peter Bugert
Weitere Informationen
• Bruchmüller I, Janetzko K, Bugert P, Mayaudon V, Corash L, Lin L, Klüter H.:PCR inihibition
assay documenting the amotosalen-based photochemical pathogen inactivation process of
platelet concentrates. Transfusion 2005;45:1464-14672
40

Qualtiätssicherung in der Blutversorgung
Einfluss der Pathogeninaktivierung von gefrorenem
Frischplasma (GFP) mittels Amotosalen und UVA-Bestrahlung
auf die Gerinnungsaktivität
Hintergrund und Projektbeschreibung
Das stetige globale Auftreten neuer Pathogene, die die Sicherheit von Blutprodukten bedrohen,
stellt die Blutspendedienste vor die Notwendigkeit, ständig neue Testverfahren zu etablieren.
Eine mögliche Alternative zur immer komplexer werdenden Testung stellt die Inaktivierung von
Pathogenen im Blut dar, wobei Qualität, Sicherheit und Funktion der Blutprodukte nicht
beeinträchtigt werden darf. Weiterhin muss sich die Methode in die Produktions- und
Freigabeabläufe eines modernen Blutspendedienstes integrieren lassen.
Mit dem von der Firma Cerus entwickelten Intercept TM -System steht ein CE-zertifiziertes
Pathogeninaktivierungsverfahren für Thrombozytenkonzentrate und Frischplasma zur
Verfügung. Ziel dieser Studie ist es, den Einfluss dieses Pathogeninaktivierungsverfahrens, das
auf dem Zusatz von Amotosalen, einem synthetischen Psoralen, mit anschließender UVA-
Bestrahlung und nachfolgender Absorption des residualen Amotosalens und seiner
Fotoprodukte beruht, auf die Gerinnungsparameter von gefrorenem Frischplasma zu
untersuchen. Die dreiarmige Studie wird in der Abteilung Produktion des Institutes Frankfurt
unter Routinebedingungen durchgeführt, um die Vereinbarkeit der neuen Abläufe mit den
bisherigen Routinearbeits-schritten zu untersuchen.
Jeweils 650 ml Frischplasma wird entweder (Arm A) von acht gesunden freiwilligen Plasmapheresespendern
gewonnen und innerhalb 8h verarbeitet oder (Arm B) durch Zusammenführen
von achtmal je drei AB0- und Rh-gleichen, aus Vollblut gewonnenen Plasmen bereitgestellt.
Während in Arm B die Weiterverarbeitung nach 8h erfolgt, werden in Arm C die acht
Poolplasmen erst nach einer 22-stündigen Lagerung bei Raumtemperatur weiterverarbeitet.
Nach der photochemischen Pathogeninaktivierung werden die Plasmen in 200ml-Fraktionen
geteilt und für sechs Wochen bei – 40°C tiefgefrore n gelagert.
Proben für die Gerinnungsanalysen werden vor Beginn der gesamten Prozedur, nach der
Pathogeninaktivierung (= vor dem Einfrieren) und nach sechs Wochen Tiefkühllagerung
untersucht.
Wichtigste Ergebnisse
Die beschriebene Methode der Pathogeninaktivierung mittels Amotosalen und UVA-Bestrahlung
von aus Vollblutspenden bzw. mittels Plasmapherese gewonnenem gefrorenem Frischplasma
(GFP) lässt sich problemlos in die Routinearbeitsabläufe eines Großblutspendedienstes
integrieren. Die Qualität und Funktionalität des GFP bleibt unter dieser
Pathogeninaktivierungsmethode weitestgehend erhalten. Somit besteht mit diesem Verfahren
die Möglichkeit, dieses Verfahren im Blutspendedienst im größeren Maßstab zu etablieren.
Summary
Pathogen inactivation of frozen plasma using amotosalen + UVA does not significantly influence
coagulation parameters with the exception of FVIII. The decrease in FVIII activity might be
explained in part by an additional freeze-thawing cycle included in the protocol due to technical
reasons. Increased TAT levels, especially in arm C, were not reflected in decreased AT activity
or an increase in other markers of coagulation activation, but indicate continuous, although
moderate activation of the coagulation cascade during storage time.
The described inactivation procedure for whole blood derived and apheresis FP can be
performed in a large blood bank setting without significant decreases in coagulation factor
activities and thus without major impairment of the functional capacity of therapeutic plasma.
41

Qualitätssicherung in der Blutversorgung
Parameter
PT aPTT TT FBG AT F II F V F VII F VIII F IX F X F XI F XII F XIII
INR
(% BL) (% BL) (% BL) (% BL) (% BL) (% BL) (% BL) (% BL) (% BL) (% BL) (% BL) (% BL) (% BL) (% BL)
STUDIENARM A (Einzelspender-Aphereseplasma verarbeitet innerhalb von 8h)
Ausgangswerte 100 1.02 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100
Nach PCT 93 1.06 106 113 83 93 92 95 95 84 84 90 88 87 95
6 Wo. Lagerung bei -40°C 94 1.08 110 119 84 95 91 91 92 80 82 87 89 84 95
STUDIENARM B (Plasma aus drei gepoolten Vollblutspenden verarbeitet innerhalb von 8h)
Ausgangswerte 100 1.08 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100
Nach PCT 95 1.12 109 114 88 95 91 99 94 74 81 88 90 86 92
6 Wo. Lagerung bei -40°C 93 1.12 110 124 86 96 94 92 97 65 86 86 81 86 98
STUDIENARM C (Plasma aus drei gepoolten Vollblutspenden verarbeitet innerhalb von 22h)
Ausgangswerte 100 1.07 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100
Nach PCT 94 1.11 106 112 88 96 94 95 93 84 82 86 90 84 95
6 Wo. Lagerung bei -40°C 93 1.12 107 117 93 100 92 94 91 93 78 85 86 84 98
Parameter
D-Dimere
(% BL)
vWF Ag vWF Act CBA PC PS Act PAP TAT PLG FBG imm
(% BL) (% BL) (% BL) (% BL) (% BL) (% BL) (ng/mL) (% BL) (% BL)
APL
(% BL)
STUDIENARM A (Einzelspender-Aphereseplasma verarbeitet innerhalb von 8h)
Ausgangswerte 100 100 100 100 100 100 100 0.1 100 100 100
Nach PCT 92 95 97 101 90 93 100 0.1 100 93 80
6 Wo. Lagerung bei -40°C 91 115 99 102 88 84 98 0.1 98 95 69
STUDIENARM B (Plasma aus drei gepoolten Vollblutspenden verarbeitet innerhalb von 8h)
Ausgangswerte 100 100 100 100 100 100 100 7.25 100 100 100
Nach PCT 89 113 104 89 89 96 108 6.25 93 88 81
6 Wo. Lagerung bei -40°C 88 103 109 76 90 93 99 5.7 95 95 81
STUDIENARM C (Plasma aus drei gepoolten Vollblutspenden verarbeitet innerhalb von 22h)
Ausgangswerte 100 100 100 100 100 100 100 56.95 100 100 100
Nach PCT 95 105 100 101 90 96 92 56.25 95 108 81
6 Wo. Lagerung bei -40°C 99 87 100 93 87 89 90 55 90 95 84
Alle dargestellten Ergebnisse sind Medianwerte aus n = 8 gepoolten gefrorenen Frischplasmen (GFP) standardisiert auf
die Ausgangswerte (= 100%).
PCT: photochemical treatment; BL: baseline (= Ausgangswert = 100%); PT: prothrombin time; INR: international
normalized ratio; aPTT: activated partial thromboplastin time; TT: thrombin time;
FBG: fibrinogen; AT: antithrombin; F: coagulation factor; vWF: von Willebrand factor; Ag: antigen; Act: activity; CBA: (vWF)
collagen binding assay; PC: protein C; PS: protein S;
PAP: plasmin-antiplasmin-complex; TAT: thrombin-antithrombin-complex; PLG: plasminogen; imm: immunological assay
(= antigen); APL: antiplasmin.
Standort Frankfurt
Arbeitsgruppe Produktion und Stammzellbiologie
Projektleiter PD Dr. med. Reinhard Henschler
Mitarbeiter Dr. med. Markus M. Müller und Dipl. Biol. Hans-Ulrich Pfeiffer
Kooperationen Institut für Experimentelle Hämatologie und Transfusionsmedizin
der Universitätsklinik Bonn (Prof. Dr. med. Johannes Oldenburg
und Prof. Dr. med. Bernd Pötzsch)
Förderung Firma Cerus Corp., Concord, U.S.A.
Laufzeit des Projektes 12/2005 - 12/2006
Weitere Informationen
• Markus M. Mueller, Hans-Ulrich Pfeiffer, Margaret Rheinschmidt, Bernd Poetzsch,
Johannes Oldenburg, Laurence Corash, Erhard Seifried and Reinhard Henschler: Effects of
Pathogen Inactivation Using Amotosalen-UVA on Coagulation Parameters in Apheresis and
Whole Blood Derived Frozen Plasma in a Large Blood Bank Setting. Blood 2006;108:281a-
282a
42

Qualtiätssicherung in der Blutversorgung
Qualitätssicherung der D-negativen Erythrozyten-Präparate
durch Ausschluss von DEL-Blutpräparaten
Hintergrund und Projektbeschreibung
Mit genetischer Diagnostik für das RHD-Gen werden unter vermeintlich D-negativen Spendern
etliche Blutspender mit weak D- oder DEL-Bluten aufgedeckt, um diese Blute nur noch Dpositiven
Patienten zu transfundieren. Ohne genetische Diagnostik werden immer wieder Dnegative
Transfusionsempfänger durch das Antigen D solcher Blutspenden immunisiert. Bisher
als D-negativ verkannte Spender, deren Erythrozyten einen D-/D+-Chimärismus aufweisen,
können ebenso sicher entdeckt werden. Ein lebenslanger Chimärismus kann bei
Zwillingsschwangerschaften mit gemeinsamem Blutkreislauf auftreten. Jede Transfusion
solcher Blutspenden kann eine Anti-D-Immunisierung bewirken, weil sie jeweils mehrere
Milliliter Erythrozyten mit völlig normalem D-positiven Phänotyp enthalten. Diese Beimengung
von D-positivem Blut kann man mit keiner serologischen Routinemethode sondern
ausschließlich mit genetischer Diagnostik nachweisen. Jede Anti-D-Immunisierung hat
zumindest bei Frauen im gebärfähigen Alter und Mädchen eine erhebliche klinische Bedeutung.
Ein Morbus hämolyticus neonatorum durch Anti-D wäre im Fall D-positiver Schwangerschaften
wahrscheinlich.
Durchfluss-zytometrische Analyse einer D +/- Chimäre. Die Fluoreszenz-Histogramme wurden mit indirekter
Immunfluoreszenz und polyklonalem Anti-D in einer Blutspende einer D +/- Chimäre gewonnen (A), einer weiteren
Blutspende drei Monate später (B) und einer Kontrolle mit 5% D-positiven Erythrozyten (C). Der D-positive
Erythrozyten-Anteil beim Blutspender war ungefähr 6%. © 2001 Wagner et al., Licensee BioMed Central Ltd. Abdruck
mit Genehmigung.
43

Qualitätssicherung in der Blutversorgung
Wichtigste Ergebnisse
In dem Institut Ulm wird die RHD-Genotypisierung unter neuen D negativen Blutspendern (zirka
500.000 Blutspenden pro Jahr) als Routineverfahren seit Januar 2002 angewendet. Ungefähr 1
unter 500 scheinbar D-negativen Blutspendern weist ein RHD-Allel auf. Ungefähr 1 unter 1.000
scheinbar D-negativen Blutspendern trägt einen DEL-Phänotype und wird permanent den D
positiven Blutspendern zugeordnet. Seit 1. Januar 2007 werden auch die D negativen Erst-
Blutspender der Institute Frankfurt und Kassel diesbezüglich untersucht.
Summary
At the blood center in Ulm RHD genotyping of D negative first-time donors (500,000
donations/year) has been a routine procedure since January 2002. About 1 in 500 seemingly D
negative blood donors carry an RHD allele. About 1 in 1,000 seemingly D negative donors
express an DEL phenotype and should be permanently moved to the D positive blood donor
pool. Since 1. January 2007 the D negative frist-time donors of the Institute Frankfurt and
Kassel were tested accordingly.
Standort Ulm
Arbeitsgruppe Molekulare Diagnostik erythrozytärer Antigene
Projektleiter Prof. Dr. med. Willy A. Flegel
Mitarbeiter Dr. med. Ingeborg von Zabern
Marianne Lotsch (MTA)
alle für den Blutspender-Arbeitsplatz eingewiesenen medizinischtechnischen
Assistenten
Kooperationen P. Bugert, C. Geisen, G. Holzberger, E. A. Scharberg, DRK
Blutspendedienst Baden-Württemberg – Hessen, Institute
Mannheim, Frankfurt, Kassel und Baden-Baden
Förderung DRK-Blutspendedienst Baden-Württemberg - Hessen gGmbH
Laufzeit des Projektes Seit 01.01.2002 fortlaufend
Weitere Informationen
• Flegel, W.A.: How I manage donors and patients with a weak D phenotype. Curr Opin
Hematol 13(2006)476-483
• Flegel, W. A.: Genetik des Rhesus-Blutgruppensystems. Deutsches Ärzteblatt
104(2007)A651-A657
• Internetseite: http://www.uni-ulm.de/~wflegel/RH/
44

Qualtiätssicherung in der Blutversorgung
Nationale Qualitätssicherung der derzeit empfohlenen Rhesus-
Typisierungsstrategie
Hintergrund und Projektbeschreibung
Die Arbeitsgruppe wurde von der Deutschen Gesellschaft für Transfusionsmedizin und
Immunhämatologie (DGTI) am 10. Februar 1998 mit der Führung des „Rhesus-Immunisierungs-
Registers“ beauftragt. In diesem Register werden Fälle von Anti-D-Immunisierungen bei Dpositiven
Personen gesammelt und molekularbiologisch aufgeklärt.
Klinische Probleme sind durch einige wenige RHD-Allele bedingt. Meist handelt es sich um
Personen mit partial D- oder einigen wenigen seltenen weak D-Typen, die durch normales
Antigen D immunisiert werden. Die D-Kategorie VI (DVI) ist darunter die wichtigste. Deshalb
werden monoklonale Anti-D-Antikörper für die Typisierung empfohlen, die nicht mit DVI
reagieren. Dieses Vorgehen ist seit 1996 unverändert in den deutschen Hämotherapie-
Richtlinien implementiert. Die Träger von DVI werden daher bewusst „falschnegativ“ typisiert,
um eine Transfusion von D-positivem Blut mit der wahrscheinlichen Folge einer Anti-D-
Immunisierung zu verhindern.
Das Ziel ist es, einen Überblick über mögliche Probleme bei den derzeitigen
Transfusionsverfahren zu bekommen, und, falls erforderlich, Vorschläge für verbesserte
Typisierungs- und Transfusionsstrategien zu erarbeiten.
Verteilung der molekularen weak D-Typen in Transfusionsempfängern mit anti-D-Immunisierungen. Insgesamt wurden
31 Beobachtungen seit 1998 unter Patienten mit weak D-Phänotypen berichtet. Patienten mit den häufigen weak D-
Typen wiesen nur Auto-anti-D auf (n = 24; weis und grau). Einzelne weak D-Typen, wie weak D-Typ 4.2, 11 und 15, die
allesamt unter Europäern selten sind, ließen eine Allo-anti-D-Immunisierung zu (n = 4; schwarz und gestrichelt).
45

Qualitätssicherung in der Blutversorgung
Wichtigste Ergebnisse
Im Gegensatz zu partial D wurde bisher keine Allo-Anti-D-Immunisierung bei weak D Typ 1, Typ
2 oder Typ 3 beobachtet. Es ist aus klinischer Sicht überaus vorteilhaft, dass es sich um die
häufigsten weak D-Allele handelt, die zusammen annähernd 90 % aller weak-D-Typen in
Deutschland ausmachen. Diese Patienten können mit D-positivem Blut transfundiert werden.
Damit wird der unnötige Einsatz von D-negativen Erythrozytenpräparaten bei diesen Patienten
vermieden. Mit diesem Vorgehen können bis zu 5 % aller D-negativen Erythrozytenpräparate
eingespart und völlig problemlos durch D-positive ersetzt werden, um Engpässe in der
Versorgung mit D-negativen Blutpräparaten zu mindern.
Summary
Unlike partial D, no anti-D isoimmunization has yet been reported for weak D type 1, 2 or 3.
From a clinical perspective, it is helpful that this involves the commonest anti-D alleles, which
make up almost 90% of all weak D types in Germany since these patients can receive D
positive blood transfusions and do not require D negative products. This procedure saves up to
5% of all D negative erythrocyte products since they can perfectly well be replaced by D positive
products, thus avoiding bottlenecks in the supply of D negative blood products.
Standort Ulm
Arbeitsgruppe Molekulare Diagnostik erythrozytärer Antigene
Projektleiter Prof. Dr. med. Willy A. Flegel
Mitarbeiter Dr. med. Ingeborg von Zabern
Anita Hacker, Hedwig Teubl (MTA)
Kooperationen Mitglieder der Sektion 5 Immunhämatologie/Gentechnik der DGTI
Förderung DRK-Blutspendedienst Baden-Württemberg - Hessen gGmbH
Laufzeit des Projektes 01.02.1998 - 31.12.2008
Weitere Informationen
• Flegel WA. How I manage donors and patients with a weak D phenotype. Curr Opin
Hematol 13(2006)476-483
• Flegel, W. A.: Genetik des Rhesus-Blutgruppensystems. Deutsches Ärzteblatt
104(2007)A651-A657
• Internetseite des Rhesus Immunisierungsregister: http://www.uni-ulm.de/~wflegel/RH/RIR/
46

Qualtiätssicherung in der Blutversorgung
Leistungsbewertungsstudie eines neuen Verfahrens zur
Blutgruppenbestimmung mittels Lateral-Flow-Technik:
„MDmulticard ABO-D-Rhsubgroups-K for patients“
Hintergrund und Projektbeschreibung
Medion Diagnostics AG hat eine Lateral-Flow-Testkarte zur Bestimmung der
Blutgruppeneigenschaften A-B-D-D-K-C-Cw-c-E-e in einem Ansatz entwickelt („MDmulticard
ABO-D-Rhsubgroups-K for patients“). Die Lateral-Flow-Technik erlaubt eine Bestimmung der
Erythrozyteneigenschaften aus Vollblut innerhalb von 5 Minuten, ohne dass ein
Zentrifugationsschritt erforderlich ist.
Das Ziel der Studie ist der Nachweis der Leistungsfähigkeit der „MDmulticard ABO-D-
Rhsubgroups-K for patients“ in der Anwendung an statistisch signifikanten Spender- und
Patientenpopulationen im Routinebetrieb im Vergleich zu State-of-the-Art Methoden (DiaMed
Gel Test; Olympus PK-7200). Insgesamt wurden 4276 Blutproben (3550 Spander, 726 klinische
Proben) vergleichend untersucht. Unter den Proben befanden sich 88 Proben mit schwacher
Antigen-Expression (weak D, partial D, weak A, A, Ael, weak B) sowie 86 neonatale Proben.
Abgesehen von wenigen im Folgenden aufgeführten Ausnahmen ergaben sich durchweg
übereinstimmende Ergebnisse im Vergleich zu State-of-the-Art Methoden (DiaMed Gel Test;
Olympus PK-7200).
Bei einem Spender wurde ein möglicherweise qualitativ verändertes Rhesus e-Antigen mit
MDMultiCard nicht nachgewiesen. Bei einem weiteren Spender mit ausgeprägter
Hyperlipidämie wurden im Regelansatz unter Verwendung der Vollblutmethode unspezifische
Ergebnisse erhoben. Weiterhin ergaben sich bei einem Patienten mit hochtitrigen
erythrozytären Auto-Antikörpern vom IgG-Typ zunächst unspezifische Ergebnisse. In beiden
Fällen konnten unter Verwendung von gewaschenen Erythrozyten regelhafte
Blutgruppenbefunde erhoben werden. Bei einem Patienten mit hochtitrigen kältereaktiven Auto-
Antikörpern konnte erst nach vorheriger Inkubation bei 37 °C ein korrekter Blutgruppenbefund
erhoben werden. Insbesondere wurden bei neonatalen Proben keine Abweichung vom
Referenz-Blutgruppenbefund festgestellt. Weiterhin ergaben sich bei Ansatz alternativer
Antikoagulantien (EDTA-, ACD-, CPDA- sowie Citrat-Blut) keine Abweichungen von der
Referenz-Blutgruppe.
Ergebnis einer Blutgruppenbestimmung mittels „MDmulticard ABO-D-Rhsubgroups-K for patients“: Ist ein Blutgruppen-
Merkmal vorhanden ergibt sich eine rote Bande, bei Fehlen des Blutgruppen-Merkmal ist keine Bande nachweisbar. Als
interne Positiv- bzw. Negativ-Kontrollen dienen: val: Roter Punkt; ctl: Kein Signal. Im gezeigten Beispiel lautet das
Ergebnis der Bestimmung der Erythrozyteneigenschaften: B Rh positiv (CcD.Ee) kk
Wichtigste Ergebnisse
„MDmulticard ABO-D-Rhsubgroups-K for patients“ stellt ein hochsensitives und zugleich auch
äußerst spezifisches Verfahren zur Bestimmung der Blutgruppeneigenschaften A-B-D-D-K-C-
Cw-c-E-e mittels Lateral-Flow-Technik dar. Die verwendete Methode zeichnet sich durch eine
einfache Handhabung aus, die aufgrund der wenigen erforderlichen Arbeitsschritte auch eine
47

Qualitätssicherung in der Blutversorgung
sehr sichere Methode zur Bestimmung einer Blutgruppe darstellt. Als weiterer Vorteil der
Methode erwies sich die sehr kurze Zeit zwischen Auftragung der Blutprobe auf den Testträger
und der Befundung (5 Minuten ). Dies erlaubt insbesondere den Einsatz der Methode in der
Notfalldiagnostik.
Summary
A novel lateral flow assay (“MDmulticard”) allows for simultaneous multi-parameter testing in a
single assay, providing a stable end-point without centrifugation. Briefly, in the lateral flow
method 100 µl of diluted blood or erythrocyte sediment are pipetted into the application zone of
the MDmulticard, followed by 300 µl of a rinsing buffer. Results can be read after 5 minutes.
Positive results are recognized as distinct red bands, negative results are recognized by the
absence of the respective band.The aim of this study is to evaluate the performance of
MDmulticard in routine testing on statistically significant donor and patient populations as
opposed to state-of-the-art methods (DiaMed Gel Test; Olympus PK-7200).
In 4271 samples ABO, D, K and Rhesus subgroup typing concurred. 5 samples showed
discrepant results. In one sample Rhesus e-antigen was typed negative in the lateral flow assay
while different monoclonal antibodies gave variable results in the gel agglutination assay
suggesting a partial e-antigen. In two samples false positive results were observed initially,
which were most likely due to excessive hyperlipaemia and high titer IgG-autoantibodies,
respectively. After washing red blood cells regular results in the lateral flow assay could be
obtained in both samples. In one sample with high cold agglutinin titer due to complete auto
agglutination in the application zone of the lateral flow device no band could be observed. After
preincubation of the sample at 37 °C the lateral fl ow assay gave concurring results. In one A w
sample a positive result with Anti-A could only be observed with MDmulticard but not with the
gel agglutination test.
The lateral flow assay “MDmulticard” represents a highly sensitive and specific method for ABO,
D, K and Rhesus subgroup antigen typing within 5 minutes without a centrifugation step.
Therefore MDmulticard is highly suitable for emergency diagnostics.
Standort Frankfurt
Arbeitsgruppe Immunhämatologie
Projektleiter Dr. med. Christof Geisen
Mitarbeiter Regine Bernhöft (TA)
Monika Müller (TA)
Elke Peters (TA)
Sandra Wirsing (TA)
Kooperationen Dr. P. Schwind, Medion Diagnostics AG, Düdingen, Schweiz
Förderung Industriemittel, Medion Diagnostics AG, Düdingen, Schweiz
Laufzeit des Projektes 01.06.2005 – 30.06.2007
Weitere Informationen
• Geisen C, Schwind P, Seifried E. (2006). Performance evaluation of a novel lateral flow
device for rapid multi-parameter blood grouping without centrifugation. Transfus Med
Hemother, 33 (suppl. 1), 49
• Geisen C, Schwind P, Seifried E. (2006). Rapid multi-parameter blood grouping without
centrifugation - performance evaluation with donor, patient and neonatal samples.
Transfusion 46, (9S), 143A
• http://www.blutspende.de/institute_tochtergesellschaften/frankfurt/immunhaematologie.php
48

Qualtiätssicherung in der Blutversorgung
Screening der Blutspender auf seltene Blutgruppen und
Entwicklung von Antikörper-Identifizierungs-Panels
Hintergrund und Projektbeschreibung
Die Versorgung mit Blutpräparaten bei Patienten mit seltenen Blutgruppen und Antikörpern
gegen hochfrequente Antigene sowie multiplen Antikörpern ist eine der schwierigsten Aufgaben
der Transfusionsmedizin.
In den letzten Jahren wurden am Institut Baden-Baden für mehrere solcher Patienten aus dem
Gebiet der gesamten Bundesrepublik, für die keine kompatiblen Blutspender zur Verfügung
standen, Screeningaktionen durchgeführt. Es handelte sich um Antikörper mit verschiedenen
Spezifitäten (Anti-Lu(b), Anti-Yt(a), Anti-Kp(b), Anti-k, Anti-AnWj, u.a.).
Wichtigste Ergebnisse
Bei mehr als 60.000 getesteten Blutspendern wurden ca. 70 Personen gefunden, die seltene
Blutgruppenmerkmale besitzen. Sie konnten mehrfach für die Versorgung von Patienten in
verschiedenen transfusionsmedizinischen Einrichtungen in Deutschland herangezogen werden
und stehen in unserer Spenderdatei für besondere Anforderungen zur Verfügung.
Blutproben dieser Blutspender wurden für Testzwecke im Rahmen des SCARF-Programms
(Serum, Cells and Rare Fluid Exchange, Philadelphia, USA) an Referenzlabors in der ganzen
Welt sowie im Rahmen des Austauschprogramms „Seltene Blutgruppen“ der DGTI im
deutschsprachigen Raum versendet. Eine besonders enge wissenschaftliche Kooperation mit
Austausch seltener Proben/Seren besteht auch mit dem New York Blood Center, USA.
Mehrere Präparate mit seltenen Blutgruppen sowie Antigen-getestete Erythrozytenkonzentrate
wurden in Kooperation mit Industriepartnern (Fa. DiaMed/ Schweiz, Fa. BioRad/ Frankreich) für
die Herstellung von Antikörper-Identifizierungs-Panels verwendet. Diese Panels sind
unverzichtbar für die prätransfusionelle Diagnostik
Summary
The supply of red cell concentrates to patients with rare blood groups is a great challenge to
blood centres and one of the most difficult tasks of the transfusion medicine. In the last few
years the Institute for Transfusion Medicine and Immunohematology in Baden-Baden has
performed several screening programs for patients with antibodies to high frequency antigens
(anti-Lu(b), anti-Yt(a), anti-Kp(b), anti-k, anti-AnWj, etc.) who could not find compatible donors.
More than 60,000 blood donors have been screened and about 70 donors with rare blood could
be found. These donors have donated blood for patients in different parts of Germany. Their red
cells have also been used for exchange programs of national and international reference
laboratories like SCARF (Serum, Cells and Rare Fluid Exchange, Philadelphia, USA), the
German Rare Donor Working Program or in cooperating with the New York Blood Center. Some
of the extendedly typed red cells concentrated have also been included in the production of
commercial antibody screening and identification panels (DiaMed and BioRad) which are used
in pretransfusion diagnostics.
Standort Baden-Baden
Arbeitsgruppe Sicherheit der Hämotherapie
Projektleiter Dr. med. Erwin Andreas Scharberg
Mitarbeiter Dr. Susanne Seyboth, Kathrin Panter (MTA), Marina Mujakic
(MTA), Stefanie Penz (MTA), Andrea Ernst (MTA)
Kooperationen Fa. DiaMed (Schweiz), Fa. BioRad (Frankreich), AG “Seltene
Blutgruppen” DGTI, SCARF, New York Blood Center, The
International Blood Group Reference Laboratory, Bristol/UK,
Institute of Haematology and Blood Transfusion, Warsaw/Poland
Förderung Firma DiaMed (Schweiz)
Firma BioRad (Frankreich)
Laufzeit des Projektes 01.05.2004 bis auf weiteres
49

Qualitätsmanagement
Qualitätssicherung in der Blutversorgung
Beschreibung der Arbeitsgruppe:
In Verbindung mit den hohen ethischen und medizinischen Anforderungen an das
Sicherheitsprofil in der Transfusionsmedizin und den schonenden Umgang mit dem vom
Spender zur Verfügung gestellten Blut, wurde durch die Geschäftsführung ein
Qualitätsmanagementsystem entwickelt, dass höchsten nationalen und internationalen
Anforderungen, einschließlich aller gesetzlicher Regelungen entspricht. Hierdurch soll eine
wirksame Lenkung und Verbesserung der Arzneimittelherstellung und der
Dienstleistungsqualität während sämtlicher Phasen der Herstellung und Prüfung sowie des
Vertriebes gewährleistet werden. Dieses moderne Qualitätsmanagementsystem umfasst
sämtliche Bereiche des Unternehmens, d.h. medizinische Diagnostik- und Arzneimittelbereiche,
Lagerung und Vertrieb, Verwaltung, Werbung, den kaufmännischen Bereich sowie die EDV.
Grundlage sind die Normen DIN EN ISO 9001: 2000 und 13485:2003 für die Zertifizierung aller
Unternehmensbereiche und die DIN EN ISO 15189 für die Akkreditierung der
labordiagnostischen Bereiche. Zusätzlich werden die Standards der European Federation for
Immunogenetics (EFI) für die transplantationsimmunologischen Laborbereiche integriert.
Entwicklungen im Unternehmen
Der DRK-Blutspendedienst Baden-Württemberg - Hessen vereinbarte mit dem
Universitätsklinikum Tübingen (Zentrum für Klinische Transfusionsmedizin ZKT Tübingen), und
Universitätsklinikum Heidelberg (Institut für Klinische Transfusionsmedizin und Zelltherapie
IKTZ Heidelberg) eine Integration beider Zentren in die Muttergesellschaft Baden-Württemberg-
Hessen. Beide Tochtergesellschaften sind formal Anfang 2005 in Betrieb gegangen. Die
ehemaligen Blutspendedienste Sachsen sowie Berlin und Brandenburg wurden im Jahr 2006
zum DRK-Blutspendedienst Ost gGmbH zusammengeschlossen. Dieser Blutspendedienst
unterhält die Institute Dresden, Chemnitz, Plauen, Berlin, Potsdam, Cottbus sowie die
Außenstellen in Zwickau und Görlitz.
Durch diese Veränderungen ergibt sich die in Abb. A gezeigte geographische Entwicklung. In
Abb. B ist die Struktur der Einrichtungen des DRK Blutspendedienstes Baden-Württemberg -
Hessen dargestellt.
A B
DRK Blutspendedienst Baden-Württemberg-Hessen
Kunde
Kunde
Patient
GMP, GLP
DIN ISO 9001 : 2000
DIN ISO 15189
Spender
Laboratorien
Diagnostik / Spenderscreening /
Qualitätskontrolle
Zelltherapie
Gentherapie
Molekulare Diagnostik
Abbildung A: Geographische Entwicklung; Abbildung B: Struktur unserer Einrichtungen
Herstellung und Vertrieb
von Blutkomponenten
und Plasmaderivaten
Krankenhaus (Arzt / Patient)
50

Qualtiätssicherung in der Blutversorgung
Zertifizierung des Qualitätsmanagementsystems und Akkreditierung der medizinischen
Laboratoriumsanalytik
Die Struktur und Aufgaben der Blutspendeeinrichtungen - insbesondere solche mit
Universitätsanschluss - haben sich in den letzten Jahren durch die neuen medizinischen
Herausforderungen stark verändert. Dies betrifft vor allem die Bereiche der Zell- und
Gentherapie, sowie die vielfältigen Bereiche der patientenbezogenen Labordiagnostik.
Hervorzuheben sind hierbei Untersuchungen auf molekularbiologischer Basis.
Die komplexe Struktur dieser Einrichtungen bedarf einer engen Verzahnung und Abstimmung
der Prozesse in allen Bereichen.
Auch wenn die GMP-Bereiche, wie Entnahme, Produktion, Spenderscreening und Vertrieb
schon immer den gesetzlichen und sonstigen regulatorischen Vorgaben angepasst waren und
durch Inspektionen von den zuständigen Landes- und Bundesoberbehörden regelmäßig geprüft
wurden, so war es der Geschäftsführung des DRK-Blutspendedienstes Baden-Württemberg –
Hessen ein großes Anliegen, alle sonstigen Bereiche, einschließlich Personal, Geräte, Einkauf,
Lagerhaltung, Technik, Verwaltung und elektronische Datenverarbeitung analog zu den GMP-
Bereichen in die Gesamtheit eines nach ISO zertifizierten Qualitätsmanagementsystems des
Unternehmens einzubinden. Die GMP und GLP-Anforderungen auf der einen Seite sowie die
DIN ISO Normen auf der anderen Seite wurden hierbei als sich qualitativ ergänzend
angesehen.
Aufgrund der zweijährigen guten Erfahrungen in Hessen hat die Geschäftsführung beschlossen,
die Zertifizierung und Akkreditierung auf die Standorte in Baden-Württemberg (Mannheim, Ulm,
Baden-Baden) auszudehnen, und in das bereits bestehende System zu integrieren. Das
Verfahren in Baden-Württemberg wurde im Januar 2004 begonnen und im November 2004
ebenfalls erfolgreich abgeschlossen. Im Juli 2005 wurden alle Standorte in Sachsen (Plauen,
Dresden und Chemnitz sowie den Außenstellen Zwickau und Görlitz) und im November 2006
die in Berlin und Brandenburg (Berlin, Potsdam, Cottbus) auf die gleiche Art und Weise
erfolgreich zertifiziert und akkreditiert.
Eine komplette Rezertifizierung und Reakkreditierung fand Ende 2006 statt. Somit sind nun alle
Institute im DRK-Blutspendedienst Baden-Württemberg – Hessen und seine
Tochtergesellschaften auf der Basis eines einheitlichen Qualitätsmanagementsystems
zertifiziert und akkreditiert. In zwei Instituten (Frankfurt und Ulm) erfolgte auch eine
Zertifizierung für die Entwicklung, Herstellung und Vertrieb von Medizinprodukten. Als
Zertifizierungstelle dient seit 2006 die Deutsche Gesellschaft zur Zertifizierung von
Managementsystemen (DQS).
CE-Kennzeichnung von In-vitro-Diagnostika
Ein Teilaspekt der umfangreichen Aktivitäten des Blutspendedienstes in der medizinischen
Laboratoriumsanalytik ist auch die Entwicklung neuer diagnostischer Verfahren und In-vitro-
Diagnostika.
Die CE-Kennzeichnung durch eine benannte Stelle bestätigt, dass ein In-vitro-Diagnostikum die
einschlägigen Bestimmungen der IVD-Richtlinien (Direktive 98/79/EG) erfüllt, insbesondere
dass ein Konformitätsbewertungsverfahren durchgeführt wurde. Alle In-vitro-Diagnostika
müssen die anwendbaren grundlegenden Anforderungen hinsichtlich Funktion, Sicherheit und
Kennzeichnung gemäß Annex 1 der In-vitro-Diagnostika-Direktive erfüllen.
Im Institut für Transfusionsmedizin und Immunhämatologie in Frankfurt wurde ein Verfahren zur
Extraktion viraler Nukleinsäuren und zum Virusgenom-Nachweis für HIV-1, HCV und HBV
mittels Polymerasekettenreaktion (PCR) entwickelt. Die entsprechenden Testkits wurden im
Jahre 2006 CE-zertifiziert (als Produkte gemäß Liste A von Annex II der In-vitro-Diagnostika-
Direktive). Es handelt sich nach unserer Kenntnis um die bisher einzige CE-zertifizierte In
house-Methode zum direkten Virusgenom-Nachweis beim Blutspenderscreening.
Dieses Verfahren wird einheitlich zum Screening der Blutspenden im Blutspendedienst Baden-
Württemberg – Hessen angewandt.
51

Qualitätssicherung in der Blutversorgung
Im Institut für Klinische Transfusionsmedizin und Immungenetik Ulm wurde ein Kit für die hochauflösende
HLA-A,-B- und –C-Typisierung mittels "Sequence-Based Typing" (SBT) entwickelt,
welcher aus Mastermix, PCR-Primergemischen und Locus-spezifischen Sequenzierprimern für
die Sequenzierung der Exons 2 und 3 besteht. Auch dieses Inhaus-Verfahren konnte im Jahre
2006 erfolgreich CE-zertifiziert werden (Produkt nach Liste B von Annex II der In-vitro-
Diagnostika-Direktive).
Europäische Projekte zur Harmonisierung von Qualitätsstandards im Bereich der
Transfusionsmedizin
Die Aktivitäten des DRK Blutspendedienstes Baden-Württemberg - Hessen sind auch geprägt
durch eine hohe Vernetzung auf europäischer und internationaler Ebene mit Institutionen aus
dem Bereich der Transfusionsmedizin und angrenzenden Gebieten. Ein Schwerpunkt dieser
Arbeit bildet der Austausch von wissenschaftlichen Ergebnissen in der Entwicklung von
Strategien zur Verbesserung der Sicherheit von Blutkomponenten. In diesem Zusammenhang
ist es dem DRK Blutspendedienst gelungen, innerhalb des Rahmenprogramms im Bereich der
öffentlichen Gesundheit der Europäischen Kommission (Health & Consumer Protection
Directorate General) zwei Projekte zur Entwicklung von Europäischen Richtlinien und
Empfehlungen für Qualitätsstandards in Blutspendeeinrichtungen zu erhalten. Neben diesen
Projekten wurde im Jahr 2006 ein von der europäischen Kommission gefördertes Twinning
Projekt zur Verbesserung der Blutsicherheit in Malta erfolgreich abgeschlossen.
Standort Frankfurt
Arbeitsgruppe Qualitätsmanagement
Projektleiter MUDr. Walid Sireis, Prof.Dr.med. Christian Seidl
Mitarbeiter Dr. med. Stefan Findhammer (Referent QM)
Dr. Esther Schellenberg (Referentin QM)
Dr. Thea Müller-Kuller (Referentin QM)
Frau Sabine Frenda (QM Sachbearbeiterin)
Frau Ines Henniker (QM Sachbereiterin)
PD Dr.med.M.Schmidt (Abteilungsleiter Spenderscreening)
Prof. Dr. med. Christian Seidl (QM/EU Project Coordinator)
52

Qualtiätssicherung in der Blutversorgung
Europäisches Twinningprojekt Malta-Deutschland:
Verbesserung der Qualität und Sicherheit in der Gewinnung
und Herstellung von Blutkomponenten
Hintergrund und Projektbeschreibung
Unterstützung des Nationalen Blutspendedienstes Malta durch den DRK-
Blutspendedienst Baden Württemberg Hessen im Rahmen des Twinningprojekts MT
04/IB/OT/04-TL .Upgrading the National Blood Transfusion Service to Quality
Standards as specified in Directive 2002/98/EC.
Arbeitstreffen in der Blutbank in L.Mangia, Malta. Oberes Bild (mitte): Prof. Dr. med. C. Seidl und Dr. Alex Aquilina
sowie Mitarbeiter der Blutbank
Unteres Bild (von links nach rechts): Dr. Alex Aquilina, Prof. Dr. med. Erhard Seifried, Peter Heimer, MUDr. Walid Sireis,
PD Dr. med. Reinhard Henschler.
53

Qualitätssicherung in der Blutversorgung
Besichtigung der Blutspendeeinrichtung auf Coso und Diskussion der
Verbesserungsvorschläge. (von links nach rechts) Dr. Alex Aquilina, Degiorgio Angelo, Prof.
Dr. Christian Seidl, Peter Heimer, MUDr. Walid Sireis, Prof. Dr. Erhard Seifried.
Summary
The overall objective is to ensure the provision of a safer supply of blood products for Malta,
thereby assisting Malta to comply with EU requirements in this area.
This project will support the Department of Institutional Health in guaranteeing a safer, more
efficient national blood transfusion service, in compliance to Quality standards as specified in
EU Directive 2002/98/EC on “Setting Standards of Quality and Safety for the collection, testing,
processing, storage and distribution of human blood and blood components”.
The National Blood Transfusion Service (NBTS) is aiming at the following results:
• An organisational set up and staff well acquainted with quality standards and
implementation
• NBTS staff trained in maintaining the required standards.
• A Blood Processing Facility that is compliant with accepted standards required for Quality
Systems implementation.
Standort Frankfurt
Arbeitsgruppe Medizinische Geschäftsführung und Qualitätsmanagementbereich
Projektleiter Prof. Dr. med. Erhard Seifried
Mitarbeiter MUDr. Walid Sireis, Prof. Dr. med. Christian Seidl, PD Dr. med.
Reinhard Henschler
Kooperationen Generalsekretariat des Deutschen Roten Kreuzes (Leiter, Herr
Peter Heimer)
Deutsche Gesellschaft für technische Zusammenarbeit (GTZ)
Centru Nazzjonali ta't-Trafuzjoni tad-Demm (National Blood
Transfusion Service) (Direktor Dr. Alex Aquilina)
Gesundheitsministerium (Ministry of Health), Malta
Förderung Twinningprojekts MT 04/IB/OT/04-TL: Deutsche Gesellschaft für
technische Zusammenarbeit (GTZ) durch Mittel aus der
Europäische Kommission und durch das Bundesministerium für
Gesundheit
Laufzeit des Projektes 01.01.2006 - 31.12.2006
54

Qualtiätssicherung in der Blutversorgung
Europäisches Projekt EU-Q-Blood-SOP:
Entwicklung von Standards zur Etablierung von
Qualitätsmanagementsystemen in der Transfusionsmedizin
Hintergrund und Projektbeschreibung
The overall objective of the project is to contribute to good quality management (QM) in blood
services, based on the requirements set out in Directive 2002/98/EC and its technical annexes.
It will deliver this through the development of a manual that will assist blood services to
implement or expand their standard operating procedures (SOPs).
55
European Commission Initiative for Safety of Blood
Donor Blood Establishment
Product
EUBIS
EU-Blood-SOP Project
EU-Blood Inspection Project
European blood inspection and quality management system
Hospital
Monitore Evaluate
Directorate C – Public Health and Risk Assessment - Call 2004/2005/2006
Area 2.2.4 Safety of blood, tissues and cells, organs
European Blood Legislation
Directive 2002/98/EC and its technical annexes.
Directive 2004/33/EC Blood and blood components
Directive 2005/62/EC Quality management
Directive 2005/61/EC Hemovigilance
EU-Optimal Use
Wichtigste Ergebnisse
The Projekt-manual will address the responsibilities of blood establishments, including those
that carry out routine activities and those that are highly specialised, as well as hospital blood
banks.
Specifically the project will
(1) assess the existence of SOP manuals and guidelines currently used in the 16 blood services
involved in the project in order to identify (A) international and national SOP manuals already in
place and (B) the current inspection practice;
(2) develop a manual to assist blood establishments to develop and implement their own SOPs.
(3) test this new SOP methodology among the partner institutions.
(4) produce this manual in 5 languages and distribute it to the participating blood
establishments.
The project will support the public health programme on ‘quality and safety of blood’ in
delivering a practical SOP-based tool that will contribute to the understanding and management
of quality processes in blood services. The EU-SOP tool will assist blood establishments in
preparing for the inspection of their services related to the implementation of quality relevant
elements required by the EU directive 2002/98/EC.

Qualitätssicherung in der Blutversorgung
Standort Frankfurt
Arbeitsgruppe Medizinische Geschäftsführung
Projektleiter Prof. Dr. med. Erhard Seifried (Projekt Leader), Prof. Dr. med.
Christian Seidl (Project Coordinator)
Mitarbeiter MUDr. Walid Sireis (Project Manager), Saman Hosseini, MD
(Project Trainee), Dr. Esther Schellenberg (Project Manager), PD
Dr. med. Reinhard Henschler (Project Manager), Ulrike Ebling
(Secretary)
Kooperationen Blutspendeeinrichtungen aus 16 Europäischen
Mitgliedsländern oder EFTA Ländern
Project Participants and Centers (www.eu-q-blood-sop.de):
Eduardo Fernandez-Zincke, Tapani Piha and Caroline Trouet (EC,
European Commission, Directorate C, Bruessels, Belgium) Inge
Buyse and Philippe Vandekerckhove, HBRK (Belgium) Svetla
Bakalova and Andrey Andreev, NBT (Bulgaria), Zoe Sideras MOH
(Cyprus); Petr Turek, GTH (Czech Republic); Tatjana Plahhova
and Riima Niidas, EBS (Estonia); Leslie Sobaga, Alain Beauplet
and Claudine Hossenlopp EFS (France); Martin Gorham and Alan
Slopecki NBS (UK), Klára Barótine-Tóth and Eszter Miskovits,
HNBT (Hungary); Sveinn Gudmundsson BTS (Iceland); Marie
O’Connell and William Murphy, IBTS (Ireland); Hamisa Jane
Hassan ISS (Italy), Frances M. Delaney (Luxemburg), Alex
Aquilina IBT (Malta); Magdalene Letowska and Elzbieta Lachert,
IHBT (Poland); Carmen Tatu, FMP (Romania); Brian McClelland,
Anne Forrest and Ian Franklin, SNBTS (Scotland), Angus McMillan
Douglas, AMD (Scotland).
Förderung durch Mittel aus der Europäische Kommission: Directorate C,
Public health program on ‘quality and safety of blood’, Project
Grant Agreement n0 2004217.
Laufzeit des Projektes 01.10.2005 - 31.06.2007
Weitere Informationen
• Eu-q-blood-sop.de
56

Qualtiätssicherung in der Blutversorgung
Europäisches Projekt EU-Blood-Inspection (EUBIS):
Entwicklung von Standards und Kriterien entsprechend
Direktive 2002/98/EC und 2005/62/EC für die Inspektion von
Blutspendeeinrichtungen
Summary
The EU-Q-Blood-Inspection Project has been design to continue the work on safety of blood
that has been started through the EU-Q-Blood-SOP project in 2005. The project comprises
blood establishments and inspection agencies in order to address the scope defined in Area
2.2.4 of the work plan 2006 ensuring equivalent recognition of inspections of blood
establishments among all Member States through the development and implementation of
commonly accepted criteria and standards leading to comparable quality systems and
inspection procedures.
It will deliver this through the development of:
1. an inspection manual for blood establishments,
2. an inspector training programme,
which will assist the inspection of blood establishments and will develop common inspection
criteria that are accepted among the Member States.
This inspection manual will address the responsibilities of blood establishments, including those
that carry out routine activities and those that are highly specialised. It will give European
guidelines for national institutions or authorities performing inspections based on minimum
requirement for good practice, based on the requirements set out in Directive 2002/98/EC and
its technical annexes.
The strategic objectives are to:
1. enable that blood components are collected and prepared to a consistently high standard of
safety across Europe.
2. define requirements for the quality management system for blood establishments based on
the Directive 2005/62/EC in order to prepare blood establishments for inspections.
3. develop pan European standards and criteria for the inspection of blood establishments
based on GMP guidelines to assist national inspections in implementing the Directive
2002/98/EC and its technical annexes.
4. establish a common benchmark system for deviations and improvements to allow for
comparative analysis of inspections between Member States or European regions. This
benchmark system should develop practical assistance and advice to optimise processes
based on good practice among blood establishments.
5. develop a training programme for inspectors to implement common interpretations of
inspection standards across Europe. This training programme also intends to strengthen the
exchange of information and knowledge on blood establishment quality system GMP
standards between the national institutions and authorities performing inspections.
The overall objective of the project is to contribute to good quality management (QM) in blood
services, based on the requirements set out in Directive 2002/98/EC and its technical annexes.
It will deliver this through the development of a manual that will assist blood services to
implement or expand their standard operating procedures (SOPs).
57

EUBIS
Qualitätssicherung in der Blutversorgung
European blood inspection and quality management system
18 Participants from
EU member states:
BE, CZ, DE, EE, FR, IE, IT,
CY, HU, MT, NL, PL, UK
(acceding) new member states:
BG, RO
EFTA states:
IS
EUBIS (European blood inspection and quality management system) participants from 16 European member and EFTA
states.
Standort Frankfurt
Arbeitsgruppe Medizinische Geschäftsführung
Projektleiter Prof. Dr. med. Erhard Seifried (Projekt Leader), Prof. Dr. med.
Christian Seidl (Project Coordinator and Manager)
Mitarbeiter MUDr. Walid Sireis (Project Manager)
Dr. Veronika Brixner (Assistant Project Manager)
Dr. Thea Müller-Kuller (Assistant Project Manager)
Ulrike Ebling (Secretary).
Kooperationen European Commission – Directorate C (Public Health and Risk
Assessment) (Brüssel)
Public health Executive Agency (PHEA) (Luxemburg)
National Blood Service (England and North Wales)
Scottish National Blood Transfusion Service (Schottland )
Sanquin (Netherlands), Establissement Francais du Sang (EFS)
(Frankreich)
Het Belgische Rode Krius (Belgien)
Irish Blood Transfusion Service Board (Irland)
Istituto Superiore di Santa (Italien)
National Center of Haematology and Transfusiology (Bulgarien)
Ustav hematologie a krevni transfuze (Tschechien)
Orszagos Verellato Szolgalat (OVSZ) (Ungarn)
Institute of Hematology and Blood transfusion (Polen)
Blood Transfusion Service (Rumänien)
North-Estonina Blood Centre (Estland)
FNSP Faculty Hospital (Slovakei)
Ministry of Health (Zypern)
Icelandic University Hospital (Island)
National Blood Transfusion Service (Malta)
Irish Medicinal Board (Ireland)
Regierungspräsidium Darmstadt (Deutschland)
Förderung durch Mittel aus der Europäische Kommission, Grant Agreement
Project A80053, Directorate C. Public Health and Risk Assessment
Laufzeit des Projektes 01.11.2006 - 31.10.2010
58

Qualtiätssicherung in der Blutversorgung
EUBIS – Project working and decision making structure including the linking activities to external consortiums as
described in Annex I of the Grant Agreement.
Weitere Informationen
• Eu-q-blood-sop.de
59

Qualitätssicherung in der Blutversorgung
Entwicklung neuer Filter für die Leukozytendepletion bei
Blutprodukten
Hintergrund und Projektbeschreibung
Die Größe des LCR5 Filters der Firma MacoPharma führt zu einem erheblichen Hb Verlust und damit zu einem
geringeren Hb Gehalt von Erythrozytenkonzentraten im Vergleich zu Beutelsystemen anderer Hersteller. MacoPharma
modifizierte den Filter mit einem kleineren Gehäuse und weiteren Filterlagen.
Das Ziel der Arbeit war die Effizienz von 3 neuen Designs zu prüfen. Dafür wurden 10 Pools à 4 Vollbluten hergestellt
und wieder in 4 Vollblute aufgeteilt. Jede Einheit wurde mit dem Standard top & bottom Procedere weiterverarbeitet. Die
Filtration wurde mit den 3 neuen Filtern A, B und C durchgeführt. Als Kontrolle wurde mit dem bisherigen LCR5 filtriert.
Zusätzlich wurden 34 Einzelpräparate hergestellt und unter Standardbedingungen mit dem Filter A Leukozyten
depletiert.
Volumen, Anzahl Leukozyten, Hb-Gehalt und Recovery, Hämatokrit und Hämolyse Parameter wurden vor und nach
Lagerung von 35 und 42 Tagen bestimmt. Proben wurden vor und nach Filtration gezogen.
Weitere Tests zur Prüfung von Filterentwicklungen im Auftrag für die Fa. ASAHI
A Hb content B Hb recovery
g %
52
52
51
51
50
50
49
49
Filter A LCR5
%
80
78
76
74
72
70
68
66
different Filter
Filter A Filter B Filter C LCR5
Abbildung A: Gegenüberstellung Hb Gehalt des neuen Filters A mit modifizierter Filterform und Filterlagen mit dem
LCR5
Abbildung B: Gegenüberstellung der Hb recovery der 3 neuen Filter mit dem bisherigen LCR5
Wichtigste Ergebnisse
Filter A zeigte die besten Resultate bezüglich der Leukozytendepletion. Volumen und Hb-Gehalt waren bei
allen 3 Filtern ähnlich mit 273 ml für Filter A, 274 ml für B und 272 ml für C vs. 262 ml für LCR5.
Erythrozytenkonzentrate, die mit den neuen Filtern hergestellt wurden, hatten durchschnittlich einen Hb-
Gehalt von 52 g/Einheit verglichen mit 50 g/Einheit mit dem LCR5 und eine Recovery von 75% für A and
C, und von 76% für B. Mit LCR5 gefilterte Einheiten hatten eine Recovery von 70%. Auf Grund der
Testergebnisse wurde Filter A für die weiteren Teste mit den Einzelpräparaten ausgewählt. Diese
Untersuchungen bestätigten die Ergebnisse. Der durchschnittliche Hb-Gehalt betrug 59 g/Einheit, der
Leukozytengehalt lag unter 0.06x10 6 . Nach der Lagerung war die Hämolyse Rate bei 0.31%.
Summary
The test results were within the specification of European Guidelines. Regarding hemoglobin content and
recovery the new filters had similar results. Compared with LCR5 the new filters showed a higher volume
of approximately 10 ml, and a higher hemoglobin content and recovery. Filter A with the new pouch and 2
additional filter layers performed best regarding leukocyte reduction. With filter A an improvement for
RBC's could be achieved. Filter A can be recommended for routine procedure.
Standort Baden-Baden
Arbeitsgruppe Dr. E. Richter
Projektleiter Dr. A. Agildere
Mitarbeiter Frau G. Haungs; Herr Blizil
Kooperationen MacoPharma; ASAHI-KASEI medical
Förderung MacoPharma; ASAHI
Laufzeit des Projektes MacoPharma: Juli bis Dezember 2006
ASAHI: September 2006
Weitere Informationen
• poster presentation ISBT Madrid 2007
60

Stammzellen und Zelltherapie
61

2 Stammzellllen und Zelllltherapiie
Intracoronary
infusion
Mobilisation • VEGF
• SDF-1 SDF
• G-CSF CSF
• GM-CSF GM CSF
• EPO
• Statins
• Exercise
• PPAR
Stammzellen und Zelltherapie
LV
Adhesion
Migration
Homing
Invasion
GMV
HS
EV
MV
N
E
62

Stammzellen und Zelltherapie
Markierung von Stammzellen für die Detektion von Migration
und Homing – Interaktion von Nanopartikeln mit
Stammzellpopulationen
Hintergrund und Projektbeschreibung
Eine wesentliche Voraussetzung, um die Wirkung neuer Zelltherapeutika zu verbessern, ist das
Verständnis des Verbleibs der applizierten Zellen. In diesem Projekt werden zur Markierung von
mesenchymalem Stammzellen und anderen Zellpopulationen Nanopartikel verwendet.
Hierdurch können Homing und Migration dieser Zellen mittels FACS und Laser Scanning
Mikroskopie (LSM) untersucht werden. Es werden sowohl klinisch zugelassene als auch in
Zusammenarbeit mit der Institut für Organische Chemie III speziell hergestellte Partikel
verwendet und Interaktionen dieser neuartigen Materialien mit Zellen nachgewiesen. Zur
Optimierung der zellulären Aufnahme wurde die Oberflächenladung der Partikel verändert
(anionisch, kationisch) und in einem weiten Bereich variiert. Ziel ist die Aufnahme von
Nanopartikeln in Zellen zu erhöhen und eine bessere Detektion der Zellen mittels MRT zu
erreichen.
In Zusammenarbeit mit der Klinik für Innere Medizin II (Kardiologie) und der Klinik für
Diagnostische und Interventionelle Radiologie des Universitätsklinikums Ulm sind weitere
Untersuchungen am MRT geplant.
Mesenchymale Stammzellen markiert mit Resovist ® . Eisennachweis mittels Berliner-Blau-Reakion.
Wichtigste Ergebnisse
Durch gezielte Veränderung der Oberflächeneigenschaften von superparamagnetischen
Nanopartikeln konnten die wesentlichen Faktoren für eine Aufnahme dieser Kontrastmittel in
Zellen bestimmt werden. Diese präklinischen Versuche mit adäquaten Markierungen der Zellen
stellen die Basis für klinische Zellmarkierungsstudien dar. FACS Messungen lieferten ein
quantitatives Maß für die Aufnahme und Untersuchungen am LSM und am
Transmissionselektronenmikroskop zeigten die subzelluläre Verteilung. Somit können die
Prozesse der Interaktion von Nanopartikeln und Zellen besser verstanden werden.
Summary
Superparamagnetic nanoparticles can be loaded into different clinically interesting cell types
and can be detected in-vitro and in animal models enabling studies on migration and homing of
e.g. mesenchymal stem cells. This should enhance the assessment of cell therapeutics and
should booster the development of better cell populations with a higher therapeutical impact.
63

Stammzellen und Zelltherapie
Standort Ulm
Arbeitsgruppe Zelluläre Immuntherapie und Stammzelltransplantation
Projektleiter Dr. med. Volker Mailänder
Mitarbeiter Myriam Lorenz (Biologie Doktorandin), Karin Fuchs (MTA)
Kooperationen Institut für Organische Chemie III, Universität Ulm
Klinik für Innere Medizin II, Klinik für Diagnostische und
Interventionelle Radiologie, Universitätsklinikum Ulm
Förderung DFG Schwerpunktprogramm (SPP1104, MA 3271/1)
Bausteinprojekt der Medizinischen Fakultät Universität Ulm (P.871)
Laufzeit des Projektes DFG Schwerpunktprogramm: 1.7.2004 bis 30.9.2006
Bausteinprojekt: 1.1.2005 bis 31.12.2007
Weitere Informationen
• Lorenz, M. R., V. Holzapfel, A. Musyanovych, K. Nothelfer, P. Walther, H. Frank, K.
Landfester, H. Schrezenmeier and V. Mailander (2006). Uptake of functionalized,
fluorescent-labeled polymeric particles in different cell lines and stem cells.
Biomaterials 27(14): 2820-8. Epub 2006 Jan 23.
• Holzapfel, V., M. Lorenz, C. K. Weiss, H. Schrezenmeier, K. Landfester and V. Mailander
(2006). Synthesis and biomedical applications of functionalized fluorescent and magnetic
dual reporter nanoparticles as obtained in the miniemulsion process.
J. Phys.: Condens. Matter 18: S2581–S2594.
• Mailänder V., Lorenz M., Schmitz B., Musyanovych A., Holzapfel V., Landfester K.,
Aschoff A., Wiesneth M., Schrezenmeier H.: Methods and tools for labelling cellular
therapeutics for MRI detection. 32 nd Annual Meeting of the European Group for Blood and
Marrow Transplantation (EBMT), Hamburg (2006)
Bone Marrow Transplant 37: Suppl. 1, S63 (No. P387) (2006)
64

Stammzellen und Zelltherapie
Charakterisierung von immunogenen Leukämie-assoziierten
Antigenen zur Peptid-Vakzinierung von Patienten mit Leukämie
Hintergrund und Projektbeschreibung
In Vorversuchen wurden bei Patienten mit Akuter Myeloischer Leukämie (AML) und Chronisch
Myeloischer Leukämie (CML) spezifische Leukämie-assoziierte Antigene (LAA) charakterisiert.
Darüber hinaus konnte gezeigt werden, dass AML-Blasten zur Antigen-Präsentation fähig sind,
zu einer Induktion zytotoxischer T-Lymphozyten gegen LAA führen und somit Leukämiezellen
lysieren können. Im Rahmen eines Immunmonitorings wurden CD8 + zytotoxische T-Zellen und
CD4 + / CD25 + regulatorische T-Zellen bei Patienten mit AML, MDS, MM nach RHAMM-R3-
Peptid-Vakzinierung bestimmt. Ziel des Projektes war die klinische Prüfung einer
Immuntherapie von Leukämie-Patienten durch Vakzinierung mit Leukämie-assoziierten
Antigenen als komplementärer Behandlung.
65
/ CML
Immunzytochemische Färbung der RHAMM-Expression auf Leukämiezellen (K562/CML), normalen Blutstammzellen
(PBSC) und Knochenmarkstammzellen (BMSC)
(M. Schmitt et al, Exp Hematol 2006)
Spezifische Lyse von RHAMM-R3-Zellen (■) durch CD8 + zytotoxische T-Zellen eines Patienten mit chronisch
myeloischer Leukämie (M. Schmitt, Exp Hematol 2006)
Wichtigste Ergebnisse
Im Rahmen einer Phase I/II-Pilot-Studie wurden inzwischen 14 Patienten mit malignen
hämatologischen Erkrankungen (AML, MDS, MM) mit einer RHAMM-R3-Peptid-Vakzinierung
komplementär behandelt. Bei 50 Prozent der protokollgemäß behandelten Patienten fand sich
ein immunologisches und hämatologisches Ansprechen mit Rückgang der Blasten bzw. des
Paraproteins, so dass das Protokoll zwischenzeitlich auf Patienten mit Chronisch Lymphatischer

Stammzellen und Zelltherapie
Leukämie (CLL) ausgeweitet wurde und eine Folge-Studie mit einer polyvalenten Peptid-
Vakzinierung (RHAMM, G250, PRAME) geplant ist.
Summary
Malignant cells of patients with acute or chronic myeloid leukemia (AML, CML) express specific
leukemia-associated antigens (LAA). Furthermore in-vitro assays have shown that these LAA
can serve as targets for cytotoxic T lymphocytes.
In a phase I/II study 14 patients with AML, MDS and multiple myeloma were vaccinated with a
RHAMM-R3 peptide. In 50 percent of the patients an immunological or hematological response
was achieved and this therapeutic approach was extended to chronic lymphocytic leukemia
patients. Furthermore a consecutive study is planned to combine supplementary epitopes of
LAA (RHAMM, G250, PRAME) as polyvalent vaccine produced under GMP-conditions.
Standort Ulm
Arbeitsgruppe Zelluläre Immuntherapie und Stammzelltransplantation
Projektleiter Prof. Dr. med. Michael Schmitt und Dr. med. Markus Wiesneth
Mitarbeiter Marlies Götz (MTA), PD Dr. med. Jochen Greiner
(Wissenschaftler), Dr. med. Li Li (Wissenschaftlerin), Dr. med.
Anita Schmitt (Wissenschaftlerin), Dr. rer. medic. Markus Rojewski
(Wissenschaftler)
Kooperationen Arbeitsgruppe Tumorimmunologie, Klinik für Innere Medizin III,
Universitätsklinikum Ulm
Förderung Deutsche José Carreras Leukämie-Stiftung e.V.
Laufzeit des Projektes 01.09.2003 bis 31.08.2006
Weitere Informationen
• Schmitt, M., Li, L., Giannopoulos, K., Chen, J., Brunner, C., Barth, T., Schmitt, A., Wiesneth,
M., Döhner, K., Döhner, H., Greiner, J.: Chronic myeloid leukemia cells express tumorassociated
antigens eliciting specific CD8+ T cell responses and are lacking costimulatory
molecules. Experimental Hematology 34: 1709-1719 (2006)
• Greiner, J., Li, L., Ringhoffer, M., Barth, T. F., Giannopoulos, K., Guillaume, P., Ritter, G.,
Wiesneth, M., Döhner, H., Schmitt, M.: Identification and characterization of epitopes of the
receptor for hyaluronic acid-mediated motility (RHAMM/CD168) recognized by CD8+ T cells
of HLA-A2-positive patients with acute myeloid leukemia. Blood 106 (3): 938-945 (2005)
• Li, L., Reinhardt, P., Schmitt, A., Barth, T.F.E., Greiner, J., Ringhoffer, M., Döhner, H.,
Wiesneth, M., Schmitt, M.: Dendritic cells generated from acute myeloid leukemia (AML)
blasts maintain the expression of immunogenic leukemia associated antigens. Cancer
Immunol Immunother 54 (7): 685-693 (2005)
66

Stammzellen und Zelltherapie
Genetische Markierung und Modifikation von
hämatopoetischen und mesenchymalen Stammzellen zum
direkten in vivo-Nachweis und Verbesserung des
Therapieeffektes
Hintergrund und Projektbeschreibung
Die mögliche Regeneration ischämisch geschädigten Gewebes, z. B. bei Myokardinfarkt oder
cerebralem Insult, durch Applikation autologer hämatopoetischer Stammzellen wird weiterhin
kontrovers diskutiert. Um ein "Homing" adulter Stammzellen in vivo direkt nachweisen zu
können, wurde eine transiente, genetische Markierung von CD34-positiven Blutstammzellen mit
Elektroporation für die klinische Anwendung etabliert. Basierend auf diesen Ergebnissen erfolgt
derzeit eine Weiterentwicklung mittels mRNA-Transfektion zur Modifikation von
Stammzelleigenschaften, insbesondere dem "Migrations- und Homing-Verhalten" sowohl
hämatopoetischer als auch mesenchymaler Stammzellen.
67
FACS nach 3 h
Mock
LNGFR
44%
Immunhistochemie
E Expression und Vitalität der CD34+ Zellen nach genetischer Markierung mit LNGFR
% % positive positive cells cells
% viable cells
50 50
40 40
30 30
20 20
10 10
0 0
80
70
60
50
40
30
20
10
0
Expressionskinetik
LNGFR expression expression of transfected of transfected CD34CD34positivepositive PBSC PBSC
4 4 h h 36 36 h h 84 84 h h 120 120 h h 200 200 h h
time
time
Vitalitätskinetik
Vitalitätskinetik
Viability of Viability deltaLNGFR of deltaLNGFR transfected transfected CD34 CD34
positive positive PBSCs
PBSCs
% viable cells
80
70
60
50
40
30
20
10
4 h
0
4 h 36 h 36 h 84 h 84 h 120 h 200 h
120 h 200 h
time
time
Mock
Mock
LNGFR
LNGFR
Wichtigste Ergebnisse
Für die genetische Markierung von hämatopoetischen (PBSC) und mesenchymalen
Stammzellen (MSC) wurde die Elektroporation mit Plasmid DNA Delta-LNGFR (Low Affinity
Nerve Growth Factor Receptor) für den klinischen Einsatz etabliert. Die Transfektionseffizienz
betrug bei peripheren Blutstammzellen mit cDNA bis zu 45 %. Mit mRNA ließ sich die
Transfektionseffizienz sowohl bei hämatopoetischen als auch bei mesenchymalen Stammzellen
auf 90 % steigern, ohne dass es zu einer Beeinträchtigung der Viabilität und der Proliferations-
Fähigkeit der Zellen kam. In vitro assays zeigten eine normale Ausdifferenzierung der
transfizierten MSC zu Adipozyten, Chondrozyten und Osteoblasten. Für das Verfahren der
mRNA Nucleofektion, das zur Modifikation des "Migrations- und Homing-Verhaltens" adulter
Progenitorzellen geplant ist, wurde inzwischen vom Deutschen Patent- und Markenamt die
Erteilung eines Patentes beschlossen.

Stammzellen und Zelltherapie
Summary
There is an ongoing debate about the impact and mechanism of tissue repair by autologous
stem cells. Especially questions about homing and integration of hematopoietic stem cells into
the damaged tissue are not yet solved in humans. Therefore a transient genetic labelling of
CD34 positive peripheral stem cells by electroporation of plasmid DNA Delta-LNGFR (low
affinity nerve growth factor receptor) was established. While plasmid DNA showed a
transfection efficiency of up to 45 %, mRNA transfection was even more effective with about
90 % in hematopoietic as well as in mesenchymal stem cells (MSC) without affecting viability
and proliferation of the cells. In vitro assays showed a normal differentiation of transfected MSC
into adipocytes, chondrocytes and osteoblasts. In the future genetic modification of stem cells
should improve migration and homing for an enhanced therapeutic effect. For the procedure of
genetic modification by mRNA nucleofection a patent has been granted by the German Patent
and Trade Mark Office.
Standort Ulm
Arbeitsgruppe Zelluläre Immuntherapie und Stammzelltransplantation
Projektleiter Prof. Dr. med. Jan Torzewski und Dr. med. Markus Wiesneth
Mitarbeiter PD Dr. med. Jochen Greiner, Dr. rer. medic. Markus Rojewski,
Dr. med. Klaus Schwarz, Dr. hum. biol. Juliane Wiehe
Kooperationen Klinik für Innere Medizin II, Klinik für Innere Medizin III,
Universitätsklinikum Ulm
Förderung DRK-Blutspendedienst Baden-Württemberg – Hessen und
Universitätsklinikum Ulm
Laufzeit des Projektes Seit 01/2003, andauernd.
Weitere Informationen
• Greiner, J., Wiehe, J., Wiesneth, M., Zwaka, T.P., Prill, T., Schwarz, K., Bienek-Ziolkowski,
M., Schmitt, M., Döhner, H., Hombach, V., Torzewski, J.:Transient genetic labeling of
human CD34-positive hematopoietic stem cells using nucleofection. Transfus Med
Hemother 31: 136-141 (2004)
• Wiehe, J.M., Zimmermann, O., Greiner, J., Homann, J.M., Wiesneth, M., Hombach, V.,
Torzewski, J.: Labeling of adult stem cells for in vivo-application in the human heart. Histol
Histopathol. 20 (3): 901-906 (2005)
• Greiner, J., Torzewski, J., Ponsaerts, P., Rojewski, M.T., Kronawitter, D., Schrezenmeier,
H., Hombach, V., Döhner, H., Schmitt, M., Wiesneth, M., Zimmermann, O., Wiehe, J.M.:
Highly efficient mRNA- and cDNA-based transient gene delivery into human progenitor
cells. 48th Annual Meeting - American Society of Hematology (ASH), Orlando, Florida
(USA). Blood 108 (No. 11): 464b (No. 5471) (2006)
68

Stammzellen und Zelltherapie
Erythrozyten aus Stamm- und Vorläuferzellen
Hintergrund und Projektbeschreibung
Die ex vivo Expansion von Stammzellen zu Erythrozyten bietet die Möglichkeit, möglichst
selektiv erythropoetische Zellen in Kultur herzustellen. Solche Zellen könnten angewendet
werden (1) bei Patienten mit Unverträglichkeiten gegen praktisch alle zur Verfügung stehenden
Erythrozytenkonzentrate aufgrund von irregulären Antikörpern gegen hochfrequente Antigene,
oder als (2) möglichst universelle Quelle zum Beispiel für Blutgruppe 0, Rhesus(D) negative
Erythrozyten. Stamm- und undifferenzierte Vorläuferzellen werden aus dem Knochenmark oder
dem peripheren Blut isoliert und in vitro in Gegenwart hämatopoetischer Wachstumsfaktoren
gezielt zur Proliferation und Differenzierung in die rote Blutzellreihe stimuliert (Abb. 1).
69
LV
GMV
HS
EV
Abb. 1: Schema der Differenzierung erythrozytärer Zellen aus hämatopoetischen Stammzellen. Die Reifung von
hämatopoetischen Stammzellen zu Erythrozyten erfolgt über verschiedene Differenzierungs-Zwischenstufen: HS =
pluripotente hämatopoetische Stammzelle; LV = Lymphopoetische Vorläuferzelle; MV = Myelopoetische Vorläuferzelle;
GMV = Granulopoetische / Monozytopoetische Vorläuferzelle; EV = Eosinophile Vorläuferzelle; MEV =
Megakaryozytäre / Erythroide Vorläuferzelle; N = Normoblast; E = Erythrozyt.
Wichtigste Ergebnisse
Menschliche CD34+ Stammzellen wurden in Gegenwart von Erythropoetin und weiterer
blutbildender Wachstumsfaktoren (Interleukin-3, Stammzellfaktor, Granulozyten-Makrophagen
Kolonie-Stimulierender Faktor (GM-CSF) in Kulturmedium über 19 Tage vermehrt. Wir fanden
eine Ausreifung zu ca. 50% erythropoetischen Zellen, die den Reifungsmarker Glycophorin A
tragen (Abb. 2). Pro eingesetzte CD34+ Stammzelle konnten hierbei ca. 120 Glycophorin Apositive
Zellen generiert werden. Wird ein alternatives Kulturschema mit einer zusätzlichen
Zellschicht humaner Mesenchymaler Stammzellen (MSCs) verwendet, wurde eine weitere
Ausreifung beobachtet, teilweise zu kernlosen Zellen (Erythrozyten). Der gesamte
Vermehrungsfaktor lag nunmehr bei über 10.000fach pro eingesetzte CD34+ Zelle.
Summary
Ex vivo expansion of stem cells to erythrocytes provides an approach to selectively generate
erythropoietic cells in culture. Such cells could be of value (i) for patients with incompatibilities
due to the presence of antibodies against high frequency antigens on red cells, or (ii) as a
universal source for e.g. Blood Group 0, Rhesus (D) negative red cells. Stem and
undifferentiated progenitor cells are isolated from bone marrow or peripheral blood and cultureexpanded
into a majority of erythropoietic cells in the presence of a combination of
hematopoietic growth factors including Erythropoietin.
MV
N
E

CD71
Unreife Vorläuferzelle
75,2%
17,1%
Tag 4
2,1%
5,7%
Glycophorin A
erythrozytärer Reifungsmarker
CD71
Unreife Vorläuferzelle
Stammzellen und Zelltherapie
Tag 19
42,9% 10,6%
7,0%
39,6%
Glycophorin A
erythrozytärer Reifungsmarker
Abb. 2: Durchflusszytometrische Analyse der Induktion des erythrozytären Reifungsmarkers Glycophorin A während
der Differenzierung von primitiven hämatopoetischen Vorläuferzellen in Gegenwart Erythropoese stimulierender
Wachstumsfaktoren. Für vier Tage vorkultivierte unreife CD34+ Vorläuferzellen aus dem peripheren Blut von G-CSF
stimulierten Spendern exprimieren den Transferrin-Rezeptor CD71 hoch, jedoch kaum Glycophorin A. Mit
zunehmendem Grad der Differenzierung zu Erythrozyten in Differenzierungsmedium wird Glycophorin A exprimiert, die
Oberflächenexpression von CD71 nimmt ab.
Standort Frankfurt
Arbeitsgruppe Stammzellbiologie
Projektleiter PD Dr. med. Reinhard Henschler
Mitarbeiter Dipl. Biotechnol. Christine Ströbele, Dr. rer. nat. Brigitte Rüster
Kooperationen Prof. Dr. J. Hescheler, Institut für Neurophysiologie, Universität zu
Köln
Förderung Industriemittel
Laufzeit des Projektes 01.10.2005-31.08.2008
70

Stammzellen und Zelltherapie
Stammzellen der Leukämie
Hintergrund und Projektbeschreibung
Neue Erkenntnisse weisen auf eine hierarchische Ordnung von verschiedenen undifferenzierten
Zellpopulationen in Leukämien, möglicherweise auch generell in Tumoren, hin. Da für die
Heilung von Leukämien eine dauerhafte Eliminierung der leukämischen Stammzellen - als
Subpopulation der Gesamtheit der leukämischen Zellen eines Organismus - von grundlegender
Bedeutung sein dürfte, sollen hier die sogenannten Leukämie-initiierende Zellen (L-IC) näher
charakterisiert werden. Es werden neue Erkenntnisse zum Phänotyp von L-IC und der
Steuerung ihres Überlebens und malignen Wachstums erwartet. Diese Daten sollen die
Voraussetzungen für die Entwicklung von Therapieverfahren zur Bekämpfung von Leukämien in
Patienten verbessern, indem sie die Entwicklung von präferentiell auf die Bekämpfung von
Leukämie-Stammzellen ausgerichteten Therapien ermöglichen.
Erythrozyten
71
Thrombozyten
Granulozyten
Makrophagen
Lin-Sca1 + c-kit + flk2- Lin-Sca1 + c-kit + flk2- Lin-Sca1 + c-kit + flk2 +
Lin-Sca1 + c-kit + flk2 +
dendritische T-Lympho- NK- B-Lympho-
Zellen zyten Zellen zyten
Kandidaten-Zellpopulationen für leukämische Stammzellen in dieser Studie: LT-HSC (Langzeit-aktive
Hämatopoetische Stammzellen) und ST-HSC (Kurzzeit-aktive Hämatopoetische Stammzellen) mit den Phänotypen
Linienmarker (Lin) - Sca1 + c-kit + flk2 - bzw. Lin - Sca1 + c-kit + flk2 - . Weiterhin werden Multipotente Progenitorzellen (MPP),
„Common Myeloid Progenitors“ (CMP) und Granuloyzten-Makrophagen-Progenitorzellen (GMP) als mögliche
Ursprungszellen induzierter Leukämien untersucht. Weitere Abkürzungen: MEP, Myeloerythrozytäre Progenitorzellen,
CLP, „Common Lymphoid Progenitor“, Pro-DC/-T/-B/-NK Pro-dendritische/-T/-B/-NK Zellen. Nach Passegue et al. 2001
Wichtigste Ergebnisse
Durch Zellsortierungs- und Transplantationsexperimente in Mäusen wurden für die
Leukämogenese verantwortliche Stamm- und Vorläuferzellpopulationen phänotypisch definiert.
Die Ergebnisse zeigen, dass – je nach eingesetztem leukämogenem Onkogen – die
leukämogene Transformation auf verschiedenen Differenzierungsstufen erfolgen kann.
Genexpressionsanalysen solcher Subpopulationen legen ausserdem nahe, dass die
untersuchten leukämogenen Onkogene unterschiedliche Wachstumsstimuli für ihr Überlegen
und ihre weitere Entwicklung nutzen.

Stammzellen und Zelltherapie
Summary
Recent data in the literature point to a hierarchical order of various cell surface-marker defined
undifferentiated cell populations not only in normal healthy stem and progenitor cells, but also in
leukemia. Since for the therapeutic elimination of leukemias the eradication of leukaemiainitianting
stem cells (L-IC) is thus of utmost importance, we wish to characterize L-IC in more
detail in this project. We expect new insights into the phenotype and the signals which
determine survival and growth of L-IC. These data shall contribute to substantiate the basis for
more efficient anti-leukemic treatment regimens.
Standort Frankfurt
Arbeitsgruppe Stammzellbiologie
Projektleiter PD Dr. med. Reinhard Henschler, gemeinsam mit PD Dr. M.
Ruthardt, Zentrum der Inneren Medizin, Medizinische Klinik II
(Hämatologie, Onkologie, Rheumatologie)
Mitarbeiter Dr. phil. nat. Brigitte Rüster (wissenschaftliche Mitarbeiterin)
Sabrina Boehme (MTA)
Kooperationen PD Dr. M. Ruthardt, Medizinische Klinik II Hämatologie, Onkologie,
Rheumatologie, Zentrum der Inneren Medizin, Klinikum der J. W.
Goethe-Universität Frankfurt (gemeinsame Projektleitung).
Dr. Markus Rojewski, Institut für Klinische Transfusionsmedizin,
DRK-Blutspendedienst, Ulm
Förderung Deutsche José Carreras Leukämie-Stiftung e.V.
Laufzeit des Projektes 01.10.2004-30.09.2007
Weitere Informationen
• Zheng X, Seshire A, Ruster B, Bug G, Beissert T, Puccetti E, Hoelzer D, Henschler R,
Ruthardt M. Arsenic but not all-trans retinoic acid overcomes the aberrant stem cell capacity
of PML/RARalpha-positive leukemic stem cells. Haematologica. 92:323-331 (2007)
72

Stammzellen und Zelltherapie
Charakterisierung und Optimierung der Migration
Mesenchymaler Stammzellen (MSCs) als kritischer Schritt in
der Toleranzinduktion gegenüber Allotransplantaten
Hintergrund und Projektbeschreibung
Die Induktion einer Toleranz gegen Allotransplantate stellt eine der wesentlichen ungeklärten
Fragen im Bereich des „Tissue-Engineerings“ dar. Innerhalb eines Verbundprojektes –
gemeinsam mit Arbeitsgruppen an den Universitäten München und Düsseldorf - soll eine
effektive Strategie zur Verhinderung der Transplantatabstoßung mit Hilfe mesenchymaler
Stammzellen (MSCs) erarbeitet werden. Im Teilprojekt in Frankfurt werden die Rolle der
Migration von MSCs und ihre Interaktion mit Effektorzellen des Immunsystems für die
Toleranzinduktion näher charakterisiert. Im Mittelpunkt steht das Homing transplantierter MSCs
in lymphatische Organe, ihre Interaktion mit Immuneffektorzellen wie z.B. Antigenpräsentierenden
Zellen, sowie die Ausnutzung der Manipulation von Rho- und Rac-GTPasen
zur Verbesserung des Migrationsverhaltens transplantierter MSCs.
73
Leber
Blutgefäß
„Homing“ (= Austreten aus dem Blutstrom) von in Kultur expandierten humanen Mesenchymalen Stammzellen (MSCs,
markiert durch Pfeile), die vor Infusion mit einem roten Fluoreszenzfarbstoff markiert wurden, in die Leber im Tiermodell
24 Stunden nach Transplantation. Blau markiert sind Zellkerne, grün Endothelzellen (= Auskleidung der Blutgefäße).
Fluoreszenz-mikroskopische Aufnahme, Vergrößerung 400 fach.
Wichtigste Ergebnisse
Unsere Untersuchungen zeigten, dass MSCs sich im Blutstrom überraschend gut bewegen
können und ein gewebespezifisches „Homing“-Verhalten aufweisen. Dies macht sie für
zelltherapeutische Anwendungen im Sinne der Beeinflussung zellvermittelter körpereigener
Reaktionen, etwa innerhalb des Immunsystems oder der Geweberegeneration, überaus
interessant.
Unsere MSCs zeigen in vitro im Flusskammermodell koordiniertes „Rolling“verhalten mit der
millisekundenschnellen Ausbildung und Retraktion von Podien. Nach Transplantation in
immundefekte Mäuse unterliegen sie einer geordneten Interaktion mit dem Endothel und rollen
in Abhängigkeit des Rollingfaktors P-Selektin auf der Oberfläche von Endothelzellen. Mit einem
Fluoreszenzfarbstoff markierte transplantierte MSCs verlassen die Blutbahn durch
Endothelzellen und gelangen in den interstitiellen Raum der Leber und der Milz. Die
Inaktivierung des kleinen GTPase-Signalmoleküls Rho bewirkt eine Verstärkung dieser
Bindungen in den bisher durchgeführten in vitro-Analysen.

Stammzellen und Zelltherapie
Summary
The induction of tolerance against allotransplants is one of the main questions in the area of
“tissue engineering”. Within the collaborative research group between the Universities of
Düsseldorf, Frankfurt and Munich, an effective strategy shall be created to suppress transplant
rejection using Mesenchymal Stem Cells (MSCs). In the project located in Frankfurt, the role of
the migration of MSCs and their interaction with effector cells of the immune system to induce
tolerance induction will be more closely characterized. The focus will be on the homing of
transplanted MSCs into lymphatic organs, their interaction with immune effector cells e.g.
antigen-presenting cells, as well as the manipulation of signalling through Rho family small
GTPases to improve the migration function of MSCs.
Standort Frankfurt
Arbeitsgruppe Stammzellbiologie
Projektleiter PD Dr. med. Reinhard Henschler, Dr. med. Rudolf Richter
Mitarbeiter Dr. Erika Deak, Dr. phil. nat. Brigitte Rüster
Kooperationen PD Dr. D. Dilloo, Universität Düsseldorf, Prof. Dr. J. Seißler,
Ludwig-Maximilians-Universität, München, Prof. Dr. J. Priller,
Universitätsklinikum Charité Berlin.
Förderung Bundesministerium für Bildung und Forschung (BMBF),
Förderschwerpunkt „Zellbasierte Regenerative Medizin“
(01GN0525)
Laufzeit des Projektes 01.09.2005-31.08.2008
Weitere Informationen
• Ruster, B., Gottig, S., Ludwig, R.J., Bistrian, R., Muller, S., Seifried, E., Gille, J., Henschler,
R. (2006) Mesenchymal stem cells (MSCs) display coordinated rolling and adhesion
behavior on endothelial cells. Blood 108:3938-3944.
• Rüster B, Grace B, Seitz O, Seifried E, Henschler R. (2005) Induction and Detection of
Human Mesenchymal Stem Cell Migration in the 48 well Re-usable Transwell Assay. Stem
Cells and Development 14:231-235.
• http://www.gesundheitsforschung-bmbf.de/de/1195.php
74

Stammzellen und Zelltherapie
Rolle von Rho-GTPasen in der Tumorangiogenese
Hintergrund und Projektbeschreibung
Vorläuferzellen aus dem Knochenmark leisten einen wesentlichen Beitrag zur Entstehung von
Gefäßen während der Tumorbildung. Kürzlich wurde gezeigt, dass durch Transplantation von
mit einem „Suicide“ (=Selbstmord)-Gen ausgerüsteten, aus dem Knochenmark abgeleiteten
blutbildenden Vorläuferzellen das Tumorwachstum im Tiermodell stark gebremst werden kann,
bis hin zum Verschwinden der Tumoren.
Rho-GTPasen sind als intrazelluläre Signalmoleküle insbesondere an der Aktivierung der
Zelladhäsion und Migration beteiligt. In dem vorliegenden Projekt soll die Rolle von sog. Rho-
GTPasen in blutbildenden Vorläuferzellen und Endothelzellen für die Tumorangiogenese
aufgeklärt werden. Für die Untersuchungen werden Mausstämme verwendet, denen entweder
beide Allele des Rac1-Gens, beide Allele des Rac2-Gens, oder sowohl das Rac1 und das
Rac2-Gen in hämatopoetischen und/oder in Endothelzellen fehlen. In vitro-Untersuchungen mit
solchermassen genetisch veränderten Vorläufer- und Endothelzellen dienen zur Klärung
verantwortlicher Adhäsionsmoleküle und zur Identifizierung von Steuerungsmechanismen für
eine verbessertes Tumor-Homing. Darüber hinaus werden in diesem präklinischen Modell in
Kultur expandierte hämatopoetische Vorläuferzellen für eine Tumor-suppressive Therapie
eingesetzt.
Einbau von aus dem Knochenmark stammenden blutbildenden Zellen in einen subkutanen Tumor, dargestellt
durch Anfärbung aus dem Knochenmark stammender Zellen mittels des Transgens Grün Fluoreszierendes
Protein (GFP) in grün. Blutgefäße sind durch Anfärung des CD31 Proteins in rot sichtbar gemacht.
Vergrößerung 400fach.
Wichtigste Ergebnisse
In den bisher durchgeführten Experimenten zeigte sich, dass das Wachstum subkutan
applizierter epithelialer Tumorzellen sowie von Lungenmetastasen eines malignen Melanoms in
Abwesenheit des Rac2-Gens überraschenderweise verstärkt erfolgt. Parallel hierzu zeigten
Rac2-defiziente Mäuse eine konstitutive Mobilisierung hämatopoetischer Progenitorzellen in die
Blutbahn. Unabhängig von der Anwesenheit des Rac2-Gens lokalisierten ins Blut injizierte
Vorläuferzellen nach i.v. Injektion bereits innerhalb von 24 Stunden in Tumore. Wir haben
Hinweise, dass aus den Vorläuferzellen oro-angiogene sog. „endotheliale Progenitorzellen“
(EPCs) und Tumor-infiltrierende Monozyten (TEMs) differenzieren. Gegenwärtig werden die in
den Tumoren detektierten EPCs und TEMs qualitativ und quantitativ näher charakterisiert.
Summary
The contribution of bone marrow-derived progenitor cells (BM-PCs) to vessel growth in
malignant and ischemic tissues is increasingly being recognized. Consolidating evidence
suggests that BM-PCs complement neovascularization by in situ-differentiation into endothelial
cells of newly shaped vessels and/or by releasing angiogenic growth factors at tumour sites.
Pertinent to these data, we have recently observed that BM-PCs also localize to metastatic sites
of cancer. As BM-PCs preferentially home to tumour sites in different experimental tumour
models, they may constitute suitable cellular carriers for gene therapy to target tumour growth.
75

Stammzellen und Zelltherapie
As important molecular switches of a wide range of signal transduction pathways, Rho GTPases
(with particular importance of Rac1 and Rac2) have been demonstrated to regulate the homing
efficiency of hematopoietic stem/progenitor cells (HPCs). At the same time, Rho GTPase
engagement in both endothelial cells (ECs) and in circulating populations coordinates adhesion
and transendothelial migration. Hence, manipulation of Rho GTPase activities in BM-PCs and
host ECs is likely to affect the ability of BM-PCs to home to angiogenic sites and to modulate
neovascularization. We therefore hypothesize that the activity of distinct Rho GTPases in BM-
PCs and host ECs will decisively control the recruitment efficiency of BM-PCs to local tumour
and metastatic sites.
Standort Frankfurt
Arbeitsgruppe Stammzellbiologie
Projektleiter PD Dr. med. Reinhard Henschler, gemeinsam mit Prof. Dr. J. Gille,
Zentrum der Dermatologie und Venerologie
Mitarbeiter Dipl. Biol. Stephan Göttig
Dr. rer. nat. A. Jochheim-Richter
Dipl. Ing. Christine Ströbele
Kooperationen Prof. Dr. Jens Gille, Zentrum der Dermatologie und Venerologie,
Klinikum der J. W. Goethe –Universität Frankfurt (gemeinsame
Projektleitung)
Prof. Dr. Stefanie Dimmeler, Dr. E. Chavakis, Medizinische Klinik
III, Zentrum der Inneren Medizin, Klinikum der J. W. Goethe –
Universität Frankfurt
Prof. Dr. Thomas Wieland, Institut für Pharmakologie, Universität
Mannheim.
Förderung Deutsche Forschungsgemeinschaft
Laufzeit des Projektes 1.7.2005 – 30.06.2009
Weitere Informationen
• Gottig S, Mobest D, Ruster B, Grace B, Winter S, Seifried E, Gille J, Wieland T, Henschler
R. Role of the monomeric GTPase Rho in hematopoietic progenitor cell migration and
transplantation. Eur J Immunol. 36:180-189 (2006).
• Gille J, Heidenreich R, Pinter A, Schmitz J, Boehme B, Hicklin DJ, Henschler R, Breier G.
Simultaneous blockade of VEGFR-1 and VEGFR-2 activation is necessary to efficiently
inhibit experimental melanoma growth and metastasis formation. Int J Cancer 120:1899-
1908 (2007).
• http://www.transregio23.de
76

Stammzellen und Zelltherapie
Zentralprojekt: Mausmodelle der Leukämie (Teil der
Forschergruppe: „Pathologische Genprodukte und ihre
Wirkungsmechanismen“)
Hintergrund und Projektbeschreibung
Innerhalb der 2005 neu gegründeten Forschergruppe „Pathologische Genprodukte und ihre
Wirkmechanismen“ bearbeitet das Projekt zentral sämtliche Tiermodelle zur Induktion von
Leukämien. Ziel ist dabei, hinsichtlich der in vivo–Endpunkte ein Höchstmaß an Vergleichbarkeit
des Projektverbundes sicherzustellen. Darüber hinaus stellt das Projekt durch die hier etablierte
Leukämie-Zellbank einheitlich charakterisierte Proben weltweit zur Verfügung.
Zur Induktion der murinen Leukämien wird das so genannte „Transduktions-
Transplantationsmodell“ verwendet. Nach retroviraler Transduktion aufgereinigter
Knochenmarkzellpopukationen und Transplantation in vorbestrahlte Mäuse wird das
leukämogene Potential der untersuchten Onkogene zusätzlich zu den international etablierten
Leukämie - Diagnosekriterien (entsprechend der Bethesda-Klassifikation, Blood 100:280, 2002)
auch im sogenannten Milz-Koloniebildungsassay (CFU-S) sowie in der kompetitiven Stammzell-
Repopulation untersucht und dargestellt.
Das Projekt möchte einen zentralen Beitrag zur Etablierung geeigneter präklinischer Modelle
der am Standort Frankfurt untersuchten und therapierten Leukämiezelltypen leisten. Diese
dienen in dem Forschungsverbund vor allem der Erarbeitung neuer Therapieansätze multimodaler
Natur unter Einbeziehung sogenannter „Biologicals“.
Nachweis leukämischer Zellen im Blut von Mäusen nach Transplantation mit Knochenmarkzellen, die mit einem
retroviralen Vektor transduziert wurden der das leukämogene Onkogen PML-RARalpha enthält. Vergrößerung 100fach.
Wichtigste Ergebnisse
Nach Transduktion mit verschiedenen leukämogenen Onkogenen (Transkripte der Fusionsgene
Bcr-Abl, PML-RARalpha, AML1-ETO, MLL-AF4) fanden wir Veränderungen im Proliferations-
und Differenzierungsverhalten primitiver Knochenmark-Vorläuferzellen sowohl in vitro und im
Milzkoloniebildungsassay in vivo. Darüber hinaus wurden nach Transplantation in bestrahlte
Empfängermäuse durch die meisten überprüften Onkogenen jeweils typische Leukämien
induziert. Es wurde damit begonnen, das somit validierte einheitliche Testmodell für Studien der
Kooperation mehrerer verschiedener leukämogener Onkogene einzusetzen.
77

Stammzellen und Zelltherapie
Summary
To date, common standards for the modelling of leukemia in mice have not been set. Rather,
individual research groups have generally adapted murine models to their needs. Moreover,
both transgenic and “transduction-transplantation” models have been developed; their results
remain difficult to compare. The current project aims at defining standards for reproducible
leukemia induction.
Standort Frankfurt
Arbeitsgruppe Stammzellbiologie
Projektleiter PD Dr. med. Reinhard Henschler
Mitarbeiter Dr.phil. nat. Brigitte Rüster
Dr. rer. nat. A. Jochheim-Richter
Sabrina Boehme (MTA)
Kooperationen Prof. Dr. Rolf Marschalek, Zentrum der Pharmazie und Biochemie,
J. W. Goethe –Universität
PD Dr. Martin Ruthardt, Medizinische Klinik II (Hämatologie,
Onkologie, Rheumatologie), Klinikum der J.W. Goethe-Universität
Frankfurt
Dr. Elena Puccetti, Medizinische Klinik II (Hämatologie, Onkologie,
Rheumatologie), Klinikum der J.W. Goethe-Universität Frankfurt
Dr. Manuel Grez, Chemotherapeutisches Forschungsinstitut Georg
Speyer-Haus Frankfurt
Prof. Dr. M.. Hansmann, Institut für Pathologie, Klinikum der
J.W.Goethe-Universität Frankfurt
Förderung Mildred-Scheel-Stiftung der Deutschen Krebshilfe e.V.
Laufzeit des Projektes 1.11.2005 – 31.10.2008
Weitere Informationen
• Henschler R, Gottig S, Junghahn I, Bug G, Seifried E, Muller AM, Fichtner I. Transplantation
of human acute myeloid leukemia (AML) cells in immunodeficient mice reveals altered cell
surface phenotypes and expression of human endothelial markers. Leuk Res. 29:1191-
1199 (2005).
78

Stammzellen und Zelltherapie
Isolation und Charakterisierung endothelialer Vorläuferzellen
aus Nabelschnurblut, Subprojekt des Teilprojektes C3
„Analysis of the multistep nature of homing and incorporation
of circulating progenitor cells during tumor angiogenesis“ im
Rahmen des TR-SFB 23
Hintergrund und Projektbeschreibung
Angiogenese beschreibt den Prozess der postnatalen Blutgefäßneubildung. Dies ist ein
notwendiger Prozess bei der Heilung von Wunden, bei der Bildung der Plazenta, beim
Menstruationszyklus und bei der Ovulation. Leider spielt Angiogenese auch eine wichtige Rolle
bei der Vaskularisation maligner Tumoren und Metastasen.
Ein essentieller Schritt während der Angiogenese ist die Rekrutierung endothelialer Zellen an
dem Ort der mikrovaskulären Proliferation. Ausgehend aus präexistenten Gefäßen können
Endothelzellen migrieren und proliferieren, um neue Gefäße zu formieren. Alternativ können
endotheliale Vorläufer- oder Stammzellen aus der Zirkulation rekrutiert werden.
Insbesondere in der Therapie pathologischer Angiogenese und Vaskularisierungsstörungen
bieten die endothelialen Vorläuferzellen viele Möglichleiten. Daher ist das Ziel des Projektes,
zunächst Techniken zur Isolierung endothelialer Vorläuferzellen aus Knochenmark und
Nabelschnurblut zu etablieren und das Differenzierungspotential dieser Zellen zunächst in vitro
zu analysieren. Im Weiteren soll das Homing und die Integration dieser Zellen, vergleichend zu
embryonalen endothelialen Vorläuferzellen, in einem Tumorangiogenese-Modell analysiert
werden.
Wichtigste Ergebnisse
Im Gegensatz zu Knochenmark, scheint Nabelschnurblut Endothelvorläuferzellen zu enthalten,
die in Zellkultur zu Endothelzellen ausreifen. Wir nennen diese Zellen Endothelvorläuferabgeleitete
Zellen (EPDC). Diese Zellen zeichnen sich durch eine typische endotheliale
Morphologie aber auch funktionelle Charakteristika aus. Die proliferative Kapazität dieser Zellen
unterscheidet sich von reifen Endothelzellen der Nabelschnurvene (HUVEC). Im Gegensatz zu
diesen reifen Zellen zeichnen sich die EPDC nicht nur durch stärke Expansion sondern auch
durch eine leicht verstärkte Expression der Stammzellmarker CD34, CD133 und VEGFR-2 aus.
Insbesondere weitergehende funktionelle Studien werden weitere Einsichten in die Hierarchie
der endothelialen Vorläuferzellen ergeben.
In vitro Gefäßbildung (links) und Nachweis der Expression von von-Willebrand-Faktor (rechts) von EPDC isoliert aus
dem humanen Nabelschnurblut.
79

Stammzellen und Zelltherapie
Summary
Mature endothelial cells are terminally differentiated cells with a low proliferation potential.
Accumulating data suggest that the peripheral blood contains a unique subtype of circulating,
bone marrow derived cells exploiting the capacity of embryonal angioblasts. These cells have
the capacity to proliferate and differentiate into mature endothelial cells. According to this
potency they were termed endothelial progenitor cells (EPC). After prolonged culture a
monolayer with typical endothelial morphology is obtained consisting of cells with a mature
endothelial phenotype and function: endothelial progenitor derived cells (EPDC).
EPC may contribute to new blood vessel formation and thus promote neovascularistaion during
tissue ischemia, vascular trauma or tumour growth. However the molecular and cellular
mechanisms underlying EPC recruitment are poorly understood. To analyse the hierarchy of
EPC, EPDC and mature endothelial cells in terms of the multistep nature of homing and
incorporation into the tumour vasculature, we isolated and characterised EPC and EPDC from
umbilical cord blood comparing them with embryonal EPC.
Standort Mannheim
Arbeitsgruppe Zell- und Immuntherapie
Projektleiter PD Dr. P Vajkoczy (Klinik für Neurochirurgie, Universitätsklinikum
Mannheim);
Prof. Dr. Harald Klüter, Dr. Karen Bieback
Mitarbeiter Susanne Elvers-Hornung
Kooperationen AG von PD Dr. P. Vajkoczy, insbesondere Mara Vinci
Partner des TR-SFB
Förderung DFG (Kosten Gesamtprojekt)
Laufzeit des Projektes 01.09.2005 – 31.08.2009
Weitere Informationen
• www.transregio23.info
• Vorträge und Poster standen bisher im Zusammenhang mit TR-SFB internen
Veranstaltungen: (Kick-Up Meeting: K. Bieback, Summer-School: M. Vinci, K. Bieback,
Statusmeeting: P. Vajkoczy, Subgroupmeeting: M. Vinci, K. Bieback)
80

Stammzellen und Zelltherapie
Vergleichende Analyse mesenchymaler Stammzellen aus
Knochenmark, Nabelschnurblut oder Fettgewebe
Hintergrund und Projektbeschreibung
Mesenchymale Stammzellen (MSC) sind adulte Stammzellen und können aus unterschiedlichen Geweben gewonnen
werden. Sie sind multipotent, unterstützen die Hämatopoese, sind nicht immunogen und weisen sogar
immunsuppressive Aktivitäten auf. Mit diesen Eigenschaften ausgezeichnet stellen sie eine Alternative zu embryonalen
Stammzellen dar, um sie beispielsweise für zelltherapeutische Zwecke autolog oder allogen einzusetzen. Die
ursprünglichste und am besten charakterisierte Quelle für MSC ist Knochenmark (KM). Neuere und weniger gut
charakterisierte alternative Quellen sind z.B. Nabelschnurblut (NSB) und Fettgewebe. Zentrales Thema des Projektes
ist die vergleichende Analyse der MSC aus den drei unterschiedlichen Quellen.
Hierbei werden zum einen Profile der Gen- und Proteinexpression undifferenzierter MSC erstellt, um idealerweise
einen Marker identifizieren zu können, der die prospektive Isolation von MSC erlaubt.
Für den klinischen Einsatz ist insbesondere das Differenzierungspotential von MSC von Interesse. Daher überprüfen
wir quantitativ und qualitativ die Expression von Differenzierungsmarkern. In einem weiteren Schritten untersuchen wie
die Kinetik der Differenzierung, um eine bessere Einsicht in die Kaskaden der Differenzierungsprozesse zu erhalten.
Dies bietet die Möglichkeit einer Optimierung im Rahmen des Tissue-Engineerings, z.B. durch Modifikationen der
biomimetischen Scaffolds.
Die Sicherheit der Therapie mit MSC ist ein weiterer wichtiger Punkt unserer Analysen. Daher wurden in den
vergangenen Jahren sensitive Testsysteme entwickelt, um z.B. eine Kontamination mit Mykoplasmen im Verlauf der
Expansionskultur zu überprüfen. Darüber hinaus analysieren wir derzeit, ob die Langzeitkultur negative Effekte auf die
Qualität der MSC hat. Daher überprüfen wir das Seneszenzverhalten, die Verkürzung der Telomerlängen und die
mögliche Expression von Telomerase als Anzeichen einer möglichen Transformation der Zellen in Kultur.
Eine Vielzahl von offenen Fragen müssen noch beantwortet werden, bevor sich eine klinische Anwendung mit
mesenchymalen Stammzellen etabliert: z.B. : Aus welchen Quellen lassen sich MSC isolieren und unterscheiden sie
sich? Welchen Einfluss haben Grunderkrankungen, z.B. Diabetes, auf die MSC-Qualität? Wie lässt sich ein MSC-
Produkt standardisiert herstellen und welche Produktspezifikation gilt es zu erreichen? Wie verhalten sich MSC in
dreidimensionalen Matrizes, die z.B. für die Rekonstruktion von Knochen vonnöten sind? Wie lässt sich das Anwachsen
eines MSC-Präparates nachweisen?
Wichtigste Ergebnisse
In den vergangenen Jahren konnten wir feststellen, dass sich MSC aus Knochenmark, Fettgewebe und
Nabelschnurblut funktionell relativ wenig unterscheiden. Sie zeichnen sich durch starke Expansions- und
Differenzierungsfähigkeit aus. Unterschiedlich sind allerdings die Frequenzen der MSC in den einzelnen
Quellen. Basierend auf unsren Erfahrungen enthält Lipoaspirat MSC in höchster Zahl, gefolgt von
Knochenmark und dann von Nabelschnurblut. Bei der Analyse des Transcriptoms ergaben vorläufige
Untersuchungen jedoch frappierende Unterschied in der Genexpression. Ob sich diese auch im Proteom
feststellen lassen, werden weiterführende Untersuchen zeigen. Beim Differenzierungspotential fiel lediglich
auf, dass unter identischen Kulturbedingen vermehrte MSC aus Nabelschnurblut keine Anzeichen einer
adipogenen Differenzierung zeigen. Erste molekulare Analysen deuten daraufhin, dass erst ein später
Schritt in der Differenzierungskaskade blockiert scheint.
Insbesondere die Arbeiten zur chondrogenen Differenzierung, konnten durch Unterstützung der
Kooperationspartner Einblicke in die Regulation der chondrogenen Differenzierungskaskade generieren
(Gößler et al. und Prante et al.).
In einem weiteren Kooperationsprojekt mit der Augenklinik des Universitätsklinikums Mannheim entwickeln
wir Protokolle, die eine gerichtete Differenzierung humaner MSC aus dem Lipoaspirat in retinales
81

Stammzellen und Zelltherapie
Pigmentepithel erlauben. Diese Zellen sind als Folge der altersbedingten Makuladegeneration nicht mehr
funktionsfähig, so dass Patienten unter Erblindung leiden.
Einige wenige Publikationen deuten an, dass MSC in Kultur transformieren können. Unsere vorläufigen
Ergebnisse implizieren jedoch, dass MSC in Langzeitkultur replikativer Seneszenz unterliegen. Dies wird
gestützt durch eine Verkürzung der Telomerlängen als Folge der Kultur und durch das Fehlen der
Telomerase-Aktivität.
Mesenchymale Stammzellen verfügen über ein weites Differenzierungspotential. Daher sind es attraktive Kandidaten für
zell-basierte Ansätze insbesondere des Tissue Engineerings.
Summary
The main focus of our research activities is dedicated to investigate the origin and biological properties of post-natal
mesenchymal stem cells (MSC) that form supportive connective tissues such as fat, bone, and cartilage but also the
hematopoiesis-supporting stroma. We have previously identified different MSC populations from a variety of adult
tissues including bone marrow, umbilical cord blood, and adipose tissue. These MSC can be expanded in culture as
potential therapeutic agents for the repair of either connective tissue defects or as hematopoiesis supportive stroma. In
the first instance we were interested in revealing whether MSC derived from different tissue organs exhibit similar MSC
characteristics. Gene and protein expression profiles revealed that despite comparable functional characteristics, MSC
derived from the three tissues differ strongly.
The safety of clinical MSC application is evaluated since a few publications indicated that longterm culture of MSC can
pose a risk of transformation. Our own preliminary data however imply, that MSC suffer from replicative senescence,
induced by telomere shortening.
Standort Mannheim
Arbeitsgruppe Zell- und Immuntherapie
Projektleiter Dr. Karen Bieback
Mitarbeiter Dr. sc. hum. Susanne Kern, Dr. rer. nat. Sandra Kühl, Andrea Hecker, Marianna
Karagianni, Kathrin Ferlik, Dirk Hofmeister, Birthe Lauer, Monika Latta
Kooperationen Universitäts-HNO-Klinik Mannheim (Dr. U. Gößler)
Augenklinik des Univeritätsklinikums Mannheim (Dr. S. Kühl, Dr. U.
Vossmerbäumer); Institut fur Laboratoriums und Transfusionsmedizin, Herz und
Diabeteszentrum NRW, Universitatsklinik der Ruhr-Universitat Bochum, Bad
Oeynhausen (Dr. C. Götting); Neurologische Klinik des Universitätsklinikums
Mannheim (Dr. M. Stroick)
Förderung Teilprojekte werden anteilig finanziert durch BMBF und EU
Laufzeit des Projektes 01.09.2005 – 31.08.2009
Weitere Informationen
• Kern S, Eichler H, Stoeve J, Klüter H, Bieback K: Comparative analysis of mesenchymal stem cells from bone marrow, umbilical cord blood, or adipose
tissue. Stem Cells 24:S.1294-1301 (2006).
• Prante C, Bieback K, Funke C, Schon S, Kern S, Kuhn J, Gastens M, Kleesiek K, Gotting C: The formation of extracellular matrix during chondrogenic
differentiation of mesenchymal stem cells correlates with increased levels of xylosyltransferase I. Stem Cells 24: S. 2252-61 (2006)
• Gössler UR, Bugert P, Bieback K, Sadick H, Baisch A, Hörmann K, Riedel F: In vitro analysis of differential expression of collagens, integrins, and growth
factors in cultured human chondrocytes. Otolaryngol Head Neck Surg. 134: 510-515 (2006).
• Gössler UR, Bieback K, Bugert P, Heller T, Sadick H, Hörmann K, Riedel F:In vitro analysis of integrin expression during chondrogenic differentiation of
mesenchymal stem cells and chondrocytes upon dedifferentiation in cell culture. Int J Mol Med. 17:301-307 (2006).
• Gössler UR, Bugert P, Bieback K, Bag S, Sadick H, Klüter H, Hörmann K, Riedel F: A comparison of the gene expression patterns of human
chondrocytes and chondrogen differentiated mesenchymal stem cells for tissue engineering. HNO. 54:258-266 (2006).
82

Stammzellen und Zelltherapie
OsteoCord
Bone from Blood: Optimised isolation, characterisation and
osteogenic induction of mesenchymal stem cells from
umbilical cord blood
Hintergrund und Projektbeschreibung
Für die Heilung ausgedehnter Knochendefekte stellt das Tissue Engineering einen
erfolgversprechenden Ansatz dar. Die für das Tissue Engineering von Knochen einzusetzenden
Zellen sollten neben ihrer Immunkompatibilität einfach und in ausreichenden Mengen isolierbar
sowie in der Lage sein, den osteogenen Phänotyp auszubilden. Aufgrund ihres
Differenzierungspotenzials sowie der im Gegensatz zu bereits differenzierten Zellen
(Osteoblasten) hohen Proliferationskapazität in vitro stellen mesenchymale Stammzellen (MSC)
eine viel versprechende Zellpopulation für diesen Ansatz dar. Ziel des von der europäischen
Union geförderten Verbundprojektes, ist es mesenchymale Stammzellen (MSC) aus dem
humanen Nabelschnurblut zu isolieren, expandieren und insbesondere ihr osteogenes
Differenzierungspotential zu optimieren, um ihre Eignung für den therapeutischen
Knochenersatz zu optimieren. Durch die Verbundpartner werden genomische, proteomische
und Bioimpedanz Profile, vor und nach osteogener Differenzierung erstellt, im Vergleich zu
Knochenmark-MSC aber auch embryonalen Stammzellen. Zudem werden Veränderungen des
Immunophänotyps aber auch der Alloreaktivität bestimmt. Als Riskoabschätzung erfolgt zudem
eine Bestimmung der Telomerlängen und der Telomeraseaktivität. Neuartige
Expansionstechniken, sowie biomimetrische Scaffolds werden mit scale-up Prozeduren
kombiniert.
Wichtigste Ergebnisse
Unsere Arbeitsgruppe verfolgt in diesem Konsortium folgende Projekte:
1. Die Etablierung einer Nabelschnurblut-MSC Bank, um Zellen in ausreichender und
definierter Qualität und Quantität den Verbundpartner zur Verfügung zu stellen.
2. Mesenchymale Stammzellen werden als hypoimmunogen und immunsuppressiv
beschrieben. Dies impliziert, dass MSC möglicherweise ohne Immunsuppression allogen
transplantiert werden können. Nabelschnurblut-MSC wurden jedoch noch nie im Vergleich
zu Knochenmark-MSC auf ihre immunmodulierenden Eigenschaften untersucht.
Notwendige Methoden, um diesen Vergleich zu tätigen, wurden etabliert.
3. Der translationelle Ansatz des Projektes beinhaltet auch scale-up Prozeduren und die
Etablierung GMP-konformer Herstellungsprozesse. In einem ersten Schritt wurden SOPs
für die Isolation und Expansion von MSC erstellt. In einem zweiten Schritt erfolgt die
Evaluierung FCS-freier Expansionsmedien supplementiert durch humane alternative
Komponenten (siehe hierzu Projekt START-MSC).
Summary
There is an urgent clinical requirement for appropriate bone substitutes that are able to replace
current autologous and allogeneic grafting procedures for the repair of diseased or damaged
skeletal tissues. Mesenchymal stem cells (MSCs), found predominantly in the bone marrow, are
able to differentiate into osteogenic, chondrogenic, adipogenic and tenogenic lineages, thus
offering considerable therapeutic potential for tissue engineering applications. However,
invasive extraction procedures and insufficient viable cell yields have necessitated the
identification of alternative tissue sources of MSCs. Growing evidence suggests that umbilical
cord blood (UCB) contains a population of rare MSCs that are able to undergo multilineage
differentiation.
The aim of this proposal is optimise the isolation and expansion of MSCs from human UCB (CB-
MSCs). The differentiation capacity of CB-MSCs will be examined, with a specific focus on
osteogenesis. The CB-MSCs will be characterised by genomic, proteomic and bioimpedance
profiling, pre- and post-osteogenic differentiation, and compared to MSCs isolated from human
bone marrow as well as embryonic stem cells. Full bioinformatics integration of datasets will
allow us to identify specific and/or novel signalling factors associated with CB-MSCs. The
immunophenotype and alloreactivity of CB-MSCs will be determined. Comparative analyses of
the population doubling times, telomere length and telomerase activity will identify the lifespan
of CB-MSCs in culture. Novel expansion techniques will be combined with scale-up procedures
and the generation of CB-MSC lines for banking using optimised cryopreservation protocols. In
83

Stammzellen und Zelltherapie
vitro and in vivo biocompatibility assays using a range of biomimetic scaffolds will be exploited,
complementing in vivo homing and engraftment models.
Our integrated approach using existing and complementary expertise will provide a timely and
thorough evaluation of CB-MSCs and define appropriate routes for their therapeutic
implementation.
Standort Mannheim
Arbeitsgruppe Zell- und Immuntherapie
Projektleiter Dr. Karen Bieback
Mitarbeiter Andrea Hecker, Susanne Kern, Asli Kocaömer, Anh-Thu Ha,
Monika Latta
Kooperationen OsteoCord-Verbund: Dr. PG. Genever, Departments of Biology,
Philosophy and Sociology, University of York, UK; Prof. Kassem,
Department of Endocrinology, University Hospital of Odense,
Denmark; JS. Andersen, Center for Experimental Bioinformatics
(CEBI), Department of Biochemistry and Molecular Biology,
University of Southern Denmark, Odense, Denmark: Dr. H.
Thielecke Fraunhofer Institute for Biomedical Engineering,
Germany; Dr. L. Buttery, School of Pharmacy, University of
Nottingham, UK; Dr. H Cruz, ECBio- R&D in Biotechnology,S.A.,
Oeiras, Portugal; Dr. R. Quirk, RegenTec Ltd, BioCity Nottingham,
Pennyfoot Street, Nottingham, UK
V. Mailaender, H. Schrezenmeier: Institut für Klinische
Transfusionsmedizin und Immungenetik Ulm
K.Schallmoser, D. Strunk: Medizinische Universität Graz, Abt.
Blutgruppen Serologie und Transfusionsmedizin, Graz, Österreich
Förderung RP der Europäischen Union
Laufzeit des Projektes 1.1.2006 - 31.12.2008
Weitere Informationen
• Kocaoemer A, Kern S, Klueter H, Bieback K: Human AB-Serum as well as Thrombinactivated
Platelet-Rich-Plasma are suitable Alternatives to Fetal Calf Serum for the
Expansion of Mesenchymal Stem Cells from Adipose Tissue. Stem Cells. 2007 Jan 25;
[Epub ahead of print]
• http://www.bonefromblood.org
84

Stammzellen und Zelltherapie
Standardisierung für die Regenerative Medizin (START-MSC)
Stammzellbank mesenchymaler Stammzellen aus
Nabelschnurblut und Entwicklung GMP-konformer
Prozessierungstechniken
Hintergrund und Projektbeschreibung
Das Fehlen von international gültigen Standards und Protokollen, die der „Guten
Herstellungspraxis“ (Good Manufacturing Practice, GMP) entsprechen, erscheint als die größte
Hürde bei der Umsetzung experimenteller Ergebnisse in klinische Applikationen. Daher ist es
das Ziel des Konsortiums START-MSC, Standards und Richtlinien zu definieren, die erstens
eine standardisierte Gewinnung von MSC und daraus abgeleiteter Hepatozyten und
Kardiomyozyten ermöglichen und zweitens eine systematische Charakterisierung dieser Zellen
im Vergleich zu MSC aus Knochenmark und reifen Hepatozyten und Kardiomyozyten erlauben.
Um diese Ziele zu erreichen, wird eine Stammzellbank aus Nabelschnurblut (cord blood, CB)
abgeleiteten MSC aufgebaut. Die Grundlage hierfür ist eine standardisierte Isolation, Expansion
und Qualitätskontrolle dieser Zellen. Anschließend werden sie durch die Verbundpartner im
Vergleich mit MSC aus Knochenmark und Fettgewebe systematisch charakterisiert. Die
klinische Relevanz und die Perspektive einer klinischen Anwendbarkeit erfordert die
Entwicklung standardisierter und validierter Protokolle. Da es derzeit weltweit jedoch kein
etabliertes, validiertes System für die Isolation und Expansion von MSC gibt, das frei ist von
bovinem Serum, werden wir ein Protokoll entwickeln, das als Alternative humanes Serum,
Thrombozytenfaktoren bzw. rekombinante Proteine und gleichzeitig eine Kultivierung im
geschlossenen System erlaubt. Dies sehen wir als eine obligatorische Grundlage für eine
zukünftige klinische Anwendung gemäß der internationalen GMP-Standards.
Wichtigste Ergebnisse
Für die Stammzellbank wurden MSC unter standardisierten Bedingungen aus humanem
Nabelschnurblut isoliert, expandiert und grundlegend charakterisiert. Im Rahmen der
Qualitätskontrolle erfolgte eine durchflusszytometrische Charakterisierung der
Markerexpression, um eine Kontamination mit hämatopoetischen oder endothelialen Zellen
auszuschließen. Das Differenzierungspotential wurde anhand von in vitro
Differenzierungstesten in die osteogene, adipogene und chondrogene Richtung quantifiziert.
Von allen MSC-Chargen erfolgte eine Überprüfung auf Sterilität und Kontrolle auf
Mykoplasmenkontamination. Im Anschluss an die Qualitätsüberprüfung wurden diese Zellen
kryokonserviert und entsprechende Aliquots werden den Partnern über den gesamten Verlauf
der Projektphase zur Verfügung gestellt.
Bovines Serum, das derzeit noch als essentielle Komponente von MSC Isolations- und
Expansionsmedien gilt, wurde durch humane alternative Supplemente ersetzt, um
internationalen GMP-Standards konforme Verfahren zur Isolation und Expansion zu entwickeln.
Ergebnisse an MSC aus Lipoaspirat zeigten, dass sowohl humanes AB-Serum als auch
thrombin-aktiviertes plättchenreiches Plasma in der Lage sind, die Isolation und Expansion von
MSC zu gewährleisten. Die Expansion von Lipoaspirat-MSC wurde durch die alternativen
humanen Zusätze gegenüber bovinem Serum als Vergleich sogar signifikant erhöht, ohne die
Differenzierbarkeit zu beeinträchtigen (Kocaömer et al. STEM CELLS 2007). Im Gegensatz
dazu zeigte sich bei MSC aus dem Knochenmark keine gesteigerte Proliferation. Im Vergleich
zu bovinem Serum erwiesen sich humanes AB-Serum und thrombin-aktiviertes plättchenreiches
Plasma als gleichwertig. Plättchenlysat jedoch hatte einen eindeutig wachstumsstimulierenden
Effekt, ohne das Differenzierungspotential zu beeinträchtigen.
Summary
There is a lack of international valid standards and protocols hampering the translation of
research protocols into a GMP-compliant manufacturing process of MSC. To achieve this, we
established a cell bank of cord blood, adipose tissue and bone marrow derived MSC. These
cells processed and defined according to standardised protocols are used by the collaborating
partners for further analysis.
With regard to clinical exploitation, there is a demand for GMP-compliant protocols for MSC
manufacturing. At the moment, however, most isolation and expansion protocols for clinical-
85

Stammzellen und Zelltherapie
scale production of MSC use culture media supplemented with Fetal Calf Serum. The first step
therefore is to avoid the use of Fetal Calf Serum in the isolation and expansion medium of MSC.
Our aim was to compare the effectiveness of human serum and platelet factors in promoting
MSC growth with FCS. We decided to use pooled human AB-Serum (AB-HS) instead of
autologous serum because for clinical use an “off-the-shelf” product which is available in large
quantities is more desirable. After testing several protocols for the derivation of a platelet-factor
rich supernatant, we chose thrombin-activated Platelet-Rich-Plasma (tPRP) pooled from AB
donors as the most suitable supplement. With both cell populations, adipose tissue-derived
MSC and bone marrow-derived MSC, we observed that the human alternatives served as
suitable alternatives in isolating and expanding MSC, maintaining their phenotype, immune
phenotype and differentiation potential.
Standort Mannheim
Arbeitsgruppe Zell- und Immuntherapie
Projektleiter Prof. Dr. Harald Klüter, Dr. Karen Bieback
Mitarbeiter Asli Kocaömer, Andrea Hecker, Anh-Thu Ha, Marianna Karragianni
Kooperationen START-MSC-Verbund: AG Prof. Ho, Medizinische Klinik V der
Universität Heidelberg, Abteilung Hämatologie, Onkologie und
Rheumatologie; AG Dr. Besser, Max-Delbrück- Zentrum für
Molekulare Medizin Berlin; AG Prof. Franke Deutsches
Krebsforschungszentrum Heidelberg; AG Prof. Müller; Institut für
medizinische Strahlenkunde und Zellforschung , Universität
Würzburg; AG PD Dr. Stamm; Klinik und Poliklinik für
Herzchirurgie, Universität Rostock; AG Prof. Ott, Abteilung
Gastroenterologie, Hepatologie und Endokrinologie der
Medizinischen Hochschule Hannover; Prof Dresel, PROGEN
Biotechnik GmbH
V. Mailaender, H. Schrezenmeier: Institut für Klinische
Transfusionsmedizin und Immungenetik Ulm
K. Schallmoser, D. Strunk: Medizinische Universität Graz, Abt.
Blutgruppen Serologie und Transfusionsmedizin, Graz, Österreich
Förderung BMBF
Laufzeit des Projektes 1.9.2005 - 30.8.2008
Weitere Informationen
• Kocaoemer A, Kern S, Klueter H, Bieback K. Human AB-Serum as well as Thrombinactivated
Platelet-Rich-Plasma are suitable Alternatives to Fetal Calf Serum for the
Expansion of Mesenchymal Stem Cells from Adipose Tissue. Stem Cells. 2007 Jan 25;
[Epub ahead of print]
• http://start-msc.de
86

Stammzellen und Zelltherapie
Deutsches Register für Stammzelltransplantationen
Hintergrund und Projektbeschreibung
Das Deutsche Register für Stammzelltransplantationen erfasst im Auftrag der Deutschen
Arbeitsgemeinschaft für Blut- und Knochenmarktransplantationen (DAG-KBT) alle in
Deutschland durchgeführten allogenen und autologen Stammzelltransplantationen. Das
Register wird in Zusammenarbeit von ZKRD und Institut für Transfusionsmedizin in Ulm in
Kooperation mit DRST-Einrichtungen in Essen und Frankfurt (Pädiatrisches Register) geführt.
Neben dem Aufbau eines vollständigen Datenbestandes zur Qualitätssicherung und als Basis
von Studienplanungen im Stammzelltransplantationsbereich verfolgt das DRST spezifische
Fragestellungen zur Optimierung der allogenen Stammzelltransplantation.
87
Fallzahlen
1400
1200
1000
800
600
400
200
0
1998 1999 2000 2001 2002 2003 2004 2005
Jahr
verw.
unverw.
Entwicklung der Fallzahlen von allogenen Stammzelltransplantationen mit verwandten und unverwandten Spendern in
Deutschland im Zeitraum von 1998 bis 2005.
Wichtigste Ergebnisse
2006 stand die Auswertung der Entwicklung in der hämatopoetischen Stammzelltransplantation
in Deutschland seit 1998 im Vordergrund. Die Zahl allogener Stammzelltransplantationen nahm
stetig zu. 2005 wurden bereits 62 % der Ersttransplantationen mit Stammzellen von
unverwandten Spendern durchgeführt. In 85 % der Fälle wurden Blutstammzellen eingesetzt, in
15 % Knochenmark. Nabelschnurblut kam nur ganz selten (im Jahr 2005: n = 10) als allogene
Stammzellquelle zur Anwendung.
Das DRST hat sich als Instrument zur flächendeckenden Evaluation der nationalen Aktivitäten
in der Stammzelltransplantation etabliert. Es dient als Basis für Qualitätssicherung und ist
Grundlage wissenschaftlicher Auswertung zur weiteren Optimierung der Stammzelltransplantation.

Stammzellen und Zelltherapie
Summary
Since 1998 the number of allogeneic stem cell transplantations in Germany has increased
steadily. In 2005 62 % of allogeneic transplantations were performed with stem cells from
unrelated donors. 85 % of allogeneic stem cell transplants were performed with peripheral
blood stem cells , 15 % with bone marrow. Cord blood was only rarely used (2005 n = 10). The
DRST has successfully established itself as the national registry for haematopoietic stem cell
transplantation in Germany. It provides the basis for quality assurance methods and can serve
as a platform for scientific studies with the aim of further improvement of stem cell
transplantation.
Standort Ulm
Arbeitsgruppe Deutsches Register für Stammzelltransplantation (DRST)
Projektleiter Dr. Dr. C. Müller; Prof. Dr. H. Schrezenmeier
Mitarbeiter Dr. Dr. C. Müller (ZKRD), Frau S. Allgaier, Frau A. Müller
Kooperationen Prof. W. Beelen, PD Dr. H. Ottinger, Universitätsklinik Essen
Prof. Dr. T. Klingebiel, Unversitätsklinik Frankfurt
Förderung Deutsche José Carreras Leukämie-Stiftung e.V.
Laufzeit des Projektes aktuelles Projekt: 01.01.2006 – 31.12.2007
Weitere Informationen
• Ottinger H., Müller C., Beelen D.W., Ehninger G., Schmitz N., Zander A., Schrezenmeier H.:
Entwicklungen in der hämatopoetischen Stammzelltransplantation. Daten des Deutschen
Registers für Stammzelltransplantationen. Deutsches Ärzteblatt 103(37): A2381-AA2386
(2006)
• Weitere Informationen finden sich auf der DRST-Internetseite: www.drst.de
88

Stammzellen und Zelltherapie
Adoptive Immuntherapie maligner Erkrankungen mittels der
immortalisierten natürlichen Killerzelllinie NK-92
Hintergrund und Projektbeschreibung
Natürliche Killer (NK-) Zellen können einen substantiellen Beitrag zum GvL-(Graft-versus-
Leukemia)-Effekt leisten, ohne das Risiko einer GvH-(Graft-versus-Host)-Reaktion mit sich zu
bringen. NK-Zellen stellen die erste Welle des Immunsystems gegen virusinfizierte und maligne
entartete Zellen dar. NK-Zellen sind in ihrer Immunantwort nicht MHC-restringiert, ihre Aktivität
wird aber über eine Vielzahl inhibitorischer und aktivierender Rezeptoren reguliert, die
verhindern, dass sie gesunde körpereigene Zellen attackieren. Vor diesem Hintergrund gibt es
eine Reihe von Therapieansätzen, die versuchen allogene oder autologe NK-Zellen im Rahmen
einer Tumortherapie einzusetzen, wobei die verwendeten NK-Zellpopulationen
Mischpopulationen darstellen und die Wirkung der Therapie daher schwer vorherzusagen ist.
Die Arbeitsgruppe versucht daher die klonale Zelllinie NK-92 für eine Krebstherapie zu
etablieren. Vorteile der immortalisierten NK-Zelllinie NK-92 begünden sich in dem Fehlen
inhibitorischer Rezeptoren bei erhaltener zytotoxischer Aktivität, was eine breit gefächerte und
hohe Aktivität gegen verschiedene hämatologische und solide Tumore bewirkt. Neben der
Durchführung klinischer Studien bei Patienten mit unheilbar fortgeschrittenen
Tumorerkrankungen – eine Phase I Studie konnte kürzlich erfolgreich abegeschlossen werden
– steht die Untersuchung der Resistenzmechanismen von Tumorzellen gegenüber NK Zellen im
Vordergrund der wissenschaftlichen Arbeiten. Besonders akute lymphatische Leukämien sind
gegenüber einer Lyse durch NK-Zellen resistent. Durch systematische Untersuchung der
Interaktion von akuten lymphatischen Leukämie-Zellen und NK-Zellen konnten wichtige
Erkenntnisse erlangt werden, die zu neuen Therapieoptionen bei vorher nicht behandelbaren
Tumoren führen. In Kooperation mit Prof. Winfried Wels (Georg-Speyer Haus) und PD Dr.
Oliver Ottmann (Universitätsklinikum Frankfurt/Main) untersuchen wir ob ein genetisches
„Retargeting“ von NK-Zellen bestehende Resistenzen überkommen kann. Bei diesem
Therapieansatz werden NK-Zellen genetisch so programmiert, dass sie einen
antigenspezifischen Rezeptor auf der Oberfläche exprimieren. Die hierdurch herbeigeführte
Spezifität der NK-Zellen für bestimmte Tumorantigene führte in unseren Experimenten zu einer
hochsignifikanten Aktivität der NK-92 Zellen gegen ansonsten resistente Tumore.
Wichtigste Ergebnisse
Es zeigte sich, das die Transfusion von hohen Dosierungen bestrahlter NK-92 Zellen zu keinen
Nebenwirkungen führte und sehr gut vertragen wird. Bei Patienten, die an Lungenkrebs
erkrankt sind, zeigte sich unter der Therapie mit NK-92 ein teilweises Ansprechen auf die
Immuntherapie. Die Resistenz akuter lymphatischer Leukämien gegenüber NK-Zellen ist auf
eine fehlende Aktivierung und nicht – wie bisher angenommen – auf eine aktive Inhibition der
NK-Zellen zurückzuführen. Die Expression von chimären Antigenrezeptoren in NK-Zellen mit
einer Spezifität für bekannte Tumorantigene, kann diese mangelnde Aktivierung überwinden
und führt zu hocheffektiven, tumorspezifischen Zelltherapeutika.
89

Stammzellen und Zelltherapie
Dargestellt ist der Angriff einer genetisch manipulierten NK-92 Zelle (links) auf eine Krebszelle (rechts). Das
tumorspezifische Antikörperfragment (3, ScFv) erkennt und bindet das Tumorantigen (4, z.B. ErbB2) und führt dann
über die mit dem Antikörperfragment verbundene Signaltransduktionskette (5) zu einer Auslösung der lytischen Aktivität
der NK-92 Zelle. An deren Ende steht die Verdauung der Krebszelle durch die von den NK-Zellen freigesetzten Enzyme
Perforin und Granzyme (6)
Standort Frankfurt
Arbeitsgruppe Somatische Zelltherapie
Projektleiter PD Dr. med. Torsten Tonn
Mitarbeiter Dipl. Ing. biotech. Nicola Krzossok, Nadine Sorg (TA)
Kooperationen Prof. Dr. Klingemann, Tufts New England Medical Center, Boston
(USA)
PD Dr. Oliver Ottmann, Med. Klinik III, Universität Frankfurt/Main
Prof. Dr. Klingebiel, PD Dr. Schwabe, Dr. U. Koehl, Päd. Hämato-
Onkologie, Universität Frankfurt/Main
Prof. Dr. Wels, Chemotherapeutisches Forschungsinstitut Georg-
Speyer Haus
Förderung Deutsche José Carreras Stiftung e.V.
Deutsche Krebshilfe e.V.
Weitere Informationen
• Romanski A, Bug G, Becker S, Kampfmann M,Seifried E, Hoelzer D, Oliver G. Ottmann,
Tonn T. Multiple mechanisms of resistance to NK cell-mediated cytotoxicity are not
operable in Acute Lymphoblastic Leukemia. Exp Hematology 2005: 3(3):344-52
90

Stammzellen und Zelltherapie
Adoptive Immuntherapie der chronischen CMV-Infektion nach
allogener Knochenmark- oder peripherer
Blutstammzelltransplantation: eine Phase I/II-Studie
Hintergrund und Projektbeschreibung
Die CMV-assoziierte Erkrankung stellt eine der häufigsten und bedrohlichsten Komplikationen
nach allogener Stammzelltransplantation dar. CMV-seropositive Transplantatempfänger
und/oder Patienten, die ein Transplantat von einem seropositiven Spender erhalten, entwickeln
in 60% eine CMV Infektion nach allogener Stammzelltransplantation und wiederum 40-50%
dieser Patienten eine CMV-Erkrankung. Die Letalität der manifesten CMV-Erkrankung,
insbesondere der interstitiellen Pneumonie, beträgt trotz einer kombinierten Therapie mit
Ganciclovir und CMV-Hyperimmunglobulin 50-70% (10-15). Aufgrund dieser hohen Mortalität
wurden Interventionsstrategien zur Vermeidung der symptomatischen CMV-Infektion entwickelt.
Im Rahmen dieser Phase I/II Studie soll die Toxizität aber auch die Effektivität einer adoptiven
Immuntherapie mit Streptamer-selektionierten, CMV-spezifischen CD8+ T-Zellen evaluiert
werden. Patienten nach allogener Knochenmark- oder peripherer Blutstammzell-
Transplantation, die nach CMV-Antigen Nachweis auf eine 14-tägige antivirale Therapie mit
Ganciclovir nicht ansprechen und einen CMV-positiven Spender haben, sollen mit CMV-CD8+
T-Zellen behandelt. Die Gewinnung der CMV-spezifischen CD8+ T-Zellen wird bei erstem
Auftreten einer Virämie eingeleitet. Nach dem Immuntransfer sollen die Studienteilnehmer im
Rahmen der KMT-Nachsorge auf ihre CMV-spezifische Immunrekonstitution hin untersucht
werden, um Risikofaktoren für die späte CMV-Erkrankung und das Ansprechen auf die
Immuntherapie zu dokumentieren. Die Studie wird von der Studiengruppe „klinische
Zelltherapie“ der DGHO inhaltlich unterstützt und so haben sich bereits mehr als 8 große
Transplantationszentren in Deutschland der Studie angeschlossen. Die AG somatische
Zelltherapie des Instituts Frankfurt hat die Isolation der CMV –spezifischen Zellen im klinischen
Maßstab etabliert und übernimmt diese Aufgabe zentral für alle an der Studie beteiligten
Zentren.
Anreicherung von CMV-spezifischen T-Lymphozyten mittels Immunmagnetverfahren (Clinimacs) und Streptamer-
Technologie in der Reinraumanlage des Instituts Frankfurt.
Wichtigste Ergebnisse
Es konnte gezeigt werden, dass sich mit Hilfe der Streptamer-Technologie® CMV-spezifische
T-Lymphozyten im klinischen Maßstab vom jeweiligen Stammzellspender hochrein isolieren
lassen. Bisher wurden zwei Jugendliche behandelt, die nach einer haploidenten Transplantation
an einer vital bedrohlichen CMV-Infektion litten. Die Verabreichung kleinster Dosierungen CMVspezifischer
Spenderlymphozyten führte in beiden Patienten zu einer Rekonstitution der
zellulären Immunantwort gegen CMV und zu einem drastischen Abfall des CMV – Virustiters
unterhalb der Nachweisgrenze.
91

A
104 10
4 104 10
8.37e-3
4
8.37e-3
103
10
3
103
10
3
10 10
2
10 10
2
101
10
1
101
10
1
B
A2 A2
A2
B7
B7
B7
8.37e-3 0.03 0.03 0.03 %
%
%
CD8
10 10
0
10 10
1
10 10
2 2
10 10
3
10 10
CD8 APC
0 58.6
10 10
0
10 10
1
10 10
2 2
10 10
3
10 10
CD8 APC
0 58.6
104 10
4 104 10 0.54
4 104 10
4
0.54
103
10
3
103
10
3
103
10
3
102
10
2
102
10
2
102
10
2
101 10
1 101 10
1 101 10
1
10 10
4
41.4
10 10
4
41.4
104 10
4 104 10
5.57e-3
4 104 10
4
5.57e-3
103
10
3
103
10
3
103
10
3
102
10
2
102
10
2
102
10
2
101
10
1
101
10
1
101
10
1
Stammzellen und Zelltherapie
5.57e-3 0.05 0.05 0.05 %
%
%
10 10
0
10 10
1
10 10
2 2
10 10
3
100
10
CD8 APC
0 60.3
10 10
0
10 10
1
10 10
2 2
10 10
3
10 10
0
10 10
1
10 10
2 2
10 10
3
100
10
CD8 APC
0
100
10
0 60.3
A2 A2
A2
B7
B7
B7
75%
75%
75%
100
10
0
101
10
1
102
10
2
103
10
3
104
10
4
100
10
CD8 APC
0 14.6
9.87
100
10
0
101
10
1
102
10
2
103
10
3
104
10
4
100
10
0
101
10
1
102
10
2
103
10
3
104
10
4
100
10
CD8 APC
0
100
10
0 14.6
9.87
104 10
4 104 10 1.18
4 104 10
4
1.18
103
10
3
103
10
3
103
10
3
102
10
2
102
10
2
102
10
2
101 10
1 101 10
1 101 10
1
104
10
4
39.6
104
10
4
104
10
4
39.6
82 82 82 %
%
%
100
10
0
101
10
1
102
10
2
103
10
3
104
10
4
100
10
CD8 APC
0 6.66
9.67
100
10
0
101
10
1
102
10
2
103
10
3
104
10
4
100
10
0
101
10
1
102
10
2
103
10
3
104
10
4
100
10
CD8 APC
0
100
10
0 6.66
9.67
Dargestellt ist die durchflußzytometrische Analyse CMV-spezifischer (pp65) T-Lymphozyten eines HLA – A 2 positiven
und eines HLA-B7 positiven Spenders vor Selektion (A) und nach immunomagnetischer Anreicherung (B). Es zeigt sich,
dass die Reinheit der virusspezifischen T-Zellen bei dem HLA-A2 positiven Spender in Bezug auf die T-Lymphozyten
von 0,03 % auf über 75% Reinheit angehoben werden konnte. Bei dem HLA-B7 positiven Spender, der vor Selektion
eine etwas höhere Frequenz virusspezifischer T-Lymphozyten im Blut hatte (0,5%) liess sich die Reinheit sogar auf
82% steigern. Diese hohe Reinheiten virusspezifischer T-Lymphozyten ermöglichen die Transfusion hochreiner T-
Zellpräparate, spezifisch nur gegen das jeweilige Virusepitop. Die Übertragung von sogenannten alloreaktiven T-
Lymphozyten, die eine Spender-gegen-Wirt (GvH)-Erkrankung auslösen können, wird durch die hohe Reinheit
weitgehend vermieden.
Standort Frankfurt
Arbeitsgruppe Somatische Zelltherapie
Projektleiter PD Dr. med. Torsten Tonn
Mitarbeiter Dipl. Ing. biotech. Nicola Krzossok, Nadine Sorg (TA), Dipl. Ing.
Biotech. Katrin Führer (studentische Hilfskraft)
Kooperationen Prof. Dr. Hermann Einsele, Medizinische Klinik,
Universitätsklinikum Würzburg
Prof. Dr. Dirk Busch, Med. Mikrobiologie, Technische Universität
München
Dr. Lothar Germeroth, Stage Pharmaceuticals, Göttingen
Studiengruppe klinische Zelltherapie der deutschen Gesellschaft
für Hämatologie Onkologie (DGHO)
Förderung Intern
Laufzeit des Projekts Seit 2002
Weitere Informationen
• Romanski A, Bug G, Becker S, Kampfmann M,Seifried E, Hoelzer D, Oliver G. Ottmann,
Tonn T. Multiple mechanisms of resistance to NK cell-mediated cytotoxicity are not
operable in Acute Lymphoblastic Leukemia. Exp Hematology 2005: 3(3):344-52
92

Stammzellen und Zelltherapie
Stammzellen für die regenerative Medizin
Hintergrund und Projektbeschreibung
Verschiedene präklinische und klinische Studien weisen auf einen therapeutischen Nutzen der
Verabreichung von autologen Knochenmarkprogenitorzellen bei der Behandlung des akuten
Myokardinfarkts hin. Knochenmarkstammzellen wird hierbei ein positiver Effekt bei der
Revaskularisierung des geschädigten Myokards zugesprochen, was letztlich zu einer
Steigerung der Herzleistung führt. Gemeinsam mit der kardiologischen Klinik des
Universitätsklinikums Frankfurt am Main, hat das Institut Frankfurt die Koordination und Logistik
der Zellpräparationen im Rahmen der bisher weltweit größten randomisierten, multizentrischen
Studie zur Untersuchung eines therapeutischen Nutzens von Knochenmarkstammzellen bei
akutem Myokardinfarkt übernommen. Diese Studie, die insgesamt 202 Patienten in 18 Zentren
eingeschlossen hat, konnte im Jahr 2006 erfolgreich abgeschlossen werden. Die, weltweit
beachteten Ergebnisse dieser Studie deuten auf einen therapeutischen Nutzen der
Stammzelltherapie bei Herzinfarkt hin. Zwischenzeitig sind in Kooperation mit der Kardiologie
des Universitätsklinikums Frankfurt am Main, verschiedene weitere klinische Studien initiiert
worden, die einen therapeutischen Nutzen von Knochenmarkstammzellen bei arterieller
Verschlusskrankheit und diabetisch bedingten Durchblutungsstörungen untersuchen. Im
Rahmen dieser Projekte beschäftigt sich die Arbeitsgruppe insbesondere mit der Optimierung
der Verfahren zur Herstellung und Qualitätskontrolle von Knochenmarkvorläuferzellen für eine
Verwendung in regenerativen Therapieansätzen.
Wichtigste Ergebnisse
Die REPAIR-AMI Studie konnte erstmals in einem großen, randomisierten Patientenkollektiv
zeigen, dass die intrakoronare Stammzelltherapie sicher ist und zu einer signifikanten
Steigerung der Herzpumpleistung führt. Die 1-Jahres Daten der Studie zeigen darüber hinaus,
dass jene Patienten die eine Stammzelltherapie erhalten hatten, ein signifikant geringeres
Risiko für das Auftreten schwerwiegender Komplikationen des Herzinfarktes hatten (Tod,
Rehospitalisierung, Verschluss Infarktgefäßes). Unsere Ergebnisse zur Validierung der
Zellprozessierung und die vergleichende Untersuchung von Zellisolationsprotokollen klinischer
Studien mit negativem Ausgang, konnte zeigen, dass die Präparation des Knochenmarks einen
sensiblen und kritischen Faktor darstellt, der für den therapeutischen Nutzen der
Stammzelltherapie entscheidend ist.
93

Intracoronary
infusion
Mobilisation • VEGF
• SDF-1 SDF
• G-CSF CSF
• GM-CSF GM CSF
• EPO
• Statins
• Exercise
• PPAR
Stammzellen und Zelltherapie
Adhesion
Migration
Homing
Invasion
Möglichkeiten einer direkten Applikation von Stammzellen in das geschädigte Infarktgebiet durch intrakoronare
Applikation aufbereiteter Knochenmarkvorläuferzellen (links oben) oder durch systemische Moblisierung der
Knochenmarkvorläuferzellen durch Wachstums- und andere Faktoren (links unten). Derzeit nimmt man an, dass
insbesondere eine Gefäßneubildung im Infarktgebiet für eine Regeneration des Herzmuskels verantwortlich ist. Für eine
Gefäßneubildung (Neoangiogenese) sind für die durch Mobilisierung oder direkte Applikation in das Koronargefäß
eingebrachten Stammzellen die aufgeführten „Homing“ - Mechanismen entscheidend (rechte Bildhälfte). modifiziert
nach Dimmeler et al, JCI 2005 [12]
Standort Frankfurt
Arbeitsgruppe Somatische Zelltherapie
Projektleiter PD Dr. med. Torsten Tonn
Mitarbeiter Dipl. Ing. biotech. Nicola Krzossok, Nadine Sorg (TA)
Kooperationen Prof. Dr. S. Dimmeler / Prof. Dr. A. Zeiher, Kardiologie,
Universitätsklinikum Frankfurt am Main und 18 weitere
kardiologische Studienzentren im gesamten Bundesgebiet und der
Schweiz (REPAIR-AMI Zentren)
Förderung Exzellenzinitiative des Bundes und der Länder; „Cardiopulmonary
System“ der Universitäten Giessen und Frankfurt (09/2006)
Transantlantic Network of Excellence for Cardiac Regeneration
(Leduq Foundation)
Laufzeit des Projekts Nicht begrenzt
Weitere Informationen
• T. Tonn, N. Krzossok, W. Siegel, E. Seifried. Regulatorische Aspekte zur Gewinnung und
Herstellung von Stammzellen. In: Stammtzelltherapie in der Kardiologie- Stand und
Perspektiven: Hersg. S. Dimmeler und AM Zeiher. UNI-MED, 2005, ISBN 3-89599-800-1
94

Stammzellen und Zelltherapie
Genomische Stabilität von hämatopoetischen Stammzellen
nach Bestrahlung mit hochenergetischen schweren Ionen
Hintergrund und Projektbeschreibung
Schwerionenstrahlung besitzt ebenso wie dünnionisierende Strahlung kanzerogene und
mutagene Eigenschaften. Durch die Etablierung von Schwerionen-Krebstherapien konnte der
Schwerionenstrahlung jedoch auch eine heilende Wirkung zugeschrieben werden. Die
besondere biologische Wirksamkeit von Schwerionenstrahlung beruht auf ihren
charakteristischen physikalischen Eigenschaften. Insbesondere das invertierte Dosisprofil
erlaubt bei der Anwendung von schweren Ionen in der Krebstherapie eine hohe Dosisdeposition
in tief liegenden Tumoren, während die Dosisdeposition im gesunden Gewebe entsprechend
niedrig ist und dieses weitgehend geschont wird.
Die Abschätzung des Gesundheitsrisikos von ionisierender Strahlung basiert auf
experimentellen Studien sowie auf epidemiologischen Untersuchungen von exponierten
Personen, in denen chromosomale Veränderungen (Chromosomenaberrationen) nach
Bestrahlung untersucht werden. Als Untersuchungsobjekte dienen primäre Zellen, vor allem
Lymphozyten, die leicht aus dem Blut exponierter Personen gewonnen werden können. Bei
peripheren Lymphozyten wird ein von der Dosis und der Qualität der Strahlung abhängiger
Anteil von geschädigten Zellen durch Apoptose aus der Population entfernt und so die
genetische Stabilität gesichert. Andererseits wird das Auftreten klonaler Aberrationen in
Lymphozyten von Spendern berichtet, die viele Jahre nach Strahlenexposition untersucht
wurden. Diese Beobachtungen weisen darauf hin, dass die entsprechenden Aberrationen von
Stamm- oder Progenitorzellen an Tochterzellen weitergegeben wurden und damit in den
ausdifferenzierten Lymphozyten als klonale Aberrationen erscheinen. Die Etablierung von
Techniken, welche die Untersuchung von Chromosomenveränderungen in den für die
Vererbung auf Tochterzellen relevanten Stamm- und Progenitorzellen ermöglichen, wird die
Risikoabschätzung verbessern. Die Vorteile von Stamm- und Progenitorzellen als Modell liegen
darin, dass die „in vitro“- Proliferation die natürliche Proliferationskapazität dieser Zellen
widerspiegelt und außerdem die Schäden sichtbar macht, die im Organismus auch potentiell an
Tochterzellen über viele Generationen weitergegeben werden können.
Ziel dieses Forschungsprojektes ist es, in Dosiseskalations-Studien festzustellen, welche
Schwerionen-Strahlendosis zu einer Beeinträchtigung des Differenzierungspotentials von
Blutstammzellen führt und ob unterschiedliche Sensitivitäten verschiedener hämatopoetischer
Vorläufer auftreten. Die Effekte von Schwerionenstrahlung sollen anhand von chromosomalen
Schäden verfolgt werden. Außerdem sollen Auswirkungen auf das Differenzierungsmuster und
die Apoptoserate untersucht werden. Hierbei soll die Wirkung von in der Krebstherapie
verwendeten Kohlenstoffionen mit Röntgenstrahlung verglichen werden, um eine verbesserte
Abschätzung der zu erwartenden Langzeitwirkungen zu ermöglichen.
95

(a) (b)
Stammzellen und Zelltherapie
(a) CFU-GEMM (colony-forming unit-granulocyte, erythrocyte, macrophage, megakaryocyte) Progenitor Zelle im CFU-
Assay nach 14 Tagen Inkubation in MethoCult GF H4444 (StemCell Technologies Inc). (b) mit Giemsa angefärbtes
Chromosomenpräparat der CFU-GEMM
Summary
The increasing application of heavy ions in radiotherapy is a strong motivation to expand the
fundamental research in radiation biology, especially with respect to long term effects in
different cell systems. Major advantages of heavy charged particles in comparison to
conventional photon therapy are the inverted dose profile resulting in a maximum energy
deposition within in the tumor volume. This allows the treatment of deep seated local tumors
while the surrounding normal tissue is preserved effectively. However, studies on the biological
responses in the healthy tissue, e.g. in the stem cell compartment, are desirable. The classical
cytogenetic assay to estimate the radiation effect relies on the measurement of chromosome
aberrations in lymphocytes. But especially regarding long term effects after heavy ion therapy it
is important to understand the occurrence of chromosomal aberrations in haematopoietic stem
cells, which are responsible for the constant renewal of blood with the ability to differentiate to a
variety of specialized blood cells.
Therefore during this work we will focus on the genomic stability (e.g. differentiation,
chromosomal aberrations, apoptosis) of haematopoietic stem cells after irradiation with heavy
ions in comparison to conventional photon irradiation.
Standort Frankfurt
Arbeitsgruppe Molekulare und zelluläre Therapie
Projektleiter PD Dr. med. Torsten Tonn
Mitarbeiter Dipl. Ing. biotech. Daniela Becker
Kooperationen Gesellschaft für Schwerionenforschung (Abteilung für Biophysik) in
Darmstadt-Wixhausen, Dr. Claudia Fournier / Dr. Sylvia Ritter /
Prof. Dr. Gerhard Kraft (Leiter der Abteilung)
Förderung Gesellschaft für Schwerionenforschung, Darmstadt-Wixhausen
Laufzeit des Projektes 01.02.2007 - 31.01.2010
96

Stammzellen und Zelltherapie
Langzeit-Sicherheitsbeobachtung im Rahmen der Gewinnung
allogener Blutstammzellen (alloPBSC) von gesunden
Fremdspendern nach Vorbehandlung mit rhuG-CSF (Filgrastim
oder Lenograstim)
Hintergrund und Projektbeschreibung
Die Transplantation hämatopoietischer Stammzellen (HSC) gesunder, HLA-kompatibler
Fremdspender bei Patienten mit hämatopoietischen Systemerkrankungen nach myeloablativer
Vorbehandlung ist inzwischen ein Standardverfahren mit kurativem Ansatz in der Erwachsenen-
und Kinder-Hämatologie und -Onkologie. Die Stammzellen der gesunden Fremdspender, die in
der Frankfurter Knochenmark-Spenderdatei registriert sind, können entweder durch
Knochenmarkspunktion (in Vollnarkose) oder nach entsprechender Mobilisation mit
Wachstumsfaktoren (G-CSF) aus dem peripheren Blut mittels Stammzellapherese gewonnen
werden. Das letztgenannte Verfahren stellt heute bei der überwiegenden Anzahl der
Entnahmen die letztlich gewählte Methode aufgrund der einfacheren, ambulanten Durchführung
und des schnelleren Anwachsens der Stammzellen im Knochenmark des Empfängers (sog.
„Engraftment“) dar.
Die für die Mobilisierung der Stammzellen aus dem Knochenmark ins periphere Blut
verwendeten Wachstumsfaktoren, rekombinante humane Granulozyten-Kolonie-stimulierende
Faktoren (rhuG-CSF), werden zwar seit Jahren bei Patienten eingesetzt, für gesunde
Fremdspender liegen allerdings bislang nur unzureichende Langzeit-Sicherheitsdaten vor. Die
Hersteller der G-CSF-Präparate und §§ 8 bzw. 9 des Transfusionsgesetzes (TFG) sehen die
Durchführung der Mobilisierung und Entnahme peripherer HSC im Rahmen von Aufklärung,
Einwilligung, Vorbehandlungsplan, ärztlicher Kontrolle und Vorbehandlungsprotokoll inklusive
Meldung unerwünschter Ereignisse vor.
Zur systematischen Erfassung der Langzeit-Sicherheitsdaten der gesunden Fremdspender
(alloPBSC) wird diese Studie seit 2002 an bisher knapp 150 Fremdspendern der Frankfurter
Datei durchgeführt. Die Spender werden voruntersucht, vor, während und nach der Apherese
sowie einen Monat, ein, drei sowie fünf Jahre nach der Spende nachuntersucht. Der Prüfplan
inklusive Spenderinformation und Einwilligungserklärung ist von der Ethikkommission des
Klinikums der Johann Wolfgang Goethe-Universität Frankfurt am Main geprüft und freigegeben
worden.
Wichtigste Ergebnisse
Bisher sind keine schwerwiegenden unerwünschten Nebenwirkungen (UAW) bei den bis heute
knapp 150 in die Studie eingeschlossenen und bis zu fünf Jahren nachuntersuchten Stammzell-
Spendern aufgetreten, so dass wir gesunde Fremdspender vor Stammzell-Apherese
zwischenzeitlich mit guten eigenen Daten beraten können. Ein endgültiges Studienresultat an
über 200 freiwilligen Stammzellspendern, die dann jeweils über fünf Jahre nachuntersucht sein
werden, liegt Ende 2012 vor. Für die über 500 Stammzell-Apheresen, die wir hier in Frankfurt
pro Jahr durchführen, können aber bisherige Trends und Zwischenergebnisse schon heute
direkt in die tägliche ärztliche Beratung unserer freiwilligen Stammzellspender einfließen.
Summary
This long-term safety study revealed no severe adverse events in about 150 healthy volunteer
haematopoietic stem cell (HSC) donors followed for up to five years after stem cell apheresis to
date. The preliminary study data guide us, when we give advice to our volunteer HSC donors.
Final study results in more than 200 HSC donors followed for five years will only be available
end of 2012. But even today, trends and interim analyses of this study serve as information in
the daily counselling with annually more than 500 healthy volunteer HSC donors here in the
Frankfurt institute.
97

Anzahl (n)
70
60
50
40
30
20
Entnahmeformen/Jahr bei
Spendern aus der Frankfurter Datei
PBSC-E
KM-E
Stand: Ende 2006
Kumulativ 1998-2006
N = 131
N = 49
Start PBSC-Studie
5
14
Stammzellen und Zelltherapie
10
0
0
2
0
2
0
5
0
6
8
4
7 7
8
1998 1999 2000 2001 2002 2003 2004 2005 2006
Jahr
Standort Frankfurt
Arbeitsgruppe Stammzell-Transplantation
Projektleiter Dr. med. Markus M. Müller
Mitarbeiter PD Dr. med. Torsten Tonn, Frau Dr. med. Heike Bialleck, Frau Dr.
med. Barbara Bomke, Dr. med. Jörg Schüttrumpf, Frau cand. med.
dent. Ivana Saric, Frau cand. med. dent. Kristina Varga
Kooperationen PD Dr. med. Hans Martin (Medizinische Klinik II – KMT des
Klinikums der J.W. Goethe-Universität Frankfurt/Main)
Förderung DRK-Blutspendedienst Baden-Württemberg - Hessen gGmbH
Laufzeit des Projektes 02/2002 – 12/2012
Weitere Informationen
• M. M. Mueller, H. Bialleck, T. Tonn, B. Bomke, S. Zoeller, K. Buchholz, H. Martin, C. Seidl
and E. Seifried: Long-term Safety, Feasibility and Efficacy of Allogeneic Peripheral Blood
Stem Cell Apheresis in Healthy Donors After rhuG-CSF Mobilisation with Either Filgrastim
or Lenograstim. Transfus Med Hemother 2004;31:15-16 (Postervortrag + Poster auf dem
DGTI-Kongress 2004 in Mannheim)
19
38
55
98

Stammzellen und Zelltherapie
CD34-positive Stammzellen im peripheren Blut als "Repair-
Mechanismus" nach cerebralem ischämischem Insult
Hintergrund und Projektbeschreibung
In Tiermodellen konnte gezeigt werden, dass bei einem Schlaganfall Knochenmarkstammzellsuspensionen
das funktionelle Defizit verbessern und histologisch in die Infarktbezirke
integriert werden. Darüber hinaus konnte eine Migration hämatopoetischer Stammzellen aus
dem Blut in das Gehirn und ein Tropismus dieser Zellen für erkranktes Hirngewebe nachgewiesen
werden. Beim Menschen sind diese Vorgänge bisher nicht ausreichend untersucht.
Ziel dieses Projektes war somit zu untersuchen, ob im Rahmen eines schweren cerebralen
ischämischen Insults bei den Patienten CD34-positive hämatopoetische Stammzellen in das
periphere Blut mobilisiert und damit regenerative Prozesse nach dem Schlaganfall beeinflusst
werden.
Leukozyten und CD34 + Zellen im peripheren Blut bei Patienten mit cerebralem Insult
Wichtigste Ergebnisse
Bei 30 Patienten mit Schlaganfall wurden zu verschiedenen Zeitpunkten nach dem cerebralen
ischämischen Insult die Leukozyten- und CD34 + -Zahl im peripheren Blut im Vergleich zu 10
gesunden Blutspendern gemessen. Es zeigte sich weder ein signifikanter Anstieg der CD34 + -
Zellzahl nach dem cerebralen ischämischen Insult noch ein signifikanter Unterschied zwischen
der Patienten- und Kontrollgruppe. In der Subgruppenanalyse fand sich allerdings ein Trend zur
Korrelation zwischen kortikalen, subkortikalen und territorialen Insult und der CD34 + -,
Leukozyten- und Granulozytenzahl. Zur weiteren Klärung dieses Trends sind Untersuchungen
eines größeren Patientenkollektivs notwendig. Zudem könnte es sein, dass die CD34 + Zellen
rasch im Infarktgebiet integriert werden, ohne dass es zu einem signifikanten Anstieg im
peripheren Blut kommt.
99

Darstellung der CD34 + Zellen im peripheren Blut in der FACS-Analyse
Stammzellen und Zelltherapie
Summary
Animal models have shown that bone marrow stem cells improve functional defects caused by
stroke and can be integrated in ischemic cerebral region.
Our objective was to determine whether stroke patients have elevated CD34 + cells in peripheral
blood which would support the hypothesis of an autologous hematopoietic stem cell repair
process.
In 30 patients the leukocyte and the CD34 + cell count were measured up to 7 days after the
stroke and compared to 10 healthy blood donors as control group. There was no significant
difference in the leukocyte count or the CD34 + cell number between stroke patients and the
control group and no evidence of a general increase of circulating CD34 + cells indicating an
involvement in the repair process. Subgroup analysis between cortical, subcortical and territorial
stroke patients seems to show a trend for correlation with the CD34 + cell number and the
leukocyte count. However, it remains possible that CD34 + cells home to the site of tissue
damage without an increase in the peripheral blood.
Standort Ulm
Arbeitsgruppe Zelluläre Immuntherapie und Stammzelltransplantation
Projektleiter Frau Dr. med. Britta Höchsmann und Dr. med. Markus Wiesneth
Mitarbeiter Dr. med. Peter Schauwecker (Wissenschaftler), Claudia Fischer
(MTA)
Kooperationen Klinik für Neurologie, Universitätsklinikum Ulm
Förderung Mittel des DRK-Blutspendedienstes Baden-Württemberg – Hessen
und des Universitätsklinikums Ulm
Laufzeit des Projektes 01.08.2003 bis 31.07.2006
Weitere Informationen
• Höchsmann, B., Schauwecker, P., Fischer, C., Huber, R., Storch, A., Schrezenmeier, H.,
Wiesneth. M.: Circulating CD34-positive stem cells in stroke patients. Gemeinsame
Jahrestagung der Deutschen, Österreichischen und Schweizerischen Gesellschaften für
Hämatologie und Onkologie, Hannover (2005). Onkologie 28: Suppl. 3, 267 (No. 830)
(2005)
• Höchsmann, B., Schauwecker, P., Fischer, C., Huber, R., Storch, A., Schrezenmeier, H.,
Wiesneth, M.: Circulating CD34+ Stem Cells in Patients with an Acute Ischemic Cerebral
Event. 38. Jahreskongress der Deutschen Gesellschaft für Transfusionsmedizin und
Immunhämatologie (DGTI), Erfurt (2005). Transfus Med Hemother 32: Suppl. 1, 71 (No.
P10.1) (2005)
• Huber, R., Schauwecker, P., Höchsmann, B., Schrezenmeier, H., Wiesneth, M., Ludolph,
A.C., Storch, A.: Fehlende Mobilisation CD34-positiver hämatopoetischer Stammzellen
nach ischämischem Insult. 78. Kongress der Deutschen Gesellschaft für Neurologie,
Wiesbaden (2005). Akt Neurol 32: 1055 (2005)
100

Stammzellen und Zelltherapie
Knochenmarkstammzellen zur intrakoronaren Therapie bei
akutem Myokardinfarkt im Rahmen einer placebo-kontrollierten,
randomisierten, doppelt-blind Studie
Hintergrund und Projektbeschreibung
Verschiedene Pilotstudien berichten, dass die intrakoronare Applikation von autologen
Knochenmarkstammzellen in der Post-Akutphase eines Myokardinfarktes zu einer
Verbesserung der links-ventrikulären Funktion führt. Der Effekt adulter hämatopoetischer
Stammzellen auf die Myokardregeneration wird jedoch weiterhin kontrovers diskutiert, da der
Mechanismus unklar ist.
Zur weiteren Untersuchung dieses offensichtlich positiven Therapieeffektes wurde eine placebokontrollierte,
randomisierte, doppelt-blind Studie in Kooperation mit der Klinik für Innere Medizin
II des Universitätsklinikums Ulm zur intrakoronaren Applikation von autologen
Knochenmarkstammzellen bei Patienten mit schwerem akutem Myokardinfarkt initiiert. Für die
Therapiebeurteilung werden zusätzlich hoch auflösende Bildgebungsverfahren (MRT) zur
Auswertung des Infarktareals und verschiedener Funktionsparameter, insbesondere der
Wandmotilität und der links-ventrikulären Ejektionsfraktion eingesetzt.
Darstellung der Gefäßstenose (↑) des Ramus interventricularis anterior bei einem Myokardinfarkt
Wichtigste Ergebnisse
Im Rahmen dieser klinischen Studie wurde ein Standardtherapieverfahren zur Herstellung und
intrakoronaren Applikation von Knochenmarkstammzellen sowie eines adäquaten
Placebopräparates etabliert. Bisher wurden insgesamt 26 Patienten im Rahmen der Studie
behandelt, ohne dass unerwünschte Wirkungen auftraten. Das Projekt dient somit auch als
Basis für künftige klinische Studien zur Markierung und Transfektion von Stammzellen.
101

Stammzellen und Zelltherapie
Summary
Pilot studies have reported that intracoronary application of autologous bone marrow stem cells
improves outcome of patients with acute myocardial infarction. A randomized, placebo
controlled, double-blind study was initiated in cooperation with the Clinic of Internal Medicine II
of the University Hospital Ulm. Till now 26 patients have been included and treated without side
effects. This project will also serve as a platform for clinical studies in which stem cells will be
labelled and transfected to assess the fate of the cells and to improve the therapeutic effects.
Standort Ulm
Arbeitsgruppe Zelluläre Immuntherapie und Stammzelltransplantation
Projektleiter Dr. med. Volker Mailänder und Dr. med. Markus Wiesneth
Mitarbeiter Andrea Brink (MTA), Birgit Maccari (MTA)
Dr. med. Martin Bommer (Wissenschaftler),
Dr. med. Thorsten Nusser (Wissenschaftler)
Dr. med. Peter Schauwecker (Wissenschaftler),
PD Dr. med. Jochen Wöhrle (Wissenschaftler)
Kooperationen Klinik für Innere Medizin II, Klinik für Innere Medizin III,
Universitätsklinikum Ulm
Förderung Mittel des DRK-Blutspendedienstes Baden-Württemberg – Hessen
und des Universitätsklinikums Ulm
Laufzeit des Projektes 01.08.2005 bis 31.07.2008
102

Stammzellen und Zelltherapie
Untersuchungen zu mesenchymalen Stammzellen: Isolierung,
Charakterisierung, Differenzierung, Seneszenz, GMP-konforme
ex vivo Expansion und Migrations-Monitoring
Hintergrund und Projektbeschreibung
Ein Schwerpunkt der Arbeitsgruppe besteht in der Etablierung der Therapie mit nicht-hämatopoetischen
adulten Stammzellen aus dem Knochenmark (Dr. M. Wiesneth, Dr. V. Mailänder,
Dr. M. Rojewski). Hierbei stehen die Suche nach geeigneten Parametern zur prospektiven
Isolierung dieser mesenchymalen Stammzellen mittels Hochgeschwindigkeits-Zellsortierung
(FACSAria), die GMP-konforme Isolierung und Expansion von mesenchmalen Stammzellen in
einem geschlossenen Zellkultursystemystem sowie die Verwendung von Medien und
Medienzusätzen nicht-tierischen Ursprungs (z. B. humanes Plättchenlysat) im Vordergrund.
Die detaillierte durchflusszytometrische Charakterisierung, das Seneszenzverhalten und die
Untersuchung des Differenzierungspotentials von mesenchymalen Stammzellen bilden einen
weiteren Schwerpunkt der Arbeitsgruppe. Diese Untersuchungen stehen auch im Zusammenhang
mit der Etablierung einer Qualitätskontrolle expandierter mesenchymaler Stammzellen
für den klinischen Einsatz.
Ferner wird die Interaktion mit malignen und nicht-malignen Zellen untersucht, vor allem die
potentielle proliferationsinhibierende und apoptoseinduzierende Wirkung auf Tumorzelllinien
und die immunsuppressiven Eigenschaften von mesenchymalen Stammzellen.
Die Migration und das Homing mesenchymaler Stammzellen durch einen nicht-invasiven
Nachweis von superparamagnetischen Nanopartikeln ist ein weiterer Forschungsschwerpunkt.
Apoptose-Induktion durch MSC. Mononukleäre Zellen aus peripherem Blut und die Zelllinien 697, CS-1, Jurkat, K-562,
KG-1a, LOUCY und U937 wurden ohne MSC (w/o MSC) in unmittelbarem Kontakt mit MSC (direct contact) oder in
einem Transwell-System mit einer Porengröße von 1 µm zusammen mit MSC (transwell) über einen Zeitraum von 72
Stunden inkubiert (n = 2 - 6). Die Abbildung zeigt Ergebnisse einer repräsentativen MSC-Präparation (UL-SARK01).
Vergleichbare Ergebnisse konnten mit anderen MSC-Präparationen erzielt werden.
Wichtigste Ergebnisse
Ein GMP-konformes Expansionssystem befindet sich im Test. Für die Expansion mesenchymaler
Stammzellen kann auf Reagenzien zurückgegriffen werden, die nicht tierischen
Ursprungs sind.
Meschenchymale Stammzellen können in der malignen leukämischen T-Zelllinie Jurkat
Apoptose induzieren und die Proliferation maligner Zellen in Kultur inhibieren. Assay-Systeme
zur funktionellen Charakterisierung der MSCs durch Nachweis der Immunmodulation in der
gemischten Lymphozytenkultur und Quantifizierung der Proliferation wurden etabliert.
103

Stammzellen und Zelltherapie
In Zusammenarbeit mit dem Institut für Organische Chemie III (Prof. Dr. K. Landfester) konnten
Mechanismen der Interaktion von Nanopartikeln mit mesenchymalen Stammzellen geklärt
werden (siehe weitere Projektbeschreibung).
Vergleich des Einflusses zweier Plättchenlysat-Präparationen (PL#1, PL#2) mit fötalem Kälberserum (FCS) auf das
Zellwachstum bei drei MSC-Präparationen. Die initiale Zellkonzentration betrug in jedem Ansatz 10 Zellen/cm2. Die
Inkubation erfolgte über 7 Tage ohne Mediumwechsel. Die Experimente wurden als Dreifachansätze durchgeführt.
Angegeben sind die Mittelwerte.
Summary
Our group is establishing a closed system for GMP compliant expansion of human adult
mesenchymal stem cells ex vivo without the need for reagents of animal origin. This is mandatory
for the clinical application of these cells. Besides this main topic, we are characterizing
mesenchymal stem cells in detail and analyze their characteristics, mainly their differentiation
and migration potency and their ability to interact with other cells and nano particles.
Nanoparticles are used for non-toxic labeling to track migration of mesenchymal stem cells in
vivo.
Standort Ulm
Arbeitsgruppe Zelluläre Immuntherapie und Stammzelltransplantation
Projektleiter Prof. Dr. H. Schrezenmeier
Mitarbeiter Thomas Becker (MTLA), Gisela Baur (MTLA), Karin Nothelfer
(UTA), cand. med. Barbara Weber, cand. med. Eva Hennel, Dipl.-
Biol. Myriam Kern, Dr. rer. medic. Markus Rojewski, Dr. med.
Volker Mailänder
Kooperationen Abteilung Organische Chemie III der Universität Ulm (Prof. Dr. K.
Landfester)
Förderung Bundesministerium für Bildung und Forschung (BMBF),
Medizinische Fakultät Universität Ulm
Laufzeit des Projektes Seit 01.01.2003
Weitere Informationen
• V. Mailänder, E. Hennel, M. Rojewski, M. Wiesneth, H. Schrezenmeier (2006); Mechanism
of immunosuppression by mesenchymal stem cells of normal adults and aplastic anemia
patients; Transfusion Medicine and Hemotherapy 33(S1), 38
• M. T. Rojewski, T. Becker, G. Baur, M. Wiesneth, H. Schrezenmeier (2006); Ex vivo
expansion of mesenchymal stem cells for regenerative therapy: impact of stem cell source
and plating density; Transfusion Medicine and Hemotherapy 33(S1), 7
• M. T. Rojewski, B. M. Weber, H. Schrezenmeier (2006); Bone marrow derived human
mesenchymal stem cells induce apoptosis in Jurkat cells and modulate proliferation of other
malignant cell lines: MSC as new tool for anti-tumor therapy? Bone Marrow Transplantation
37(S1), S154
104

105

Transplantationsmedizin und Immungenetik
3 Transpllantatiionsmediiziin und
IImmungenetiik
HLA
HLA
KIR
KIR
106

Transplantationsmedizin und Immungenetik
Immunregulation von natürlichen Killer Zellen und
Krankheitsprädisposition bei Autoimmunität
Hintergrund und Projektbeschreibung
Autoimmunität ist geprägt durch eine „fehlgeleitete Immunantwort“, die zur Zerstörung von
Körpereigenen Strukturen führt. Folge davon ist eine Vielzahl von Autoimmunerkrankungen, die
das Leben wesentlich einschränken oder gar verkürzen können. Charakteristisch ist dabei, dass
T-Zellen gegen Peptidfragmente völlig normaler Proteine reagieren.
Die Aufklärung der Struktur der HLA-Moleküle spielt daher sowohl bei der Transplantation
Blutbildenden Stammzellen als auch bei der Entwicklung von Autoimmunerkrankungen eine
entscheidende Rolle. Beispiele hierfür sind die rheumatoide Arthritis (RA), bei der fehl-
regulierte aktivierte Lymphozyten normales Gewebe selbst angreifen oder zur Bildung von
autoaggressiven Antikörpern anregen. Dies geschieht auch beim juvenilen Diabetes mellitus
(IDDM), bei dem der Organismus Antikörper gegen die Insulin - produzierenden C-Zellen
erzeugt.
In den letzten Jahren wurden von der Frankfurter Arbeitsgruppe ein Verbundforschungsprojekt
etabliert mit den Abteilungen für Rheumatologie (Medizinische Klinik III) und Endokrinologie
(Medizinischen Klinik I) am Klinikum der JW Goethe Universität und dem Rheumazentrum
Rhein-Main (Frankfurt-Wiesbaden-Bad Schlangenbad) mit dem Ziel immunregulatorische
Mechanismen an Kollektiven von klinisch gut definierten Patienten zu untersuchen.
Schwerpunkt der Frankfurter Arbeitsgruppe am Institut für Transfusionsmedizin ist die
Untersuchung der Wirkmechanismen von Natürlichen Killer (NK) Zellen in der Pathophysiologie
von Autoimmunerkrankungen.
107
Zielzelle
NK-Zelle
Darstellung der Interaktion zwischen Natürlichen Killer (NK) Zellen und Zielzellen (z.B. nach Infektionen) NK-Zellen sind
hierbei ein wesentlicher Bestandteil der zellulären Immunantwort im Rahmen der natürlichen Immunität. Die
zytotoxischen Reaktion der NK-Zellen wird durch durch den Kontakt Inhibierenden NK-Zell-Rezeptoren mit HLA-Klasse
I Merkmalen auf der Zielzelle beeinflusst.
Wichtigste Ergebnisse
Die auf Chromosom 19 lokalisierten Genen für die Rezeptoren von NK Zellen (NKR) agieren
aktivierend und inhibierend und besitzen eine wesentliche Funktion in der Regulation von NK-
Zellen und T-Zellen. Veränderungen in der Verteilung zwischen aktivierenden und inhibierenden
NKR könnten eine Prädisposition für Autoimmunerkrankungen darstellen. Bei der
Transplantation von Blutstammzellen weisen verschiedene Studien auf einen Einfluss zwischen
der HLA und NKR Konstellation des Spenders und Empfängers für die
Überlebenswarscheinlichkeit hin. I
m Forschungsverbund Psoriasis Arthritis wurde untersucht, inwieweit die Expression von KIR
auf T-Zellen das zytotoxische Repertoire verändert. Interessant ist auch die Beobachtung, dass
sich bei RA-Patienten CD4+ CD28- T-Zellen vermehrt finden, die KIR exprimieren. Dies könnte
funktionell eine Verbindung zwischen natürlichem und erworbenem Immunsystem darstellen.
Die Untersuchungen an Patienten mit Rheumatoider Arthritis, Studienkollektiv mit frühmanifestem
stark entzündlichem Verlauf (SIMERA-Studie) und Studienkollektiv mit regulärem
oder extra-artikulärem Krankheitsverlauf (GENRA-Studie) sind abgeschlossen. In Kooperation
mit der Abteilung für Endokrinologie sind die Untersuchungen an Patienten mit Typ I Diabetes
mellitus ebenfalls in der Phase der Zwischenauswertung. Der Einfluss von HLA-NKR-

Transplantationsmedizin und Immungenetik
Differenzen in der Pathophysiologie der Erkrankung wird auch weiterhin untersucht. Im Rahmen
eines beantragter Forschergruppenkonzeptes soll hierbei auch die Möglichkeit der
Toleranzinduktion durch hochdosierte gabe vin Vitamin D klinisch geprüft werden.
Durchflußzytometrische Messung der Verteilung von weißen Blutzellen, differenziert nach Lymphozyten und Nätürlichen
Killerzellen (CD56 positiv). Die Untersuchungen zeigen den unterschiedlichen Aktivierungszustand von NK-Zellen
anhand der Messung von Oberflächenrezeptoren, wie z.B. dem Molekül NKp30
Summary
The project is focused on the genetic and functional interaction between human leukocyte
antigens and killer cell immunoglobulin–like receptors in autoimmunity and transplantation.
Autoimmune diseases studied include collaborative projects on patients with rheumatoid
arthritis, psoriasis arthritis and juvenile diabetes mellitus. The project has been also focused to
establish an easy and reliable typing method for NK cell receptor genes and to define NKR
predisposing to disease pathogenesis including a clinical trial on the application of Vitamin D for
tolerance induction.
Standort Frankfurt
Arbeitsgruppe Abteilung Transplantationsimmunologie und Hämogenetik
Projektleiter Prof. Dr. med. Christian Seidl
Mitarbeiter Dr. med. Veronika Brixner, Yaron Unger (cand.med.), Christine
Wild (cand.med.)
Kooperationen Kooperationsprojekt für den Bereich Autoimmunität mit der
Abteilung für Rheumatologie (Medizinische Klinik III) und
Endokrinologie (Medizinische Klinik I), Universitätsklinikum
Frankfurt, dem Universitätsklinkum Mainz und der Deutschen Klinik
für Diagnsotik (DKD), Wiesbaden
Institut für Pharmakologie, Bereich Immunpharmakologie,
Universitätsklinikum Frankfurt (Prof. Dr. H. Radeke)
Klinische Studienleitung Vitamin D Prophylaxe (Medizinische Klinik
I, Prof. Dr. K. Badenhopp)
Förderung DRK-Blutspendedienst Baden-Württemberg - Hessen gGmbH
Strukturelle Mittel der Universität Frankfurt am Main
Forschungsmittel der Universität Frankfurt am Main
Laufzeit des Projektes 01.01.2006 - 31.12.2006
108

Transplantationsmedizin und Immungenetik
Forschergruppe - Universitätsklinikum Frankfurt: Induktion
immunologischer Toleranz durch Übertragung
hämatopoetischer Stammzellen
Hintergrund und Projektbeschreibung
Die Übertragung von Blutzellen von einem Menschen auf einen anderen ist ein immer wieder
beobachtetes Phänomen. Es kann einerseits bei der Geburt entstehen oder aber im Rahmen
der Stammzelltransplantation absichtlich induziert werden. Die Koexistenz von Körperzellen
zweier Individuen wird als Chimärismus bezeichnet. Bei der feto-maternaler und/oder maternofetalen
Übertragung von hämatopoetischen Stammzellen können die daraus resultierenden
Chimärismen Jahrzehnte lang nachgewiesen werden ohne dass ihnen notwendigerweise ein
Krankheitswert beigemessen werden muss. Andererseits lassen sich Chimärismen weit
häufiger und in höherer Konzentration bei Patienten mit Autoimmunerkrankungen nachweisen.
Gegenwärtig besteht kein prinzipielles Verständnis davon, wie die Präsenz eines
hämatopoetischen Chimärismus zur Entstehung von Autoimmunität einerseits und Toleranz
andererseits führen kann.
Ziel der Forschergruppe ist es ein klinisch umsetzbares Konzept für den Einsatz von
hämatopoetischen Zellen zur Induktion von Toleranz nach allogener Blutstammzelltransplantation
oder bei Autoimmunerkrankungen zu entwickeln.
DONOR CELLS %
109
100
80
60
40
20
(A) Peripheral Blood
0
0 50 100 150 200
DAYS POST TRANSPLANT
100
80
60
40
20
0
(B) CD3 + (B) CD3 T-cells in PB
+ T-cells in PB
30 40 201
DAYS POST TRANSPLANT
Posttransplantationsmonitoring eines Kindes nach Blutstammzelltransplantation: (A) Anteil der Spenderzellen (% Donor)
ermittelt anhand eines STR Untersuchung mittels singleplex (gestrichelte Linie) und multiplex (durchgezogene Linie)
PCR aus peripheren mononukleären Zellen. (B) Zelllinen-spezifische Untersuchung mittels STR Analyse in CD3 + T-
Zellen und Granulozyten (nicht dargestellt) (kariert=singleplex PCR, schwarz=multiplex PCR) (O. Beck, C. Seidl et al,
Eur J Haematol. 2006 ;76(3):237-44)
Wichtigste Ergebnisse
Voruntersuchungen haben erstmals die Bedeutung nicht-vererbter mütterlicher HLA DQ Allele
für die Prädisposition zu Typ 1 Diabetes mellitus gezeigt, was u.a. durch persistierende
maternale Antigen-präsentierende Zellen beim betroffenen Kind erklärt werden könnte.
Bei Autoimmunerkrankungen wie der Sklerodermie oder der juvenilen Dermatomyositis wurden
persistierende feto-maternale Mikrochimärismen beobachtet. Auffällig ist dabei der fetalmaternale
und der maternale-fetale Transfer immunreaktiver Zellen.
Weiterhin ist es gelungen in Zusammenarbeit mit der Klinik für Gynäkologie (AG PD Dr. med.
Steinborn) immunregulatorische Mechanismen in der Pathogenese von
‚Schwangerschaftsvergiftungen’ anhand von Patienten mit Eklampsie und/oder Präeklampsie zu
definieren.
Aktuell werden folgende Teilprojekte/Forschungsschwerpunkte untersucht
Teilprojekt A1:
„Perinataler materno-fetaler Zelltransfer und postnataler maternaler Mikorchimärismus bei Neu-
und Frühgeborenen“ Leitung: Prof. Dr. Karl Bauer, Prof. Dr. Christian Seidl, Prof. Dr. Peter
Bader

Transplantationsmedizin und Immungenetik
Teilprojekt B1:
„Regulation der feto-maternalen Immunität bei Typ 1 Diabetes durch Chimärismus“
Leitung: Prof. Dr. Klaus Badenhoop, Prof. Dr. Chrsitian Seidl, Prof. Dr. Heinfried Radeke,
Prof. Dr. Peter Bader
Teilprojekt B2:
„Alloreaktivität und Toleranzentwicklung nach allogener Stammzelltransplantation“
Leitung: Prof. Dr. Peter Bader, Prof. Dr. Christian Seidl, Prof. Dr. Thomas Klingebiel
(A) (B)
SZT
Kompletter Chimärismus
Gemischter Chimärismus
Blutstammzelltransplantation: (A) Schematische Darstellung der Transplantation von Blutstammzellen und der Möglichkeit
der Entwicklung eines kompletten Spenderchimärismus (=vollständige Regeneration des Blutes beim Empfänger durch die
Spender-Stammzellen) oder gemischten Chimärismus (=Regeneration des Blutes beim Empfänger durch gespendete und
eigene Stammzellen). (B) Mikroskopisches Bild eines kompletten Chimärismus im Knochenmarkpunktat eines Patienten.
Summary
This project is a collaborative study project initiated by the department of pediatric stem cell transplantation
including several medical departments of the Johann Wolfgang Goethe University Hospital. The project
has established a platform of 6 sub-projects in order to exchange scientific experience between clinicians
and basis researchers in the field of immunology. The scientific focus is to evaluate the clinical
significance of microchimerism due to the placental transfer of fetal cells to the mother. These cells carry
genetic information of the father. Expression and/or regulation of particular immune response genes may
lead to the breakdown of the immune system leading to autoimmune disease.
Standort Frankfurt
Arbeitsgruppe Abteilung Transplantationsimmunologie und Hämogenetik
Projektleiter Prof. Dr. med. Christian Seidl (Teilprojektleiter der Forschergruppe)
Mitarbeiter Dr. med. Veronika Brixner, Anja Körner (MTA),
Kooperationen Forschungsverbund Immunologie des JW Goethe
Universitätsklinikum mit dem Institut für Pathologie (Prof. Dr. H.
Hansmann), Institut für Pharmakologie (PD Dr. Urs Chrsiten),
Bereich Immunpharmakologie (Prof. Dr. H. Radeke), der
Pädiatrischen Hämatologie-Onkologie (Prof. Dr. P. Bader, Prof. Dr.
Th. Klingebiehl), Medizinischen Klinik I (Prof. Dr. K. Badenhoop)
und Zentrum der Kinderheilkunde, Abteilung Neonatologie (Prof.
Dr. K. Bauer).
Förderung DRK-Blutspendedienst Baden-Württemberg - Hessen gGmbH
Strukturelle und Forschungsmittel der Universität Frankfurt
weiterführenden Finanzierung durch Antragstellung als
Forschergruppe bei der Universität Frankfurt und der Deutschen
Forschungsgemeinschaft (DFG)
Laufzeit des Projektes 01.01.2004-31.12.2008
110

Transplantationsmedizin und Immungenetik
Individuell angepasste Immunsuppression nach allogener
Transplantation durch molekulardiagnostisches
Immunmonitoring
Hintergrund und Projektbeschreibung
1. Bestimmung des individuellen Grads der Immunsuppression durch Cyclosporin A
Der Calcineurinhemmer Cyclosporin A (CsA) hat entscheidend zu verbesserten Transplantatüberlebenszeiten
beigetragen. Neben der immunsuppressiven Wirkung hat das Medikament
allerdings erhebliche Nebenwirkungen. CsA muss nach dem Blutspiegel dosiert werden, da es
derzeit keine sensitiven, praktisch durchführbare Methoden gibt, um den Grad der
Immunsuppression eines Patienten individuell funktionell zu bestimmen. Obwohl die gegenwärtig
praktizierte empirische Dosierung sicherlich für die Mehrzahl der Patienten akzeptabel
ist, gibt es keine Erkenntnisse inwieweit dies einem optimalen Zustand der Immunsuppression
entspricht. Während eine zu niedrige Dosierung klinisch erfassbar ist, kann eine Überdosierung
nicht erkannt werden, gehäufte Infektionen und ein erhöhtes Tumorrisiko sind die Folge.
2. Individuelle Risikoanalyse früher Komplikationen nach Lebertransplantation
Organschädigung durch Ischämie nach Explantation wird als wichtiger Risikofaktor für frühe
Komplikationen nach Transplantation angesehen. Der Ischämieschaden beruht auf komplexen
pathophysiologischen Mechanismen, in welche Endothelschädigung, Radikalbildung und proinflammatorische
Zytokine involviert sind. Die Schädigung führt zu Organdysfunktion und zur
Aktivierung des Immunsystems, mit nachfolgenden Abstoßungsreaktionen. Kein diagnostischer
Parameter erlaubt derzeit eine klinische Prognose des Transplantats basierend auf dem Grad
der Organschädigung. Die gegenwärtig praktizierte pathomorphologische Analyse der
Reperfusionsbiopsie sowie der Anstieg der Transaminasen in der frühen post-operativen Phase
korrelieren nur ungenügend mit dem weiteren klinischen Verlauf und werden deshalb nicht
routinemäßig als therapeutische Entscheidungshilfe herangezogen.
Wichtigste Ergebnisse
1. Individualisierte Immunsuppression
Wir haben eine Methode entwickelt, welche den Grad der Suppression von NFAT-regulierten
Genen 2 Stunden nach CsA Einnahme als Marker für den individuellen Grad der Immunsuppression
nutzt. Die klinische Relevanz der Methode wurde inzwischen wissenschaftlich belegt.
Sowohl bei herztransplantierten als auch bei nierentransplantierten Patienten konnten wir
zeigen, dass die Inzidenz von Infektionen bei Patienten mit stärkerer Suppression der
Expression NFAT regulierter Gene signifikant erhöht ist. Gleiches konnte für das Auftreten von
Tumoren gezeigt werden. Das erhöhte Risiko für diese Komplikationen konnte im untersuchten
Patientenkollektiv weder aus der Dosierung noch aus der ansonsten routinemäßig
durchgeführten Bestimmung des CsA Spiegels im Blut abgeleitet werden. Mittels ROC-Analyse
konnte ein kritischer Wert von 15 % Restaktivität der Transkription errechnet werden, unter dem
die Zahl der Komplikationen deutlich ansteigt Abb. 1). Aus diesen Beobachtungen ergibt sich
erstmalig eine Orientierung für die Dosierung von CsA, welche den funktionellen Grad der
Immunsuppression berücksichtigt. Patienten mit erhöhtem Risiko für Infektionen und Tumor
können rechtzeitig identifiziert werden. Die Dosierung von CsA kann bei diesen Patienten in
einer rationalen Form reduziert werden, ohne das transplantierte Organ zu gefährden
2. Individuelle Risikoanalyse früher Komplikationen nach Lebertransplantation
Wir konnten in Biopsien unmittelbar nach Reperfusion Gene identifizieren, deren Expression
eine Voraussage für das individuelle Risiko einer Frühkomplikation nach Transplantation
voraussagen können. Interessanterweise waren neben den pro-inflammtorischen Genen TNF-α
und CRP, die Expression von 5 Genen verändert, mit pathophysiologischer Relevanz bei einer
Endothelschädigung. Damit wurde erstmalig bei Patienten der Zusammenhang zwischen
Ischämieschaden und klinisch relevanter Komplikation gezeigt. Mittels eines Risiko-Scores
konnten Komplikationen mit einer Sensitivität von 96% und einer Spezifität von 74%
vorausgesagt werden.
111

Transplantationsmedizin und Immungenetik
Massive Inhibition NFAT regulierter Gene nach Cyclosporin A Gabe korreliert mit dem individuellen Risiko für infektiöse
und maligne Erkrankungen bei Patienten nach Organtransplantation.
Summary
Individualized immunosuppressive therapy
At present it is unclear which dose of Cyclosporine A (CsA) is optimal with respect to immunosuppressive
efficacy and drug specific side effects at the level of the individual patient. Recently we proposed the
quantitative assessment of NFAT regulated gene expression in peripheral lymphocytes as a new tool to
measure the individual degree of immunosuppression by CsA. We could demonstrate that a significant
correlation exists between suppression of NFAT-regulated genes and clinical complications such as
infections and malignancies. Therefore, pharmacodynamic monitoring of CsA efficacy in transplanted
patients seems to be a useful tool to adjust immunosuppressive therapy in individual patients. Moreover,
the reduction of CsA dosage under close pharmacodynamic monitoring may lead to reduced drug specific
side effects while maintaining optimal graft protection.
Risk of early clinical complications after liver transplantation
Preservation induced injury is a major contributing factor to early graft dysfunction in liver allograft
recipients. We identified 6 genes, which were significantly correlated with the occurrence of early graft
dysfunction. Using a risk score based on the expression of these genes, complications could be predicted
with 96% sensitivity. Quantitative gene expression analysis in postperfusion biopsies could be a valuable
tool to prospectively identify patients at risk for early clinical allograft dysfunction after liver transplantation.
Standort Heidelberg
Arbeitsgruppe Molekulare Immundiagnostik
Projektleiter Dr. med. Thomas Giese
Mitarbeiter Daniela Merklinger (BTA), Simone Fomuki (MTA), Dieter Stefan
(BTA)
Kooperationen Prof. Dr. med. Martin Zeier, Nephrologie Heidelberg
Prof. Dr. Thomas Dengler, Kardiologie Heidelberg
Prof. Dr. Jan Schmidt, Chirurgie Heidelberg
Förderung DRK-Blutspendedienst Baden-Württemberg - Hessen gGmbH
Firma Astellas / Sonstige Mittel
Laufzeit des Projektes 01.01.2003 - 31.12.2006
Weitere Informationen
• Berberat, P.O., H. Friess, B. Schmied, M. Kremer, S. Gragert, C. Flechtenmacher,
P.Schemmer, J. Schmidt, T. Kraus, W. Uhl, S. Meuer, M.W. Buchler, and T. Giese. 2006.
Differentially expressed genes in postperfusion biopsies predict early graft dysfunction after
liver transplantation. Transplantation 82:699-704.
• Giese, T., M. Zeier, P. Schemmer, W. Uhl, M. Schöls, T. Dengler, M. Buechler, and S.
Meuer. 2004. Monitoring of NFAT-regulated gene expression in the peripheral blood of
allograft recipients: a novel perspective toward individually optimized drug doses of
cyclosporine A. Transplantation 77:339-344.
• Sommerer, C., M. Konstandin, T. Dengler, J. Schmidt, S. Meuer, M. Zeier, and T. Giese.
2006. Pharmacodynamic monitoring of cyclosporine a in renal allograft recipients shows a
quantitative relationship between immunosuppression and the occurrence of recurrent
infections and malignancies. Transplantation 82:1280-1285.
112

Transplantationsmedizin und Immungenetik
Entwicklung von Reagenzien zur automatisierten Sequenzbasierten
HLA-Typisierung
Hintergrund und Projektbeschreibung
Die molekularbiologischen Verfahren haben seit Anfang der 90er Jahre die HLA-Diagnostik
zunehmend dominiert. Neben den qualitativen Vorteilen gegenüber der Serologie gibt es eine
Reihe von logistischen Überlegungen, die den Ausbau dieser Verfahren erforderlich machten.
Der enorme Polymorphismus im HLA-System und der kontinuierliche Anstieg von neu
entdeckten Allelen stellt für die diagnostischen Verfahren eine große Herausforderung dar,
zumal für das Feld der Stammzelltransplantation eine HLA-Klasse-I- und HLA-Klasse-IIhochauflösende
Typisierung von großer klinischer Bedeutung ist. Die gleichzeitig stetig steigende
Zahl von registrierten freiwilligen Knochenmarkspendern sorgt für einen kontinuierlichen
Anstieg der diagnostischen Leistungen in klinischen Histokompatibilitätslaboren in Deutschland.
Kontinuierlicher Anstieg der HLA-Antigen- und Allelgruppen seit 1968.
Wichtigste Ergebnisse
Wir konnten einen Reagenziensatz für die hochauflösende HLA-Klasse-I-Typisierung mittels
Sequenzanalyse entwickeln. Das Produkt und der Herstellungsprozess wurden durch eine
benannte Stelle im Herbst 2006 zertifiziert (CE). 12 neue HLA-Allele wurden mit dieser Methode
von unserer Arbeitsgruppe entdeckt und an die zentrale Registrierungsstelle des
Nomenklaturkomitees gemeldet. Die meisten davon konnten gut charakterisiert werden, und
einige davon sind bereits publiziert worden. Im Bereich der Automatisierung konnte die DNA-
Isolation mit einem neuen Verfahren etabliert werden, das eine gleichzeitige Isolation von 96
Proben innerhalb einer Stunde ermöglicht. Auch die Aufreinigung der PCR-Produkte, das
aufwändige Ansetzen von Sequenzierreaktionen sowie die Reinigung und Fällung der
Sequenzierprodukte konnte vollkommen automatisiert werden. Als nächstes Ziel sollen die
einzelnen Prozesse so miteinander verknüpft werden, dass zwischen PCR-Ansatz und endgültigem
Auswerten der Sequenzen keine manuellen Arbeiten mehr erforderlich sind.
Summary
We developed reagents for high resolution HLA-class I typing by sequence-based typing (SBT).
These have been CE certified since fall 2006. 12 new HLA alleles have been discovered and
registered in the nomenclature database with this method. Most of them have been
characterized in detail and some of them have been already published.
113

Transplantationsmedizin und Immungenetik
Automatische Analyse des Exon-3-Bereiches vom HLA-A-Genort mit Hilfe des H-Seq ABC Kits aus Ulm.
The automatization of the SBT line in our laboratory has also come forward. We introduced a
method which allows simultaneous DNA isolation of 96 samples within one hour. In addition we
fully automatized the processes of PCR product purification, sequence reaction setup, as well
as sequence reaction purification. The introduction of barcodes and of suitable evaluation
software also made data interpretation much easier. The next steps will be to automatically link
the individual processes from PCR setup to data interpretation.
Standort Ulm
Arbeitsgruppe Transplantationsimmunologie
Projektleiter PD Dr. med. Joannis Mytilineos
Mitarbeiter Dr. med. K. Hirv, Dipl. biol. Andrea Vigh, cand. med. Michael
Begovic, cand. med. Kerstin Bloch, G. Erne (MTA); A. Skambraks
(MTA)
Kooperationen Dr. K. Schwarz, Abt. Molekulare Diagnostik, IKT Ulm
Dr. T.H. Tran, Abt. Transplantationsimmunologie, Universität
Heidelberg
Förderung DRK-Blutspendedienst Baden-Württemberg - Hessen gGmbH
Laufzeit des Projektes 01.04.2005 - 31.01.2009
Weitere Informationen
• Hirv K., Pannicke U., Mytilineos J., Schwarz K.: Disulfide bridge disruption in the �2 domain
of the HLA class I molecule leads to low expression of the corresponding antigen. Human
Immunology 67: 589-596 (2006)
• Hirv K., Merz A., Schrezenmeier H., Mytilineos J.: High resolution HLA-A-, -B and Cw
typing with an allele group-specific sequencing approach in hematopoietic stem cell
transplant patients and their unrelated donors. 39th Annual Congress of the German
Society for Transfusion Medicine and Immunohematology (DGTI), Frankfurt, 19-22
September 2006. Transfus. Med. Hemother. 33 (S1): 53 (Abstract P7.2) (2006)
• Hirv K., Mytilineos J.: Die Häufigkeit und Charakterisierung neuer HLA-Allele. 14.
Jahrestagung der Deutschen Gesellschaft für Immungenetik (DGI), Innsbruck, 12.-14.10.06
(Abstract No. P1)
114

Transplantationsmedizin und Immungenetik
Einfluss von Zytokin- und Gerinnungsfaktor-
Genpolymorphismen auf das Überleben von
Nierentransplantaten
Hintergrund und Projektbeschreibung
Die Abstoßung von transplantierten Organen ist nach wie vor die häufigste Ursache des
Misserfolges einer Organtransplantation. Bei der Abstoßung von Organen bzw. deren
Behandlung durch Immunsuppressiva spielen Zytokine eine wichtige Rolle. Sie können die
immunologische Reaktion entscheidend lenken und sind deswegen auch Angriffsmoleküle für
die wichtigsten immunsuppressiven Medikamente, wie z. B. des Cyclosporin A und Tacrolimus.
Auch die Blutgerinnung spielt eine wichtige Rolle bei der Abstoßung von Transplantaten. Die
immunologische Reaktion ist häufig gegen Endothelzellen des transplantierten Organs
gerichtet, und daraus resultierende entzündliche Reaktionen führen zur Aktivierung von
Gerinnungsfaktoren und eine anschließende Thrombosierung des transplantierten Organs.
Polymorphismen in den regulatorischen Bereichen der wichtigen Zytokin- sowie einzelner
Gerinnungsfaktorgene beeinflussen die Funktion der dazugehörigen Proteine und könnten das
Risiko des Verlusts eines Transplantats erhöhen. Mehrere Studien einzelner Zentren haben vor
allem den Einfluss von IL10, TGFß, TNFα, und IL4Rα sowie Faktor II, Faktor V-Leiden und
MTHFR-Polymorphismen auf den Transplantationserfolg untersucht. Häufig sind die
vorhandenen Daten jedoch widersprüchlich und die Anzahl der untersuchten Proben ist
verhältnismäßig gering.
In einer multizentrischen internationalen Studie (Collaborative Transplant Study) und in
Kooperation mit dem transplantationsimmunolgischen Labor von Professor Opelz in Heidelberg
wurde ein großes Patientenkollektiv von erst- und retransplantierten Patienten, die eine Niere
von einem verstorbenen Spender erhielten, auf die oben beschriebenen Zytokin- und
Gerinnungsfaktorgene untersucht. Die Genotypdaten wurden mit dem Transplantatüberleben
korreliert. Diese Studie ist die einzige multizentrische Studie mit dieser Fragestellung im Bereich
der Organtransplantation mit einer hohen statistischen Aussagekraft und eine große Zahl von
untersuchten Proben.
Wichtigste Ergebnisse
In einem großen Kollektiv von 2298 erst- und 1901 retransplantierten Patienten wurde der
Einfluss von Polymorphismen im IL10, TGFß, TNFα, und IL4Rα-Gen auf das Transplantatüberleben
analysiert. Unter Ersttransplantierten konnte kein Effekt des Genotyps auf den
Transplantationserfolg festgestellt werden. Bei retransplantierten Patienten assoziierte eine
Homozygotie des TNFα-Gens für die Variante A (A/A) mit einem signifikant schlechteren
Transplantatüberleben. Die restlichen untersuchten Zytokingene nahmen auch bei der
Retransplantation keinen Einfluss auf den Verlauf der Transplantation.
In einer zweiten Studie mit 676 Erst- und 651 Retransplantationen wurde der Einfluss von
Polymorphismen in den Faktor-II-, Faktor-V- und MTHFR-Genen auf den Nierentransplantationserfolg
analysiert. Zunächst wurde ein Verfahren, basierend auf der PCR-SSP-Technologie,
zur Testung der entsprechenden Polymorphismen entwickelt und bei 100 gesunden Probanden
validiert. Die anschließende Testung der klinischen Proben ergab keinen Einfluss der
Polymorphismen für die Faktor-V- und MTHFR-Gene auf das Transplantatüberleben. Der
Faktor-II-G20210A–Polymorphismus ergab einen marginal signifikanten Einfluss bei ersttransplantierten
Patienten, der jedoch nach statistischer Korrektur verloren ging und deshalb
durch weitere Studien bestätigt oder verworfen werden sollte.
Summary
In this study, SNP within the IL10, TGFß1, TNFα, and the IL4Rα genes were analyzed in 2298
first and 1901 repeat cadaver kidney recipients. We found no significant effect on the survival
rate of first grafts. Among retransplants, we observed that recipients who were homozygous for
the high TNFα producer genotype -308 A had a significantly lower graft survival rate than
patients who were carriers of the low producer genotype. The outcome of retransplants appears
to be affected by TNFα genotypes.
115

A B
Transplantationsmedizin und Immungenetik
Abbildung A: Einfluss des Polymorphismus TNFα�-308 (A/G) auf das Transplantatüberleben von Patienten, die ein
Zweittransplantat erhalten haben. H = High responder (Genotyp A/A), L or M = Low or intermediate responder (Genotyp
G/G oder A/G)
Abbildung B: Einfluss des Polymorphismus G20210A im Faktor II Gen auf das Überleben von Nierenersttransplantaten.
Träger der genetischen Variante (G/A) zeigen ein schlechteres Transplantatüberleben als Patienten, die
den Wildtyp tragen (G/G).
In a second study we investigated the potential effect of 3 SNP within the Factor II, Factor V and
MTHFR genes on kidney graft survival. The study consisted of 676 first and 651 retransplant
patients. We did not find a statistically significant association of SNP factor V Leiden G1691A
and MTHFR C677T with renal graft survival. Factor II G20210A resulted in a significant
association among first transplants only that, however, was not sustained after Bonferroni
correction. This SNP might be an interesting candidate for future studies.
Standort Ulm/Heidelberg
Arbeitsgruppe Transplantationsimmunologie
Projektleiter PD Dr. med. Joannis Mytilineos
Mitarbeiter A. Skambraks (MTA)
Kooperationen Prof. G. Opelz, Abt. Transplantationsimmunologie, Universität
Heidelberg
Marko Meyer, Chirurgische Klinik der Universität Essen
Förderung Transplantationszenturm Heidelberg
Laufzeit des Projektes 01.02.2003 - 31.12.2007
Weitere Informationen
• Mytilineos J, Laux G, Opelz G. Relevance of IL10, TGFbeta1, TNFalpha, and IL4Ralpha
gene polymorphisms in kidney transplantation: a collaborative transplant study report. Am J
Transplant. 2004; 4(10):1684-90.
• Meyer M, Czachurski D, Tran TH, Opelz G, Mytilineos J. A new PCR-SSP typing method for
six single-nucleotide polymorphisms impairing the blood-clotting cascade as well as T-cell
stimulation. Tissue Antigens. 2005; 66(6):650-5.
• Meyer M, Laux G, Scherer S,Tran TH, Opelz G, Mytilineos J. No Association of Factor V
Leiden, Prothrombin G20210A, and MTHFR C677T Gene Polymorphisms With Kidney
Allograft Survival: A Multicenter Study. Transplantation 2007; 83(8) (in press)
116

Transplantationsmedizin und Immungenetik
Einfluss von immunologisch relevanten Nicht-HLA-
Genpolymorphismen in der Stammzelltransplantation
Hintergrund und Projektbeschreibung
Die Stammzelltransplantation ist ein therapeutisches Verfahren, welches immer breitere Anwendung
findet. Allerdings besteht eine erhebliche transplantationsassoziierte Morbidität und
Mortalität, wobei vor allem die "Graft-versus-Host-Reaktion" (GvHD), Abstoßung und Rezidive
der Grundkrankheit von Bedeutung sind.
Gene immunologisch relevanter Moleküle, wie z. B. Zytokine oder NOD/CARD bzw. NK-KIR,
sind in geringem Maße polymorph. Meistens handelt es sich dabei um den Austausch einzelner
Nukleotide (SNP), jedoch können auch Deletionen, Insertionen und andere Veränderungen des
Gens vorkommen. In der Regel ist der Genpromotor betroffen, allerdings sind auch
Polymorphismen in Exons beschrieben worden. Einige SNP wurden als funktionell relevant
beschrieben, da sie in den meisten Fällen mit dem Transkriptionsmaß bzw. der Funktionalität
des Genproduktes korrelieren. Dies könnte bei der Stammzelltransplantation zu
unterschiedlicher Ausprägung der immunologischen Mechanismen führen und letztendlich mit
dem Ausgang der Transplantation korrelieren. Bei SNP, bei denen der Polymorphismus eine
Auswirkung auf die Struktur des daraus resultierenden Proteins hat, vermutet man eine gewisse
Immunogenität der Proteinvariante, die somit als Ziel für eine GvH-Reaktion bzw. eine
Abstoßung dienen könnte. Man spricht dann von "Minor-Antigenen“, die in diesem
Zusammenhang auch beschrieben werden.
Eine besondere Gruppe von interessanten Genpolymorphismen stellen die KIR-Gene dar.
Hierbei handelt es sich um Gene, die für Rezeptoren auf den NK-Zellen kodieren. Diese
Rezeptoren können NK-Zellen aktivieren bzw. inhibieren. Eine Interaktion zwischen den inhibitorischen
NK-KIR-Rezeptoren und bestimmten HLA-Gruppen, meist HLA-C, ist beschrieben
worden. Über die funktionellen Abläufe von aktivierenden KIR-Rezeptoren ist gegenwärtig
wenig Information vorhanden. Die Anzahl der KIR-Gene sowie die KIR-Gene selbst sind
ebenfalls polymorph. Der Polymorphismus und die Assoziation mit den KIR-Rezeptorliganden
(HLA-C) wurde in mehreren kleineren Studien als funktionell relevant in der
Stammzelltransplantation beschrieben.
In unserem Projekt wird ein gut charakterisiertes, großes Patienten/Spender-Kollektiv von ca.
400 nicht verwandten
Stammzelltransplantationspatienten für eine
IL 1α-1
TNFα-3
Reihe von Zytokin-, Minor, NOD/CARD- und
IL 1α-2
TNFα-4
KIR-Genen getestet. In einer retrospektiven
IL 1β-1
IL 2-1
Analyse soll dann der Transplantationserfolg,
IL 1β-2
IL 2-2
die GvH und Relapse-Inzidenz sowie das
IL 1β-3
IL 2 –3
Patientenüberleben mit den verschiedenen
IL 1β-4
IL 2-4
Parametern korreliert werden.
IL 1R-1
IL 4 -1
Wichtigste Ergebnisse
Wir konnten Verfahren zur Bestimmung der
entsprechenden Polymorphismen etablieren.
Für die Typisierung von 20 Zytokingen-SNPs
(siehe Abb. 1), der KIR-Gene bzw. von
definierten Minor-Antigenen wird das PCR-
SSP-Verfahren mit bereits existierenden,
kommerziellen Reagenzien durchgeführt. Die
entsprechenden Techniken wurden eingeführt
und validiert. Für die NOD/CARD-
Polymorphismen wurde ein In-Haus-Verfahren
entwickelt, ebenfalls basierend auf der PCR-
SSP-Methode, welches bei 100 gesunden
Personen validiert wurde. Zytokingen-
Testungen sind bereits bei über 200
Patienten/Spender-Paaren durchgeführt
worden. In einer Erstanalyse wurden die
Frequenzen der getesteten SNPs mit der
Diagnose verschiedener Leukämieformen
korreliert. Keine Leukämieform zeigte eine
117
IL 1R-2
IL 1RA-1
IL 1RA-2
IL 4RA-1
IL 4RA-2
IL 12-1
IL 12-2
γ IFN-1
γ IFN-2
TGFβ-1
TGFβ-2
TGFβ-3
TGFβ-4
TGFβ-5
TGFβ-6
TNFα-1
TNFα-2
IL 4 -2
IL 4 – 3
IL 4 – 4
IL 4 –5
IL 4 – 6
IL 4 – 7
IL 4 – 8
IL 6 – 1
IL 6 – 2
IL 6 – 3
IL 6 – 4
IL 10 – 1
IL 10 – 2
IL 10 – 3
IL 10 – 4
IL 10 – 5
IL 10 – 6
Testung von 20 SNP in 13 verschiedenen
Zytokingenen mittels des Verfahrens PCR-SSP.

Transplantationsmedizin und Immungenetik
signifikante Assoziation mit einem bestimmten Genotyp.
Für die Beschleunigung der Testung wurden Verfahren für die Typisierung der NOD/CARD bzw.
der Zytokingene basierend auf der Luminex-Technologie entwickelt. Diese wurden validiert und
mittels Sequenzanalyse überprüft, so dass nun diese Methoden zur Vervollständigung des
Projektes eingesetzt werden.
Summary
In this project the influence of non-HLA gene polymorphisms shall be correlated with the incidence for
GvH, relapse, and patient survival following stem cell transplantation from an unrelated donor. We
introduced methods based on the PCR-SSP principle for the detection of 20 SNPs in 13 different cytokine
genes, KIR as well as minor antigen polymorphisms. In addition, we developed in-house PCR-SSP
reagents for the detection of NOD/CARD SNPs. Over 200 patients have been typed for the cytokine genes
as well as the NOD/CARD genes so far. A first association study between type of leukaemia and cytokine
genotype has been performed. No significant correlation between underlying disease and genotype could
be found. In an additional methodological assay we developed a typing method for the detection of the
relevant cytokine as well as NOD/CARD SNPs based on the Luminex technology. These reagents have
been validated and will be used for the testing of the remaining 200 recipient and donor samples.
Quotient
3,000
2,500
2,000
1,500
1,000
0,500
TNFa -308A/G
0,000
0 10 20 30 40 50
Lfd Nr. der Probe
TNFa -308A/G
unterer Cut Off
oberer Cut Off
Bestimmung des TNFα-SNP -308A/G mittels Luminex bei 52 Proben. Jeder rote Punkt stellt das Ergebnis der
Hybridisierung des PCR-Produktes eines Probanden mit spezifischen Sonden dar. Hybridisierungssignale oberhalb
des oberen Cut off stellen Personen dar, die homozygot für die Variante -308 A sind. Signale unterhalb des unteren
Cut off entsprechen einer Homozygotie für den Wildtyp (-308 G). Die Signale im Mittelfeld stellen eine Heterozygotie
(-308 G/A) dar.
Standort Ulm
Arbeitsgruppe Transplantationsimmunologie
Projektleiter PD Dr. med. Joannis Mytilineos
Mitarbeiter Dipl. biol. Andrea Vigh, Dr. med. Kaimo Hirv, cand. med. Jens Putzbach,
cand. med. Kirsten Recker
Kooperationen Transplantationszentren: Ulm, Wiesbaden, Mainz, Berlin, Freiburg
Immunobiology Working Group innerhalb des CIBTR
Transplantationsimmunologische Abteilung, Universität Heidelberg
Förderung DRK-Blutspendedienst Baden-Württemberg - Hessen gGmbH
Laufzeit des Projektes 01.06.2004 - 31.06.2007
Weitere Informationen
• Merz A., Mytilineos J.: Zytokingenpolymorphismen bei Patienten mit AML, ALL und CML. 14. Jahrestagung der
Deutschen Gesellschaft für Immungenetik (DGI), Innsbruck, 12.-14.10.06 (Abstract No. P9)
• Merz A., Skambraks A., Schrezenmeier H., Mytilineos J.: A PCR-SSP method for NOD2/CARD15 gene 3 SNP
analysis. 39th Annual Congress of the German Society for Transfusion Medicine and Immunohematology (DGTI),
Frankfurt, 19-22 September 2006. Transfus. Med. Hemother. 33 (S1): 53 (Abstract P7.3) (2006)
• Putzbach J., Merz A., Schrezenmeier H., Mytilineos J.: Zytokin SNP-Diagnostik unter Verwendung der Luminex
"Flexmap Carboxy Bead"-Technologie. 14. Jahrestagung der Deutschen Gesellschaft für Immungenetik (DGI),
Innsbruck, 12.-14.10.06 (Abstract No P27)
118

Transplantationsmedizin und Immungenetik
Immunrekonstitution nach Blutstammzelltransplantation:
Entwicklung von Methoden und Untersuchungsstrategien für
HLA- und KIR-Differenzen im Rahmen der
Gewebeverträglichkeit bei Blutstammzelltransplantation
Hintergrund und Projektbeschreibung
Bei der Behandlung von bösartigen Erkrankungen des blutbildenden Systems (z.B. Leukämien)
hat die Transplantation von allogenen (=vom Fremdspender) hämatopoetischen
Blutstammzellen stark an Bedeutung gewonnen, zumal mittels moderner molekularbiologischer
Technik eine hohe Gewebeübereinstimmung zwischen Patient und Spender gewährleistet
werden kann.
Neben der Transplantation von Blutstammzellen von Spendern mit hoher Gewebeverträglichkeit
ist es gelungen, die haplo-identische (=halb-identische) Stammzelltransplantation, also die
Transplantation von Stammzellen, bei denen Empfänger und Spender nur in einem Haplotyp
der HLA-Gene übereinstimmen, klinisch zu etablieren. Es hierdurch möglich geworden, jedes
Kind, das einer Stammzelltransplantation bedarf, mit einem Spender zu versorgen
Ziel des Projektes ist die Bedeutung von HLA und KIR Differenzen für den klinischen Verlauf
nach Blutstammzelltransplantation zu erarbeiten. Schwerpunkte sind die Etablierung von
diagnostischen Methoden, die Festlegung des relevanten Untersuchungsumfanges sowie die
klinische Indikationsstellung.
119
A
Teil A: Hauteffluressenzen als Zeichen einer bestehenden Transplantat-gegen-Empfänger-Erkrankung (GVHD-Graft
versus host disease) anch Blutstammzelltransplantation. Teil B. Infiltration bösartiger, leukämischer Zellen im
Knochenmark.
Wichtigste Ergebnisse
Die klinischen und experimentellen Untersuchungen werden in zwei Teilprojekte gegliedert
durchgeführt. Das Teilprojekt 1 umfasst eine retrospektive und prospektive Untersuchung von
Erwachsenen Patienten mit malignen hämatologischen Erkrankungen nach BSZT.
Im Teilprojekt 2 werden Patienten nach HLA-kompatibler und partiell (haploidenter) HLAkompatibler
BSZT zur Behandlung kindlicher Leukämien und genetischer Erkrankungen
eingebunden.
Teilprojekt 1: NK-Zell-Matching/Mismatching im Rahmen der Blutstammzelltransplantation
Studienkollektive (1) Patienten nach allogener BSZT (Uniklinikum Frankfurt), (2) Patienten nach
allogener BSZT (externe Kliniken).
Teilprojekt 2: Untersuchung der Aktivität von Natürlichen Killer (NK-) Zellen gegen Leukämie-
und Tumorzellen nach Stammzelltransplantation bei Kindern: Interaktion von NK-Zellen und
Dendritischen Zellen zur Steigerung der Zytotoxizität.
Studienkollektiv: Pädiatrische Patienten nach BSZT (Uniklinikum Frankfurt)
B

Transplantationsmedizin und Immungenetik
Primäre klinische Endpunkte für die Beurteilung des klinischen Verlaufes sind: allgemeines
Überleben (OS - overall survival), krankheitsfreies Überleben (DSF-desease free survival),
therapieassoziierte Mortalität (TRM - transplant related mortality), akute und chronische
Transplantat-gegen-Empfänger-Erkrankung (GVHD-Graft versus host disease) und Rezidiv der
Grunderkrankung (relapse).
A B
KIR
HLA
C
Teil A: Strukturmodell der Interaktion zwischen HLA-Antigenen und KIR-Rezeptoren.
Teil B: Beispiele molekualrbiologsicher Untersuchungstechniken zur Bestimmung von KIR Merkmalen und HLA-
Antigenen mittels Genamplifikation und Sequenzierung.
Summary
The outcome of bone marrow transplantation depends on the histokompatibility between donor and
recipient. A major target to assess histocompatibility are human leukocyte antigens (HLA). Current
molecular techniques allow to establish and perform high resolution testing for histocompatibility.
In addition to peripheral stem cell and/or bone marrow transplantation from matched donors, therapeutic
protocols have been developed in order to transplant stem cells from HLA haploidentical donors.
The present project aims to identify, HLA and KIR differences that are relevant for the clinical outcome of
stem cell / marrow transplantation. The joint with partners from the University Hospital, Centre of Internal
medicine, Department of Hematology-Oncology and Pediatric Stem Cell transplantation focused on cellular
mechanisms and the development of diagnostic tools for a better pre-transplant testing and post-transplant
monitoring of patients.
Standort Frankfurt
Arbeitsgruppe Transplantationsimmunologie und Hämogenetik
Projektleiter Prof. Dr. med. Christian Seidl (Teilprojektleiter/Kooperationspartner)
Mitarbeiter Anja Graumnitz (cand. dent.), Dr. med. Veronika Brixner, Carmen Jung
(MTA), Anja Goodwin (MTA)
Kooperationen Zentrum für Innere Medizin, Medizinische Klinik III – Bereich Hämatologie
– Onkologie (Teilprojekt 1 - PD Dr. med. H. Martin) Zentrum für Kinder-
und Jugendmedizin – Klinik III, Schwerpunkt Hämatologie, Onkologie und
Stammzelltransplantation (Teilprojekt 2 – Dr. U. Köhl, Prof. Dr. P. Bader,
Prof. Dr. Th Klingebiel)
Förderung Hilfe für Krebskranke Kinder Frankfurt e.V.
DRK-Blutspendedienst Baden-Württemberg - Hessen gGmbH
Forschungsmittel der Universität Frankfurt am Main
Laufzeit des Projektes 01.01.2006 - 31.12.2008
120

Molekulare Pathophysiologie, Diagnostik und Therapie
121

Molekulare Pathophysiologie, Diagnostik und Therapie
4 Mollekullare Pathophysiiollogiie,, Diiagnostiik
und Therapiie
A C
B
RHCE gene
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
monoclonal reagents
monoclonal reagents
890T>C (Leu297Pro)
polyclonal reagents
Ce-L297P:
R(1)R2, (C)cD.E(e)
JAHK negative
122

Molekulare Pathophysiologie, Diagnostik und Therapie
Analyse und Genreparatur angeborener Immun- und
Hämatopoesedefekte I
Hintergrund und Projektbeschreibung
Zur Entwicklung neuer Genkorrekturansätze von angeborenen Lymphozyten- und
Erythrozytendefekte werden Genelemente aus sehr kurzen, modifizierten, in vitro
synthetisierten DNA-Strängen in Zell- und Tiermodellen eingesetzt, die es erlauben, auf
Einzelzellebene mit Fluoreszenzanalytik Reparatureffizienzen, und Reparaturexaktheit zu
testen, Korrekturmodalitäten zu entwickeln und Nebenwirkungen der Therapie zu beschreiben.
Bei der nukleotidgenauen Genreparatur ohne DNA-Bruch wird
ein kleines Gen-Fragment (hier orange dargestellt) an der Stelle
in das Genom eingebaut, an der sich die Mutation (M) befindet.
123
Wichtigste Ergebnisse
An Reporter-Zellinien ist in unseren
Arbeiten an ca. 4,5% der Zellen eine
nukleotidgenaue Reparatur eines
Multikopie-Genorts mit sehr kurzen (ca.
13-70 Nukleotide Länge) modifizierten,
einzelsträngigen Oligonukleotiden
möglich. Eine detaillierte molekulare
Untersuchung zeigte auf, dass das
Reparaturoligonukleotid, wenn es der
Zelle ohne Störungen der DNA
angeboten wird, im Reparaturprozess
nicht als Matritze benutzt wird, sondern
direkt in das zu verändernde Genom am
gewünschten Genort integriert wird.
Defekte an Einzelkopie-Genorten können
in unseren Modelllinien mit einer
Frequenz von ca. 0,5-1,0% korrigiert
werden. Dies setzt allerdings voraus,
dass in der unmittelbaren Nähe des zu
reparierenden DNA Abschnittes künstlich
ein spezifischer DNA Doppelstrangbruch
erzeugt wird. Unerwarteterweise wird in
dieser Variante der Genkorrektur das
Reparaturoligonukleotid nicht
physikalisch in die DNA inseriert,
sondern als Matritze für DNA
Polymerasen eingesetzt. Die
Genkorrektur nach Anbringen eines
gezielten, spezifischen DNA
Doppelstrangbruches mit
Designernukleasen ermöglicht nicht nur
die Reparatur von Punktmutationen,
sondern auch eine Reversion von
Insertionen und Deletionen.

Molekulare Pathophysiologie, Diagnostik und Therapie
Summary
To develop innovative therapeutic gene correction options for primary immuno- and
hematopoietic deficiencies, short modified synthetic oligonucleotides are used in cell and animal
models. These studies allow to test gene repair proficiency with a fluorescing single cell in vivo
reporter. The technology provides the basis to elucidate the biochemical pathways of the DNArepair,
to maximize the correction efficiency and to control for non-specific side effects.
Standort Ulm
Arbeitsgruppe Genreparatur an Modellsystemen
Projektleiter Dr. med. Klaus Schwarz
Mitarbeiter Dr. Frank Radecke, Ingrid Peter (TA), Sarah Radecke (TA)
Kooperationen Prof. Dr. Cathomen (Charité, Berlin)
Förderung DRK-Blutspendedienst Baden-Württemberg - Hessen gGmbH
Strukturelle Mittel der Universität Ulm
Laufzeit des Projektes 01.01.2004-andauernd
Weitere Informationen
• Radecke, F., Radecke, S. und Schwarz, K. Unmodified oligodioxynucleotides require single
strandedness to induce targeted repair of a chromosomal EGFP gene. Journal of Gene
Medicine, 6, 1257-1271, 2004.
• Radecke, S., Radecke, F., Peter, I. und Schwarz, K. Incorporation of single-stranded
correction oligonucleotides into the targeted chromosomal site. Journal of Gene Medicine.
8, 217-228, 2006.
• Radecke, F., Peter, I., Radecke, S., Gellhaus, K., Schwarz, K. und Cathomen, T. Targeted
chromosomal gene modification in human cells by single-stranded oligodeoxynucleotides in
the presence of a DNA double-strand break. Molecular Therapy,14, 798-808, 2006.
• Posterpreis der Deutschen Gesellschaft für Gentherapie (DG-GT) anlässlich der
Jahrestagung 2006
124

Molekulare Pathophysiologie, Diagnostik und Therapie
Analyse und Genreparatur angeborener Immun- und
Hämatopoesedefekte II
Hintergrund und Projektbeschreibung
Neben der routinemäßig durchgeführten molekularen Diagnostik der allermeisten primären
Lymphopoese- und mehrerer Hämatopoesedefekte (in einem ISO 9001 zertifizierten Labor und
unter DACH Akkreditierung) steht in Kooperation mit dem Universitätsklinikum Ulm (Pädiatrie,
Innere Medizin) und der Pädiatrie des Universitätsklinikums in Freiburg in besonderem
Interesse die molekulare und pathophysiologische Aufklärung bisher nicht charakterisierter
Entwicklungs- und Funktionsstörungen der lymphatischen und erythroiden Reihe. Ein
Schwerpunkt konzentriert sich auf die DNA Reparatur und DNA Stabilität bei der
Lymphozytendifferenzierung, beim Immunglobulinklassenwechsel und bei der Affinitätsreifung
von Immunglobulingenen im Keimzentrum der Lymphknoten.
Schema der Autoinhibition des DNA-Reparaturfaktors ARTEMIS. In Anwesenheit des Phosphatgruppen übertragenden
Enzyms DNA-PKcs und ATP wird ARTEMIS aktiviert und kann DNA bearbeiten.
Wichtigste Ergebnisse
Es konnten mehrer Immundefekte neu molekular beschrieben oder es konnte ein Beitrag zur
besseren Charakterisierung (Omenn Syndrom, Hermansky-Pudlack-Syndrom Typ II) bekannter
Defekte geleistet werden. So wurde gemeinsam mit Dr. Ehl (Freiburg) eine neue Entität des
schweren, kombinierten Immundefektes beschrieben. Dieser beruht auf Mutationen des
LigaseIV Gens, einem wichtigen Partner bei der Reparatur von DNA-Doppelstrangbrüchen.
Die Biochemie von ARTEMIS, eines weiteren DNA Reparaturfaktors, konnte vervollständigt
werden. Dominant aktive Mutanten wurden charakterisiert, die, wenn ihr autoinhibitorisches Cterminales
Ende entfernt wurde, einige ihrer Reparatureigenschaften unabhängig von der sie
aktivierenden Kinase ausüben.
Die molekulare Beschreibung der Mutationen einer Art der kongenitalen Erythrozytosen (CDAI)
(KooperationProf. Heimpel, Ulm), zeigt auf, dass mindestens ein hypomorphes CDNAI Allel bei
allen untersuchten Patient vorhanden ist. Dies lässt schlussfolgern, dass Nullmutanten letal sein
sollten. Die gleiche Studie zeigte auf, dass mehr als ein Gen in der Gruppe der CDAI
Erkrankten betroffen sein muss.
Summary
Besides the routine genetic analyses of a majority of primary immunodeficiencies and some
hematopoietic defects, the laboratory concentrates on the molecular and pathophysiological
elucidation of so far unsolved developmental and functional defects of lymphocytes and
125

Molekulare Pathophysiologie, Diagnostik und Therapie
erythrocytes. One focus in this respect is the influence of DNA-repair components on
lymphocyte differentiation, immunoglobulin class-switch and affinity maturation of antibodies.
Standort Ulm
Arbeitsgruppe Analyse molekularbiologischer Ursachen angeborener Immun- und
Hämatopoesedefekte
Projektleiter Dr. med. Klaus Schwarz
Mitarbeiter Dr. D. Niewolik; Dr. U. Pannicke; K. Heinrich (TA); M. Jans (TA); I.
Janz (TA); E.-M. Rump(TA); S. Braun (TA); T. Kersten (TA)
Kooperationen Dr. H. Cario (Universitätskinderklinik Ulm);
Dr. S. Ehl (Universitätskinderklinik Freiburg);
Prof. Dr. Lieber, USC (USA);
Prof. Dr. W. Friedrich (Universitätskinderklinik Ulm);
Prof. Dr. H. Heimpel (Ulm)
Förderung Deutsche José Carreras Leukämie-Stiftung e.V.
Else-Kröner-Fresenius-Stiftung
Strukturelle Mittel der Universität Ulm
Sander-Stiftung
Laufzeit des Projektes andauernd
Weitere Informationen
• Heimpel, H.*, Schwarz, K.*, Ebnöther, M., Goede, J., Kamp, T., Plaumann, L., Heydrich, D.,
Rath, B., Rößler , J., Schmid, M., Schildknecht, O., Wuillemin, W., Leichtle, R., Einsiedler,
B., Tamary, T. und Kohne, E. Congenital dyserythropoietic anemia type I (CDA I): Molecular
genetics, clinical appearance and prognosis based on long-term observation. Blood., 107,
334-340, 2006.*Ex aequo.
• Enders, A., Fisch, P., Schwarz, K., Duffner, U., Pannicke, U., Nikolopoulos, E., Peters, A.,
Orlowska-Volk, M., Schindler, D., Friedrich, W., Selle, B., Niemeyer, C. und Ehl, S.
Lymphocyte development and immune response to infection in patients with deficiency in
ligase IV. J. Immunol. 176, 5060-5068, 2006.
• Niewolik, D., Pannicke, U., Lu, H., Ma, Y, Wang, L.-C.V., Kulesza, P., Zandi. E., Lieber,
M.R. und Schwarz, K. DNA-PKcs dependence of ARTEMIS endonucleolytic activity:
Differences between hairpins and 5' or 3' overhangs. J. Biol Chem., 281, 33900-33909,
2006.
126

Molekulare Pathophysiologie, Diagnostik und Therapie
Diagnostik und Therapie der PNH
Hintergrund und Projektbeschreibung
Die paroxysmale nächtliche Hämoglobinurie (PNH) ist eine Erkrankung mit einem erworbenen
oligoklonalen Stammzelldefekt der Blutbildung. Sie manifestiert sich durch eine corpuskuläre
hämolytische Anämie, eine thrombophile Diathese und hämopoetische Insuffizienz. Die
Prognose der Erkrankung ist mit Überlebenswahrscheinlichkeiten zwischen 50 und 60 % 15
Jahre nach Diagnose sehr ungünstig.
Die Therapieoptionen bestanden bisher vor allem in Transfusionstherapie, Antikoagulation und
allogener Stammzelltransplantation. In diesem Projekt wurden neue Therapieoptionen evaluiert.
127
Lactate Dehydrogenase Level (IU/liter)
3000
2500
2000
1500
1000
500
0
No. of Patients
Placebo 44
Eculizumab 43
PNH PNH Type Type III III Erythrocytes Erythrocytes (%)
60
50
40
30
20
No. of Patients
Placebo 44
Eculizumab 43
Placebo
Eculizumab
P

Molekulare Pathophysiologie, Diagnostik und Therapie
Wichtigste Ergebnisse
Die Arbeitsgruppe beteiligte sich an drei internationalen Multicenterstudien zur Therapie der
PNH:
TRIUMPH: “A Hemoglobin Stabilization and Transfusion Reduction Efficacy and Safety Clinical
Investigation, Randomized, Multi-center, Double-Blind, Placebo-Controlled, Using Eculizumab in
Paroxysmal Nocturnal Hemoglobinuria Patients”
Diese Studie zeigte, dass der monoklonale Antikörper Eculizumab, der gezielt den
Komplementfaktor C5 hemmt, zu einer signifikanten Reduktion der Hämolyse, einer
Stabilisierung des Hämoglobins, Reduktion des Transfusionsbedarfs und signifikanter
Verbesserung der Lebensqualität führt.
SHEPHERD: “Safety in Hemolytic PNH Patients treated with Eculizumab: A Multi-center Open-
Label Research Design Study”
Diese Studie zeigte für den monoklonalen Antikörper Eculizumab die Verträglichkeit in der
Langzeitanwendung bis zu 52 Wochen und eine kontinuierliche Unterdrückung der intravasalen
Hämolyse mit Erhöhung der endogenen Erythrozytenmasse, erhöhten Hämoglobinspiegeln und
Verminderung des Transfusionsbedarf in der 52-Wochen-Langzeittherapie.
EXTENSION-Studie: “A Phase III, Open-Label, Extension Study of Eculizumab in Patients with
Transfusion Dependent, Hemolytic Paroxysmal Nocturnal Hemoglobinuria (PNH) who have
participated in the TRIUMPH, SHEPHERD or X03-001 Studies”
Derzeit noch laufende Studie.
Summary
The working group participated in three international multi-center trials for treatment of PNH:
TRIUMPH: This study demonstrated that the monoclonal antibody Eculizumab with inhibits
complement factor C5 leads to a significant reduction of haemolysis, stabilization of
haemoglobin and reduce transfusion need as well as significant improvement of quality of life
scores.
SHEPHERD: This study evaluated the long time safety and efficacy of Eculizumab over a period
52 weeks. It confirms results of the TRIUMPH trial also for this prolonged period of treatment.
EXTENSION: Still ongoing
Standort Ulm
Arbeitsgruppe Pathophysiologie, Diagnostik und Therapie der PNH und
hämatopoetischer Insuffizienz
Projektleiter Prof. Dr. H. Schrezenmeier
Mitarbeiter Dr. med. B. Höchsmann, Dr. med. S. Körper
Kooperationen Prof. P. Hillmen (Leeds)
Förderung Alexion Pharmaceuticals; International PNH Registry
Laufzeit des Projektes 2004 - andauernd
Weitere Informationen
• Hillmen P., Young N.S., Schubert J., Brodsky R.A., Socié G., Muus P., Röth A., Szer J.,
Elebute M.O., Nakamura R., Browne P., Risitano A.M., Hill A., Schrezenmeier H., Fu C.-L.,
Maciejewski J., Rollins S.A., Mojcik C.F., Rother R.P., Luzzatto L.: The complement inhibitor
eculizumab in paroxysmal nocturnal hemoglobinuria. N. Engl. J. Med. 355: 1233-1243
(2006)
• Schrezenmeier H., Höchsmann B., Körper S., Schubert J.: Aktuelles zur Diagnostik und
Therapie der paroxysmalen nächtlichen Hämoglobinurie. Hämotherapie 8: 17-26 (2006)
128

Molekulare Pathophysiologie, Diagnostik und Therapie
Stammzelltransplantation bei aplastischer Anämie und
paroxysmaler nächtlicher Hämoglobinurie
Hintergrund und Projektbeschreibung
In diesem Projekt sollten insbesondere folgende Fragen untersucht werden:
- Bedeutung der Stammzellquelle (periphere Blutstammzellen versus Knochenmark) für die
Ergebnisse bei allogener Transplantation zur Behandlung der aplastischen Anämie
- Ergebnisse der allogenen Stammzelltransplantation bei aplastischer Anämie: Entwicklung
im Verlauf und Vergleich mit anderen Therapiemodalitäten
- Bedeutung der geschlechtsspezifischen Spenderauswahl für die Ergebnisse der allogenen
Transplantation bei aplastischer Anämie
Gesamtüberleben nach allogener HLA-identer Geschwisterspendertransplantation (1995 – 2003) bei Patienten mit
erworbener aplastischer Anämie stratifiziert nach Alter und Stammzelllquelle (Quelle: aktuelles Manuskript;
Schrezenmeier et al, eingereicht)
Wichtigste Ergebnisse
1. Stammzellquelle und Transplantation bei aplastischer Anämie: Diese gemeinsam mit der
EBMT Aplastic Anemia Working Party und dem Centre for International Blood and Marrow
Transplant Research (CIBMTR) durchgeführte Untersuchung zeigte, dass bei jungen
Patienten (≤ 20 Jahre) mit peripheren Blutstammzellen eine höhere Rate chronischer GvHD
und erhöhte Mortalität besteht (5 Jahre Überlebenswahrscheinlichkeit 73 % bzw. 85 % nach
Blutstammzell- bzw. Knochenmarktransplantation)
2. Entwicklung der Ergebnisse nach allogener Transplantation: Die Längsschnittuntersuchung
zeigte, dass sich die Ergebnisse nach allogener Transplantation sowohl von verwandten als
auch unverwandten Stammzellspendern deutlich verbessert hatten. Wesentliche
prognostische Faktoren waren junges Alter, Transplantation nach 1996, Transplantation
von einem HLA-identen Geschwisterspender und ein kurzes Intervall zwischen Diagnose
und Transplantation.
3. Geschlechtsspezifische Spenderauswahl bei allogener Transplantation bei aplastischer
Anämie: Im Vergleich zu geschlechtsidenten Spender-/ Empfängerkonstellationen hatten
weibliche Patientinnen, welche ein Transplantat von einem männlichen Spender erhielten,
ein signifikant erhöhtes Risiko für eine Transplantatabstoßung und ein signifikant
schlechteres Überleben. Eine Subgruppenanalyse zeigte, dass diese Verschlechterung nur
bei Konditionierungsregimen ohne ATG feststellbar war. Männliche Empfänger eines
Transplantates einer Spenderin hatten ein erhöhtes Risiko einer schweren GvHD.
129

Molekulare Pathophysiologie, Diagnostik und Therapie
Insgesamt sind diese Ergebnisse für optimierte Auswahl von Spender, Stammzellquelle und
Konditionierungsregime relevant.
Summary
Major results of the recent projects in this field:
1. This joint study of the EBMT aplastic anemia working party and the CIBMTR demonstrated
worse outcome and more chronic GvHD with peripheral blood progenitor cells than bone
marrow in HLA-matched sibling donor transplants for young patients (≤ 20 years) with
severe aplastic anemia.
2. This study demonstrated improved outcome with time after both matched sibling donor and
alternative donor stem cell transplantation. In multivariate analysis favourable predictors
were younger age, transplant beyond 1996, matched sibling donor transplant, short time
between diagnosis and transplant and no irradiation in the conditioning regimen.
This study demonstrated that female patients with male donors had a decreased survival and an
increased risk of rejection compared to recipients of sex-matched grafts. In a subgroup analysis,
the negative effects of donor/recipients sex-mismatching appeared confined to patients
receiving conditioning regimen not containing antithymocyte globulin.
Standort Ulm
Arbeitsgruppe Pathophysiologie, Diagnostik und Therapie der PNH und
hämatopoetischer Insuffizienz
Projektleiter Prof. Dr. H. Schrezenmeier
Mitarbeiter Dr. med. B. Höchsmann, Dr. med. S. Körper
Kooperationen Prof. Dr. J. Passweg (Genf) und weitere Mitglieder der EBMT
Working Party Aplastic Anemia
Prof. J. Marsh (London), Dr. Mary Eapen (Milwaukee) und weitere
Mitarbeiter in der Aplastic Anemia Working Group der CIBMTR
Förderung EBMT
Laufzeit des Projektes seit 2003; aktuelle Studie zur Stammzelltransplantation bei PNH
andauernd.
Weitere Informationen
• Locasciulli A., Oneto R., Bacigalupo A., Socie G., Korthof E., Bekassy A., Schrezenmeier
H., Passweg J., Führer M.; Servere aplastic anemia working party of the European Blood
and Marrow Transplant Group: Outcome of patients with acquired aplastic anemia given
first line bone marrow transplantation or immunosuppressive treatment in the last decade: a
report from the European Group for Blood and Marrow Transplantation (EBMT).
Haematologica 92: 11-18 (2007).
• Passweg J.R., Pérez W.S., Eapen M., Camitta B.M., Gluckman E., Hinterberger W., Hows
J.M., Marsh J.C.W., Pasquini R., Schrezenmeier H., Socié G., Zhang M.-J., Bredeson C.:
Bone marrow transplants from mismatched related and unrelated donors for severe aplastic
anemia. Bone Marrow Transplantation 37: 641-649 (2006)
• Socié G., Mary J.-Y., Schrezenmeier H., Marsh J., Bacigalupo A., Locasciulli A., Tichelli A.,
Passweg J.: Granulocyte-stimulating factor and severe aplastic anemia. A survey by the
European Group for Blood and Marrow Transplantation (EBMT). Blood (2006, Nov 16; Epub
ahead of print)
• Stern M., Passweg J.R., Locasciulli A., Socie G., Schrezenmeier H., Bekassy A.N., Fuehrer
M., Hows J., Korthof E.T., McCann S., Tichelli A., Zoumbos N.C., Marsh J.C., Bacigalupo
A., Gratwohl A., fort he Aplastic Anemia Working Party of the European Group for Blood
and Marrow Transplantation: Influence of donor/recipient sex matching on outcome of
allogeneic hematopoietic stem cell transplantation for aplastic anemia. Transplantation 82:
218-226 (2006)
130

Molekulare Pathophysiologie, Diagnostik und Therapie
BloodGen: Blutgruppen-Bestimmung und Genotypisierung
Hintergrund und Projektbeschreibung
Ziel des BloodGen-Konsortium ist es, den Gebrauch von molekulargenetischen Methoden zur
Blutgruppen-Untersuchung zu etablieren. Der Genotyp einer großen Kohorte von Individuen
aus verschiedenen Regionen der EU soll bestimmt werden, um die Verlässlichkeit der neuen
Methode und deren Überlegenheit gegenüber den üblichen serologischen Verfahren zu
belegen. Im Projekt wurde die Biochip-Technologie zum Nachweis von Einzel-Nukleotid-
Polymorphismen eingesetzt und ein Bloodchip entwickelt, der die Untersuchung einer großen
Zahl von Blutgruppen-Allelen und einen großen Durchsatz ermöglicht.
MAPH Multiplex PCR zur Blutgruppen-spezifischen Amplifikation. PCR Amplifikate von 2 Bloodchip MPX PCR-
Ansätzen sind dargestellt: a) AB0 und RHD MPX PCR (15 Fragmente) und b) MPX PCR für GYPA und GYPB (MNS);
RHCE, DO, KEL, CO, JK, DI, FY Blutgruppen-kodierende Gene (20 Fragmente). RHD positive und negative
genomische DNA Proben wurden amplifiziert mit beiden MPX PCR-Ansätzen und die Produkte wurden in 4% - 20%
Polyacrylamid-Gele getrennt.
Wichtigste Ergebnisse
Die Anwendbarkeit des Bloodchip wurde in einer Reihe kleinerer klinischer Untersuchungen
etabliert. Die Mitglieder des BloodGen-Konsortiums führen zur Zeit eine große klinische Studie
durch, in der der Bloodchip an 3.000 AB0-, Rhesus CcDEe- und K-typisierten Blutspender- und
Patientenproben zum Zweck einer CE-Zertifizierung getestet wird. Das Ziel ist der Einsatz
dieser Technologie in einer Reihe von EU-Mitgliedsstaaten um anfangs Risiko-
Patientengruppen und eine relevanten Teil der Blutspender zu untersuchen, bei denen die
Blutgruppen-Genotypisierung den größten Nutzen aufweist.
Summary
The efficacy of Bloodchip has been determined by a series of small-scale clinical trials.
Members of the consortium are currently engaged in a large clinical trial where Bloodchip is
being used on a panel of 3,000 ABO, Rhesus CcDEe and K-typed individuals for CE marking
purposes. The goal is to implement the technology in several EU countries initially at least to
target at-risk patient groups and a relevant fraction of blood donors where blood group
genotyping will have the most impact.
131

Molekulare Pathophysiologie, Diagnostik und Therapie
Bloodchip Objektträger hybridisiert mit MPX-Produkten von a) D positiven und b) D negativen Genomen. RHD
positive und negative genomische DNA-Proben wurden amplifiziert mit beiden MPX PCR-Ansätzen, fragmentiert,
gefärbt und auf einem Bloodchip hybridisiert. Die Abbidlungen zeigen die “Mikroarray“-Objektträger nach Auswertung
mit einem Axon-Scanner und Computer-unterstützter Auswertung mit dem GenePixPro6-Programm.
Standort Ulm
Arbeitsgruppe Molekulare Diagnostik erythrozytärer Antigene
Projektleiter Prof. Dr. med. Willy A. Flegel
Mitarbeiter Dr. med Ingeborg von Zabern (Fachärztin für Transfusionsmedizin,
wissenschaftliche Mitarbeiterin)
Dr. med. Qing Chen (Doktorandin, wissenschaftliche Mitarbeiterin)
Anita Hacker (MTA)
Kooperationen Neil D. Avent, Universität West of England, Bristol, England
Masja de Haas, Ellen van der Schoot, Sanquin, Amsterdam, Niederlande
Marion Scott, Geoff Daniels, Bristol Institute for Transfusion Sciences, Bristol,
England
Jill Storry, Martin Olsson, Universität Lund, Schweden
Nurio Nogues, Rosa Estaban, Banc de Sang i Teixits, Barcelona, Spanien
Martin Pisacka, Institute Hematology and Blood Transfusion, Prag, Tschechische
Republik
Antonio Martinez, Progenika, Derio, Spanien
Förderung DRK-Blutspendedienst Baden-Württemberg - Hessen gGmbH
Laufzeit des Projektes 01.01.2006 - 31.12.2006
Weitere Informationen
• Avent, N.D., Martinez, A., Flegel, W. A., Olsson, M. L., Scott, M. L., Nogues, N., Pisacka, M., Daniels,
G. L., Muniz-Diaz, E., Madgett, T. E., Beiboer, S., Cheroutre, G., von Zabern, I., Hacker, A., Jimenez,
E., Tejedor, D., Lopez, M., Storry, J. R., Camacho, E., Svobodova, I., de Haas, M. The BloodGen
project: toward mass scale comprehensive genotyping of blood donors in the European Union and
beyond. Transfusion 2007
• Internetseite des BloodGen-Projektes: http://www.bloodgen.com/
• Internetseite eines Symposiums: http://www.uni-ulm.de/~wflegel/RH/SympDGTI2004/
132

Molekulare Pathophysiologie, Diagnostik und Therapie
Aufklärung des Polymorphismus im Rhesus-
Blutgruppensystem
Hintergrund und Projektbeschreibung
Ziel dieses langfristigen Projektes ist die Aufklärung von Polymorphismen des RHD-Genorts zur
Verbesserung der D-Typisierung in unterschiedlichen Populationen. Rhesus ist das
komplexeste aller bekannten Blutgruppensysteme. Die Kenntnis der in diesem System
auftretenden Allele und ihrer serologischen Phänotypen ist für die Abschätzung eines
Immunisierungsrisikos klinisch bedeutsam und Voraussetzung für eine rationale und
kostengünstige Typisierungsstrategie in der immunhämatologischen Routine. Da jede
Blutgruppenbestimmung auch mit der Bestimmung des Rhesus-Antigens D einhergeht, ist die
Charakterisierung der existierenden Allele von großer praktischer Bedeutung.
Modell der Rhesus-Proteine in der Erythrozytenmembran. Beide Rhesus-Proteine weisen 417 Aminosäuren auf, die
durch Kreise symbolisiert sind. Den reifen Proteinen in der Membran fehlt die erste Aminosäure. Eingezeichnet sind in
gelb die Aminosäureaustausche zwischen dem RhD- und dem RhCE-Protein, wobei die 4 für Antigen-C-relevante
Aminosäurepositionen in grün und die eine für Antigen E in schwarz markiert sind. In blau sind alle bekannten einzelnen
Aminosäureaustausche für die partial-D-Allele und in rot für die weak-D-Allele gekennzeichnet, unter denen in hellblau
und orange die von der Arbeitsgruppe in Ulm identifizierten Mutationen markiert sind.
Wichtigste Ergebnisse
In Kooperationen mit Kollegen in Philadelphia, Houston, Seoul, Barcelona, Bern, Tibet und in
deutschen Blutspende-Instituten wurde allein 2006 die klinische Relevanz von insgesamt 11
neuen Rhesus D-Varianten veröffentlicht. Die molekulare Basis des seit 1980 ungeklärten
Crawford-Antigens wurde nachgewiesen. Ein Testkit wurde vorgestellt für ein ursprünglich in
Ulm beobachtetes „DEL“-Antigen, das klinisch wichtig und international beachtet ist, weil es
jeder dritte D negative Blutspender in Ostasien trägt.
Summary
In cooperation with colleagues in Philadelphia, Houston, Seoul, Barcelona, Bern, Tibet and in
German Blood donor services the clinical relevance of 11 novel D variants was determined in
2006 alone. The molecular basis of the Crawford antigen was established, which had remained
unresolved since 1980. A test kit was presented for an DEL antigen that had originally been
observed in Ulm. It is clinically important and internationally recognized, because about 1 in 3 D
negative East Asian blood donor carry this DEL phenotype.
133

Molekulare Pathophysiologie, Diagnostik und Therapie
Standort Ulm
Arbeitsgruppe Molekulare Diagnostik erythrozytärer Antigene
Projektleiter Prof. Dr. med. Willy A. Flegel
Mitarbeiter Dr. med. Ingeborg von Zabern
Marianne Lotsch, Anita Hacker, Hedwig Teubl
Kooperationen Dr. Franz F. Wagner, NSTOB Blutspendedienst, Springe
Dr. Andrea Döscher, Dr. Eduard Petereshofen, NSTOB
Blutspendedienst, Oldenburg
Dr. Behrouz Mansouri Taleghani, Hein Hustinx, SRK
Blutspendedienst Bern, Schweiz
Qing Wei, Tongji Universität, Wuhan, China
Connie M. Westhoff, University of Pennsylvania, Philadelphia, USA
Marilyn K. Moulds, ImmucorGamma, Houston, USA
Duck Cho, Dong Wook Ryang, Chonnam National University,
Gwangju, Südkorea
Nurio Nogues, Rosa Estaban, Banc de Sang i Teixits, Barcelona,
Spanien
Gregory A. Denomme, University of Toronto, Kanada
Neil D. Avent, Universität West of England, Bristol, England
Förderung Stiftung der DGTI, DFTI/fle/2003-01
DRK-Blutspendedienst Baden-Württemberg - Hessen gGmbH
Laufzeit des Projektes 01.01.2002 – 31.12.2007
Weitere Informationen
• Flegel, W. A.: Molecular genetics of RH and its clinical application. Transfus. Clin. Biol.
13(2006)4-12
• Flegel, W.A., Eicher, N.I., Doescher, A., Hustinx, H., Gowland, P.L., Mansouri Taleghani, B.,
Petershofen, E.K., Bauerfeind, U., Ernst, M., von Zabern, I., Schrezenmeier, H., Wagner,
F.F.: In-frame triplet deletions in RHD alter the D antigen phenotype. Transfusion
46(2006)2156–2161
• Internetseite: http://www.uni-ulm.de/~wflegel/RH/
134

Molekulare Pathophysiologie, Diagnostik und Therapie
Identifizierung und Aufklärung der klinischen Relevanz von
RhCcEe-Varianten
Hintergrund und Projektbeschreibung
Es sind mehr als 100 RHD-Allele bekannt, die schwache oder partiale RhD-Antigene
exprimieren. In den letzten Jahren wurden auch einige neue RHCE-Allele beschrieben, die
abgeschwächte RhCcEe Antigene zeigen. Die molekularen Grundlagen, die Häufigkeit und die
klinische Relevanz dieser serologischen Varianten sind bisher wenig bekannt. Die Komplexität
der serologischen Befunde kann am Beispiel von Rh53 demonstriert werden, wo eine
Punktmutation im RHCE-Gen zum Entstehen des JAHK-Antigens und zu extrem schwachen
RhC- und Rhe-Antigenen führt, jedoch das RhG-Antigen im Ce-Haplotyp nicht in der Expression
beeinflusst. Ziel dieses Projekts ist zunächst die systematische Analyse des RHCE-Gens bei
Individuen, die eine Abschwächung eines oder mehrere RhCcEe-Merkmale aufweisen. Um die
klinische Relevanz der RhCcEe-Varianten zu klären, werden seit einigen Monaten in den
Instituten Baden-Baden, Mannheim, Ulm und Frankfurt Blutproben von immunisierten Patienten
und Blutspendern eingefroren, die zum späteren Zeitpunkt gegen RhCcEe-Variant-Testzellen
angesetzt werden. Auf diese Weise soll geprüft werden, ob die beschriebenen RhCcEe-
Varianten auch mit neuen Rh-Antigenen vergesellschaftet sind.
135
RHCE gene
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
monoclonal reagents
monoclonal reagents
890T>C (Leu297Pro)
polyclonal reagents
Ce-L297P:
R(1)R2, (C)cD.E(e)
JAHK negative
Serologische Eigenschaften und molekularbiologische Grundlage der RhCcEe Variante Ce-
L297P
Wichtigste Ergebnisse
Mehrere im Institut Baden-Baden serologisch identifizierte RhCcEc-Varianten wurden am
Institut Mannheim sequenziert. Dabei wurden über 10 neue RHCE-Allele identifiziert, bei denen
Mutationen in Exonen 3, 5 und 6 des RHCE-Gens identifiziert wurden. Proben von weiteren
serologischen RhCcEe-Varianten, die auch aus anderen Labors (Bern/Schweiz, Bristol/UK,
Warschau/Polen) stammen, werden noch untersucht. Nach den bisherigen Ergebnissen kann
davon ausgegangen werden, dass die molekulare Grundlage der abgeschwächten RhCcEe-
Antigene heterogen ist und selbst bei ähnlichem Phänotyp auf unterschiedliche
Punktmutationen des RHCE-Gens zurückzuführen ist.

Molekulare Pathophysiologie, Diagnostik und Therapie
Allele Phenotype Proposed
Haplotype
Nucleotide
Change
Exon Amino Acid
Substitution
Ce-S122P D+C±c+E+e± Ce 364T>C 3 S122P
cE-R201T D+C-c+E±e+ cE 602G>C 4 R201T
ce-W217R D+C+c+E+e± ce 649T>C 5 W217R
CE-T241I D+C±c+E±e+ CE 722C>T 5 T241I
Ce-M267K D+C±c+E-e+ Ce 744T>C
800T>A
5 no
substitution
M267K
Ce-L297P D+C±c+E+e± Ce 890T>C 6 L297P
Ce-Inr3-TG D+C±c+E+e± Ce (-5T>G) Intron 3 —
Serologische Eigenschaften und molekularbiologische Grundlage von 7 verschiedenen RhCcEe Varianten
Summary
There are more than 100 known RHD alleles expressing weak and partial RhD antigens. In the
last few years several new RHCE alleles have also been described showing weakened RhCcEe
antigens. The complexity of the serological findings can be illustrated by Rh53 where a single
point mutation in the RHCE gene creates the JAHK antigen and leads to a very weak RhC and
e but a normal G antigen expression in a Ce haplotype. The molecular analysis of several
RhCcEe variants showed that single point mutations in exons 3, 4, 5 and 6 in the RHCE gene
are usually the molecular background of new RhCe, cE and CE variant alleles expressing
aberrant RhC, E and e antigens. In one additional Ce variant surprisingly only a single point
mutation in intron 3 (close to exon 4) could be found which probably affects the splicing of the
gene transcript. It is still unknown, if the new alleles are associated with new Rh antigens and
can lead to alloimunisation. The aim of this project is the systematic analysis of serological and
molecular tests of new RhCcEe variants. Blood samples of immunized patients and blood
donors are collected in the Institutes of Baden-Baden, Mannheim, Ulm, Frankfurt and some
other laboratories (Bern/Switzerland, Bristol/UK and Warsaw/Poland). In future these samples
will be cross matched with the collected RhCcEe variant test cells to determine, if the RhCcEe
variants create new Rh antigens.
Standort Mannheim, Baden-Baden, Ulm, Frankfurt
Arbeitsgruppe Sicherheit der Hämotherapie
Projektleiter PD Dr. rer. nat. Peter Bugert
Mitarbeiter Dr. Erwin Andreas Scharberg, Prof. Dr. Willi Flegel, Dr. Karin
Janetzko, Andrea Kasprzik-Diehl, Dr. Susanne Seyboth, Gabi Rink
(MTA), Stefanie Penz (MTA), Kathrin Panter (MTA)
Kooperationen Prof. Dr. G. Daniels, Bristol, UK; Dr. H. Hustinx, Bern; Dr. B.
Michalewska, Warschau, Polen
Förderung DRK-Blutspendedienst Baden-Württemberg - Hessen gGmbH
Laufzeit des Projektes 01.01.2005 - 31.12.2008
Weitere Informationen
• Scharberg EA, Green C, Daniels G, Richter E, Klüter H, Bugert P. Molecular basis of the
JAHK (RH53) antigen. Transfusion 45; 1314-1318 (2005).
136

Molekulare Pathophysiologie, Diagnostik und Therapie
Molekulare Grundlagen abgeschwächter Antigeneigenschaften
im ABO und RhCE System
Hintergrund und Projektbeschreibung
Sowohl im ABO-Blutgruppensystem als auch bei den Rh-Untergruppen sind abgeschwächte
Antigeneigenschaften zu beobachten. Diese Merkmale können in der Routinediagnostik zu
problematischen bzw. uneindeutigen Ergebnissen führen. Ob die abgeschwächten Merkmale
von klinischer Relevanz sind, ist derzeit nicht eindeutig zu beantworten. Ziel des Projekts ist die
molekulare Analyse der ABO- bzw. RhCE Gene bei Individuen (Patienten oder Blutspender) mit
abgeschwächten Antigeneigenschaften. Polymorphismen im ABO Gen können zu
abgeschwächter Antigenausprägung führen und sind in der Literatur schon häufig beschrieben.
Dennoch fehlt eine eindeutige Phänotyp-Genotyp-Korrelation, vermutlich wegen der großen
phänotypischen Heterogenität. Im Rahmen dieses Projekts könnten neue Erkenntnisse zur
Phänotyp-Genotyp-Korrelation gewonnen werden. Insgesamt könnten durch die Ergebnisse
aus diesem Projekt die Diagnostik solcher Proben verbessert werden und eine Bewertung der
klinischen Relevanz möglich werden.
Reaktions-Nr.
137
PCR-Produkt
(bp)
1 1473 261G
646A
2 1548 261G
721T
3 221
292
324
ABO-Mutation*
592T
502G
488T
4 264 829A
1059del
5 246
317
6** 191
224
7** 127
152
871A
798insG
927A
893T
1009G
965G
8** 171 1054T
1054G
Allel-
Sepzifität
Ax01
Ax-4
Ax-5
Ax08
B302
Aw04
Aw11
Aw07
Aw06
Aw08
Phänotyp
Aweak
Aweak
Aweak
Aweak
B3
Aweak
Aweak
Aweak
Aweak
0
A302 A3
A301
Bx01
Ael101
O302
O301
A206
Ax
Aw01
Aw05
A202
A203
B301
A3
Bweak
Ael
0
A2
Aweak
Aweak
Aweak
Eigenschaften und Allelspezifitäten der multiplex PCR-SSP zur ABO-Subtypisierung
*in den Reaktionen 1, 2 und 4 sind sowohl die Forward- (261G bzw. 829A) als auch die
Reverse-Primer (646A, 721T bzw. 1059del) allelspezifisch; **die Reaktionen 6-8 sind bislang
nur anhand entsprechender non-Reaktionen validiert. Kontroll-DNAs stehen zur Zeit noch nicht
zur Verfügung.
A2
A2
B3

Molekulare Pathophysiologie, Diagnostik und Therapie
Wichtigste Ergebnisse
Einige ABO Genvarianten konnten bereits häufiger beobachtet werden, sodass hier bereits eine
Aussage zur Phänotyp-Genotyp-Korrelation möglich ist. Andere Mutationen im ABO Gen sind
bislang Einzelbeobachtungen. Insgesamt konnte für die verbesserte Diagnostik der ABO-
Varianten ein multiplex PCR-SSP Verfahren etabliert werden, das die meisten der bislang
beschreibenen ABO-Allele erfasst (Tabelle 1). Im Zusammenhang mit diesem Projekt konnte
ebenfalls die molekulare Grundlage des Rh53 Phänotyps (Mutation 365C>T im RhCE Exon 3)
aufgeklärt werden. Weitere Sequenzanalysen des RhCE Gens bei Individuen mit
abgeschwächten CE-Merkmalen führten zur Identifizierung von bislang über 10 verschiedenen
Proteinvarianten.
Summary
A diminished expression of antigens of the ABO and RhCE systems can be observed in patients
as well as healthy blood donors. Variants of the corresponding genes may represent the
molecular basis of such phenotypes. Especially for the ABO gene a number of variants have
been described but a phenotype-genotype-correlation remains unclear. Only a few RhCE
variants with deminished antigen expression have been described so far. In this project we
focus on the molecular characterization of the ABO or RhCE genes in individuals with
deminished antigen expression. We could already identify a number of ABO variants which
seem to occur at higher frequency (more than single cases). For the rapid detection of most
ABO variants we established a multiplex PCR-SSP system. RhCE sequencing revealed already
more than 10 different variants with different phenotypes. The knowledge of such variants is of
diagnostic importance, but the clinical relevance of the weak antigens remains unclear
Standort Mannheim
Arbeitsgruppe Sicherheit der Hämotherapie
Projektleiter PD Dr. rer. nat. Peter Bugert
Mitarbeiter Andrea Kasprzik-Diehl, Gabi Rink (MTA)
Kooperationen Prof. Dr. G. Daniels, Bristol, UK; Dr. H. Hustinx, Bern; Prof. Dr.
W.A. Flegel, Ulm; Dr. E.A. Scharberg, Baden-Baden
Förderung DRK-Blutspendedienst Baden-Württemberg - Hessen gGmbH
Laufzeit des Projektes 01.01.2005 - 31.12.2008
Weitere Informationen
• Scharberg EA, Green C, Daniels G, Richter E, Klüter H, Bugert P. Molecular basis of the
JAHK (RH53) antigen. Transfusion 45; 1314-1318 (2005).
138

Molekulare Pathophysiologie, Diagnostik und Therapie
Charakterisierung der molekularen Grundlagen des Aspirin-like
Defekts bei pädiatrischen Patienten und deren Familien
Hintergrund und Projektbeschreibung
Ziel dieses Forschungsprojektes, ist die Charakterisierung molekularer Grundlagen des Aspirinlike
Defekts (ALD) bei pädiatrischen Patienten und deren Familien. Der ALD, eine seltene
Thrombozytopathie, ist gekennzeichnet durch eine gestörte Thrombozytenfunktion und wird
bislang aufgrund einer bestehenden Blutungsneigung sowie laborchemischer Auffälligkeiten,
insbesondere einer gestörten Thrombozytenaggregation auf bestimmte Induktoren,
diagnostiziert. Der noch weitgehend ungeklärte Pathomechanismus dieser heterogenen und
häufig erblichen Thrombozytenfunktionsstörung wurde in nur wenigen publizierten Fallstudien
über die Aggregationsprofile hinaus untersucht. Der zugrundeliegende Defekt wird im Bereich
des thrombozytären Arachidonsäure-Stoffwechsels vermutet, wodurch die resultierende
Störung beim ALD der aggregationshemmenden Wirkung von Acetylsalicylsäure ähnelt. Der
Pathomechanismus beim ALD wirft eine Reihe von Fragen auf, die durch eine systematische
Untersuchung eines gut charakterisierten Patientenkollektivs geklärt werden können. In der
hämostaseologischen Ambulanz der Universitätskinderklinik Dresden werden seit Jahren solche
Familien betreut. In Kooperation mit der Kinderklinik Dresden konnten bereits methodische
Grundlagen für das Projekt erarbeitet werden. In diesem Projekt werden im Detail folgende
Aspekte bearbeitet: 1. Analyse der Gene des Arachidonsäure-Stoffwechsels (DNA-Ebene), 2.
Analyse des Thrombozyten-Transkriptoms (RNA-Ebene), 3. Analyse des Thrombozyten-
Proteoms (Protein-Ebene), 4. Analyse bestimmter Enzymaktivitäten (Funktions-Ebene). Bei
allen Untersuchungen werden sowohl Patienten, deren gesunde Angehörige und unabhängige
Kontrollen berücksichtigt. Mit der Aufklärung der molekularen Mechanismen des ALD in gut
charakterisierten Familien soll eine Korrelation zwischen Laborphänotyp und dem klinischen
Phänotyp hergestellt werden.
Wichtigste Ergebnisse
Die Gewinnung und Aufreinigung von Thrombozyten aus geringen Blutvolumen konnte optimiert
werden. Damit ist die Mircoarray-basierte Analyse des Thrombozytentranskriptoms auch aus
Blutproben pediatrischer Patienten möglich. Bis Ende 2006 wurden nahezu alle Familien in der
Kinderklinik Dresden zur Blutentnahme einbestellt.
Summary
ALD is a rare platelet function disorder so far not fully characterized in detail. A disturbed
intraplatelet arachidonic acid metabolism especially the cyclooxgenase deficiency is assumed
as the underlying defect which is usually inherited in an autosomal-dominant trait. Typical
laboratory findings include absent or markedly diminished platelet aggregation with arachidonic
acid (AA) usually combined with a distinctly reduced aggregation response to ADP. In this
project we investigate the molecular basis of the ALD in affected families. This includes DNA
sequencing of the genes of the AA pathways, profiling of platelet RNA, platelet proteomic
studies and functional analysis of key enzymes in the AA pathway. The identification of
molecular pathomechanisms may contribute to a better diagnosis of ALD.
Standort Mannheim
Arbeitsgruppe Thrmobozytenimmunologie
Projektleiter PD Dr. rer. nat. Peter Bugert
Mitarbeiter Angelika Schedel, Dipl. Ing. (FH); cand. med. Iris Klaus
Kooperationen Prof. Dr. M. Suttorp, PD Dr. R. Knöfler, Dr. N. Rolf;
Universitätskinderklinik Dresden
Förderung Deutsches Forschungsgemeinschaft (BU 1795/3-1)
Laufzeit des Projektes 01.05.2006 - 30.04.2008
Weitere Informationen
• Rolf N, Knoefler R, Suttorp M, Klüter H, Bugert P. Optimized procedure for platelet RNA
profiling from blood samples with limited platelet numbers. Clin Chem 51; 1078-1080
(2005).
139

Molekulare Pathophysiologie, Diagnostik und Therapie
140

Molekulare Pathophysiologie, Diagnostik und Therapie
Identifizierung und Charakterisierung neuer Rezeptoren bei
Thrombozyten
Hintergrund und Projektbeschreibung
Die Microarray-basierte Analyse des Thrombozyten-Transkriptoms bildet einen
Forschungsschwerpunkt der Arbeitsgruppe. Hier konnten wichtige Methoden entwickelt und
Daten generiert werden. Mit Hilfe neuerer „Whole Genome“ Arrays konnten alle bekannten
Gene des humanen Genoms auf der Ebene der Gentranskripte semi-quantitativ untersucht
werden. Diese Arbeiten bilden die Grundlage für die Identifizierung und funktionelle
Charakterisierung neuer Rezeptoren bei Thrombozyten.
Wichtigste Ergebnisse
In diesem Zusammenhang konnte bereits der Dopamin-Transporter (DAT) nachgewiesen
werden. Ebenfalls zum dopaminergen System der Thrombozyten gehören die verschiedenen
Dopamin-Rezeptoren. Wir konnten zeigen, dass Dopamin ein Agonist für Thrombozyten ist und
zusammen mit ADP eine verstärkte Adhäsion an Kollagen unter Flussbedingungen bewirkt
(Abbildung 1). Durch die Verwendung spezifischer Rezeptorantagonisten konnte gezeigt
werden, dass ausschließlich D2-like Rezeptoren am Dopaminagonismus beteiligt sind
(Abbildung 2). Aktuelle Untersuchungen konzentrieren sich auf Acetylcholin und die beteiligten
Rezeptoren.
Representative Bilder der Thrombozytenadhäsion an Kollagen unter Flussbedingungen. Thrombozyten wurden
unstimuliert (none) oder nach Aktivierung mit ADP, ADP und Dopamin (ADP/DA) bzw. ADP und Epinephrin (ADP/EPI)
untersucht. Die adherierten Thrombozyten wurden im Phasenkontrast fotografiert und als surface coverage (SC %)
quantifiziert.
Summary
On the basis of microarray hybridization analysis with whole genome array systems we
investigated the RNA profiles of platelets in order to identify new receptors which have not been
described for platelets so far. In this project we could already identify and functionally
characterize the complete dopaminergic system of platelets including the dopamine transporter
(DAT) and different receptors. Dopamine is an ADP-dependent agonist for the adhesion of
platelets to collagen (Figure 1). Only D2-like but not D1-like receptors are involved in this
agonism (Figure 2).
141

Molekulare Pathophysiologie, Diagnostik und Therapie
Effekt verschiedener Antagonisten auf die Dopamin-induzierte Thrombozytenadhäsion an Kollagen. DAT-spezifische
(MPh) und D1-like Rezeptorantagonisten SCH23390 (SCH) zeigten keinen Effekt. Der D2R/D3R-spezifische Antagonist
Raclopride (Rac) und der D4R-spezifische Antagonist Clozapine (Cloz) führten zu einer vollständigen Inhibition des
Dopamineffekts.
Standort Mannheim
Arbeitsgruppe Thromobozytenimmunologie
Projektleiter PD Dr. rer. nat. Peter Bugert
Mitarbeiter Angelika Schedel, Dipl. Ing. (FH)
Kooperationen PD Dr. P. Schloss; ZI Mannheim
Förderung DRK-Blutspendedienst Baden-Württemberg - Hessen gGmbH
Laufzeit des Projektes 01.01.2002 - 31.12.2007
Weitere Informationen
• Bugert P, Dugrillon A, Günaydin A, Eichler H, Klüter H. Messenger RNA profiling of human
platelets by microarray hybridization. Thromb Haemost 90: 748-758 (2003).
• Rox JM, Bugert P, Müller J, Schorr A, Hanfland P, Madlener P, Klüter H, Pötzsch B. Gene
expression analysis in single donor platelets: Evaluation of a PCR-based amplification
technique. Clin Chem 50: 2271-2278 (2004).
• Bugert P, Klüter H. Profiling of gene transcripts in human platelets: An update of the platelet
transcriptome. Platelets 17: 503-504 (2006).
• Frankhauser P, Grimmer Y, Bugert P, Deuschle M, Schmidt M, Schloss P. Characterization
of the neuronal dopamine transporter DAT in human blood platelets. Neurosci Letters 399:
197-201 (2006).
• Bugert P, Ficht M, Klüter H. Towards the identification of novel platelet receptors:
comparing RNA and proteome approaches. Transfus Med Hemother 33: 236-243 (2006).
142

Molekulare Pathophysiologie, Diagnostik und Therapie
Genetische Variabilität von Genen der Blutgerinnung in der
Normalbevölkerung
Hintergrund und Projektbeschreibung
Die genetische Variabilität von Genen des Blutgerinnungssystems ist ursächlich für monogene
und komplexe Erkrankungen des Gerinnungssystems. Insbesondere für thromboembolische
Erkrankungen haben sich in der Vergangenheit häufige genetische Prädispositionen selektiert.
Weiterhin hat diese Variabilität einen Einfluss auf den Metabolismus der zur Behandlung dieser
Erkrankungen eingesetzten Medikamente.
Ziel dieses Projektes ist die Kartierung des gesamten Gerinnungssystems mittels SNP Analyse
und die Generierung von Gen-Haplotypen in einem Kollektiv gesunder Blutspender. Durch
Korrelation dieser Daten mit denen von Patientenkollektiven mit hämostaseologisch
beeinflussten Herz/Kreislauferkrankungen sollen Risikohaplotypen identifiziert und individuelle
Risikoprofile erstellt werden.
Auf Basis dieser Daten soll ein Mikroarray zur Unterstützung der Diagnostik und Therapie
hämostaseologischer Erkrankungen entwickelt werden.
Nukleotid Nukleotid Nukleotid Nukleotid Position Position
Position 3673 3673 3673 3673 3859 3859 3859 3859 5347 5347 5347 5347 5440 5440 5440 5440 5808 5808 5808 5808 6009 6009 6009 6009 6484
6484 6484
6484 6853 6853 6853 6853 7566 7566 7566 7566 8026 8026 8026 8026 8773 8773 8773 8773 9041 9041 9041 9041 10110 10110 10110 10110 1 10466 1
1 0466 0466 Haplotyp Haplotyp
Haplotyp
Frequenz Frequenz Frequenz [%]
[%]
[%]
Basenaustausch Basenaustausch G>A G>A G>A G>A G>A G>A G>A G>A G>A C>T C>T C>T T>G T>G T>G T>G T>G T>G C>T C>T
C>T C>T C>T
C>T G>C G>C G>C C>T C>T C>T A>G A>G A>G C>T C>T C>T G>A G>A G>A A>G A>G
A>G C>T
C>T
C>T
Region Region
Promotor Promotor Promotor Exon Exon Exon 1 1
1 Intron Intron Intron 1 1 1 Exon Exon Exon 2 2
2 Intron Intron Intron 2 2
2 Exon Exon Exon 3 3
3 3´-Region Region Region
Europ Europäer Europ Europäer Europ
Europ er er Afrikaner Afrikaner Afrikaner Asiaten
Asiaten
Asiaten
n n n n n = = 200 200 200 200 n n = = 23 23 23 23 n n n n n n =23
=23
=23
AY587020
AY587020
(Referenzsequenz)
(Referenzsequenz)
(Referenzsequenz)
(Referenzsequenz)
(Referenzsequenz)
(Referenzsequenz)
(Referenzsequenz)
143
G G G C T C C G C A C G A C
A
A
A A
T
G
T
T
T
C
T
T C T
G
G
T
A
A
A
A
A
A
G
T
VKORC1*1 VKORC1*1 VKORC1*1 VKORC1*1 VKORC1*1 < < 0,1 0,1 31 31 31 31 31 31 < < < 0,1
0,1
0,1
VKORC1*2A VKORC1*2A 12 n.u. n.u.
42 42 14 14 95
95
VKORC1*2B VKORC1*2B 30 n.u. n.u.
VKORC1*3A VKORC1*3A 26 n.u. n.u.
VKORC1*3B VKORC1*3B 8 n.u. n.u.
VKORC1*3C VKORC1*3C 1 n.u. n.u.
38 38 43 43 4
VKORC1*3D VKORC1*3D 1 n.u. n.u.
VKORC1*3E VKORC1*3E 1 n.u. n.u.
VKORC1*3F VKORC1*3F 0,5 21 < 0,1
VKORC1*4A VKORC1*4A 19 n.u. n.u.
20 20 12 12 12 12 12 < < 1
1
VKORC1*4B VKORC1*4B 1 n.u. n.u.
VKORC1 Haplotypen und ihre Verteilung der in unterschiedlichen Ethnien (modifiziert nach Geisen et al. 2005)
Wichtigste Ergebnisse
Bisher konnten Gen-Haplotypen für u.a. VKORC1, F7, F13A, F13B und Fibrinogen generiert
werden. Im F13A konnten wir eine in ganz Europa auftretende häufige Mutation auf eine Fouder
Effekt zurückführen. Beim Screening von großen Patientenkollektiven wird zur Zeit in
Zusammenarbeit mit der SNP-Plattform der Universitätsklinik Kiel ein Kollektiv von 1000
Patienten mit Myokardinfarkt und 1000 gematchten Kontrollen hinsichtlich funktioneller
Polymorphismen im VKORC1 Gen untersucht.
Summary
Polymorphism map of the genes involved in blood coagulation
Single nucleotide polymorphisms (SNPs) in genes of blood coagulation are quite common and
impressively demonstrate the genetic variation of the haemostasis system in the normal
population. Some of these sequence variations are known to influence the clinical
manifestation of thromboembolic disorders or the efficacy of drugs acting in the coagulation
cascade. The present study investigates 400 alleles from most genes of the haemostasis

Molekulare Pathophysiologie, Diagnostik und Therapie
system aiming an almost quantitative identification of SNPs with a frequency of > 1%. The SNP
data will be aggregated to haplotypes which might be useful for the vision of assessing
haemostatic risk profiles by biochip based diagnostic tools.
Standort Frankfurt
Arbeitsgruppe Molekulare Hämostaseologie
Projektleiter Dr. med. Christof Geisen
Mitarbeiter Jelena Farac (Doktorandin)
SaLan Nguyen (Doktorandin)
Katja Sittinger (Wissenschaftlerin)
Dr. rer. nat. Matthias Watzka (Wissenschaftler)
Sahar Zaghian (Doktorandin)
Kooperationen Prof. Dr. J. Oldenburg, Inst. Für Exp. Hämatologie und
Transfusionsmedizin, Universität Bonn
Prof. Dr. T. Wienker, Dr. M. Steffens, Abteilung für Genetische
Epidemiologie, Universität Bonn
Förderung BMBF (Nationales Genomforschungsnetz 2)
Firma Baxter
Laufzeit des Projektes 01.02.2002 - 31.08.2007
Weitere Informationen
• Geisen C, Watzka M, Sittinger K, Steffens M, Daugela L, Seifried E, Muller CR, Wienker TF,
Oldenburg J (2005). VKORC1 haplotypes and their impact on the inter-individual and interethnical
variability of oral anticoagulation. Thromb Haemost. 2005 Oct; 94(4): 773-9.
• Ivaskevicius V, Jusciute E, Steffens M, Geisen C, Hanfland P, Wienker TF, Seifried E,
Oldenburg J (2005). GammaAla82Gly represents a common fibrinogen gamma-chain
variant in Caucasians. Blood Coagul Fibrinolysis Apr; 16(3): 205-208.
• http://www.blutspende.de/forschung_entwicklung/wissenschaftliche_arbeitsgruppen/molekul
are_haemostaseologie.php
144

Molekulare Pathophysiologie, Diagnostik und Therapie
Pharmakogenetik der oralen Antikoagulation
Hintergrund und Projektbeschreibung
Ein großes Problem beim klinischen Einsatz von Cumarinderivaten wie Phenprocoumon oder Warfarin ist
seit jeher das enge therapeutische Fenster. Bei einer Unterdosierung fehlt ein Schutz vor Thrombosen, bei
einer Überdosierung kann es leicht zu schweren Blutungen kommen. Weiter kompliziert wird die Therapie
durch große Unterschiede in der individuellen Cumarindosis. Neben partiell resistenten Patienten, die eine
erhöhte Dosis zur Erreichung der gewünschten Antikoagulation benötigen, gibt es auch Fälle gesteigerter
Sensitivität, bei denen eine orale Antikoagulation schwer steuerbar oder sogar gänzlich unmöglich ist.
Ein großer Fortschritt hierbei war in 2004 die Identifizierung des VKORC1-Proteins (Vitamin-K-Epoxid-
Reduktase Untereinheit 1) als molekulares Target der Cumarine durch die Forschergruppen um Oldenburg
und Stafford (USA) (Rost et al., Nature, 2004, Li et al., Nature, 2004). Nun gelang unserer Gruppe die
Identifizierung bestimmter funktioneller VKORC1-Genvarianten, so genannter Haplotypen, die einen
erheblichen Einfluss auf die Wirkung der Cumarinderivate ausüben (Geisen et al., Thrombosis and
Haemostasis, 2005).
Die von unserer Arbeitsgruppe gezeigten Ergebnisse belegen beispielhaft die zunehmende Bedeutung der
Pharmakogenomik. Das bessere Verständnis der individuellen Pharmakokinetik und -dynamik erlaubt
Voraussagen über erwünschte und unerwünschte Arzneimittelwirkungen. Unsere Ergebnisse lassen
erwarten, dass in Zukunft auf der Basis molekularer Marker eine individualisierte Dosierung der
Cumarinderivate zu einer verbesserten Effizienz und Sicherheit der oralen Antikoagulation beiträgt.
145
B
VKORC1*4
VKORC1*3
Haplotype frequency
Europeans Africans Chinese
(GER) (AFR) (CHN)
VKORC1*2
VKORC1*4
VKORC1*3
VKORC1*1
VKORC1*2
VKORC1*3
VKORC1 Haplotypen und ihre Verteilung der in unterschiedlichen Ethnien (modifiziert nach Geisen et al. 2005)
VKORC1*2
VKORC1*2
Wichtigste Ergebnisse
Zunächst wurden durch Untersuchung der kompletten VKORC1-Genregion bei 200 gesunden
Blutspendern die relevanten Haplotypblöcke bei Westeuropäern identifiziert und quantifiziert
Der von uns als VKORC1*2 bezeichnete Haplotyp erreicht eine Allelfrequenz von 42 %,
während die Haplotypen VKORC1*3 und VKORC1*4 mit 38 % bzw. 20 % vorkommen.
Die Analyse von Patienten mit ausgeprägt hohem (> 97,5 Perzentile) oder niedrigem Cumarin-
Bedarf (< 2,5 Perzentile) zeigte eine höchstsignifikante Assoziation des VKORC1*2-Haplotypen
mit der benötigten Wirkstoffdosis. So wiesen 93 % der Cumarin-sensitiven Patienten den
Genotyp VKORC1*2/*2 (homozygot) auf und die restlichen 7 % waren heterozygot für den
VKORC1*2-Haplotyp. Bei Cumarin-resistenten Patienten ergab sich ein entgegengesetztes
Ergebnis. Kein Patient trug den Genotyp VKORC1*2/*2, 14 % zeigten eine heterozygote
Konstellation (Tab. 1).
In einem weiteren Patienten-Kollektiv von 61 Patienten mit stabiler Antikoagulation unter
Phenprocoumon benötigten Träger des Genotyps *2/*2 nur 10 mg Phenprocoumon pro Woche.
Bei heterozygoten Patienten (*2/non*2) waren es bereits 15 mg, und Patienten mit non*2/non*2-
Genotyp mussten im Durchschnitt sogar 21 mg Phenprocoumon pro Woche einnehmen, um im
therapeutischen Dosisbereich zu bleiben.
Auch die schon länger bekannten inter-ethnischen Dosisunterschiede bei oraler Antikoagulation
werden durch den Haplotyp VKORC1*2 verursacht. So ist dieser Haplotyp, welcher bei
Europäern mit einer Cumarinsensitivität assoziiert ist, in chinesischen Populationen mit 95%
vertreten. Dies korreliert mit der in Ostasien im Vergleich zu Europa deutlich verminderten
Cumarindosis bei Thrombosepatienten. In Afrikanischen Populationen kommt dieser Haplotyp
nur mit einer Frequenz von 14% vor, die deutlich unter europäischen Populationen liegt und mit
einer im Durchschnitt höheren Cumarindosis einhergeht.

Molekulare Pathophysiologie, Diagnostik und Therapie
Cumarin-
sensitiv
n = 14
Cumarin-
resistent
n = 36
Kontrollen
n = 200
VKORC1-Haplotyp
Genotyp
*2/*2 13 (0,93) 0 35 (0,18)
*2/non*2 1 (0,07) 5 (0,14) 96 (0,48)
non*2/non*2 0 31 (0,86) 69 (0,34)
Allel Frequenz
*2 0,96 0,07 0,42
non*2 0,04 0,93 0,58
VKORC1*2-Genotyp - und Allel-Frequenzen bei Cumarin-sensitiven (< 10/ < 6 mg Warfarin / Phenprocoumon pro
Woche) und -resistenten Patienten (> 70/ > 42 mg Warfarin / Phenprocoumon pro Woche). (modifiziert nach Geisen et
al. 2005)
Summary
VKORC1 haplotypes determine the inter-individual and inter-ethnical variability of oral anticoagulation
Coumarins are known for their high inter-individual and inter-ethnical variability of the dose-response association.
Recently, common SNPs of the VKORC1 gene (encoding the molecular target of coumarins, vitamin K epoxide
reductase) were shown to be associated with lower warfarin dose requirement. In order to clarify whether these SNPs
are part of more extended haplotypes, we established a comprehensive haplotype map of the entire VKORC1 gene
locus. VKORC1-haplotype association with coumarin dose requirement was analysed in different ethnical populations
and patient cohorts.
In 200 controls we identified 28 SNPs within the VKORC1 gene. 6 SNPs formed 3 main haplotypes covering more than
99% of the genetic variability of VKORC1 (VKORC1*2: 42%, VKORC1*3: 38%, and VKORC1*4: 20%). SNPs
associated with low warfarin dose (rs17878363, rs9934438) were in complete linkage disequilibrium with the VKORC1*2
haplotype. Haplotype frequency in Africans and Chinese differed significantly from the European sample (for
VKORC1*2: Europeans 42%, Chinese 95%, Africans 14%). In 61 unselected patients receiving phenprocoumon c.-
1639AA genotype patients (homozygous VKORC1*2) required less phenprocoumon (1.40 mg/d) than AG (2.12 mg/d)
and GG patients (3.02 mg/d).13 of 14 patients (93%) with increased coumarin sensitivity but none of the patients with
partial coumarin resistance were c.-1639AA. Vice versa, the c.-1639G allele (present in the non VKORC1*2 haplotypes)
was found homozygous in 31 patients (86%) with partial coumarin resistance but in none of the patients with increased
coumarin sensitivity.
In conclusion three main haplotypes represent more than 99% of VKORC1’s genetic variability in Europeans. VKORC1
haplotypes are strongly associated with the inter-individual and inter-ethnical variability of oral anticoagulation. In future
studies, VKORC1-haplotype testing may provide a clinically relevant predictor of coumarin dosing and bleeding risk in
oral anticoagulation.
Standort Frankfurt
Arbeitsgruppe Molekulare Hämostaseologie
Projektleiter Dr. med. Christof Geisen
Mitarbeiter Katja Sittinger (Wissenschaftlerin)
Dr. rer. nat. Matthias Watzka (Wissenschaftler)
Kooperationen Prof. Dr. J. Oldenburg, Inst. Für Exp. Hämatologie und
Transfusionsmedizin, Universität Bonn
Fr. PD Dr. med. E. Lindhoff-Last, Abt. für Angiologie, JWG-Universität
Frankfurt
PD Dr. med. S.W. Tönnes, Institut Institut für Forensische Toxikologie der
JWG-Universität Frankfurt
Prof. Dr. T. Wienker, Dr. M. Steffens, Abteilung für Genetische
Epidemiologie, Universität Bonn
Förderung BMBF (Nationales Genomforschungsnetz 2)
Firma Baxter
Laufzeit des Projektes 01.02.2002 - 31.08.2007
Weitere Informationen
• Geisen C, Watzka M, Sittinger K, Steffens M, Daugela L, Seifried E, Muller CR, Wienker TF, Oldenburg J (2005).
VKORC1 haplotypes and their impact on the inter-individual and inter-ethnical variability of oral anticoagulation.
Thromb Haemost. 2005 Oct; 94(4): 773-9.
• Oldenburg J, Bevans CG, Muller CR, Watzka M (2006) Vitamin K epoxide reductase complex subunit 1
(VKORC1): the key protein of the vitamin K cycle. Antioxid Redox Signal 8: 347-53
• Rost S, Fregin A, Ivaskevicius V, Conzelmann E, Hörtnagel K, Pelz H-J, Lappegard K, Seifried E, Scharrer I,
Tuddenham EGD, Müller CR, Strom TM, Oldenburg J (2004). Mutations in the VKORC1 gene cause warfarin
resistance and multiple coagulation factor deficiency type 2. Nature 427:537-41.
• http://www.blutspende.de/forschung_entwicklung/wissenschaftliche_arbeitsgruppen/molekulare_haemostaseologie
.php
146

Molekulare Pathophysiologie, Diagnostik und Therapie
Molekulare Diagnostik von erblich bedingten hämorrhagischen
und thromboembolischen Krankheitsbildern der Blutgerinnung
Hintergrund und Projektbeschreibung
Schwerwiegende Mangelzustände der Gerinnungsfaktoren Fibrinogen, Faktoren II, V, VII, X, XI,
und XIII und damit einhergehender erbliche Blutungsneigungen sind sehr selten und weisen
Inzidenzen von nur 1:500.000 bis 1: >1.000.000 auf. Dagegen sind arterielle und venöse
thromboembolische Ereignisse mit 3-5 Fällen pro 1000 Individuen und Jahr vergleichsweise
häufige Ereignisse, wobei nur etwa jeder 20. Fall auf Mutationen in einem Gen der inhibitorisch
wirkenden Gerinnungsfaktoren (Antithrombin, Protein C, Protein S) verursacht wird. Wir haben
in unserem Labor die Protokolle für die molekulargenetische Untersuchung der genannten
Gerinnungsfaktoren etabliert, von denen nachfolgend der Faktor XIII und der Faktor VII
exemplarisch angeführt sind.
Der Faktor-XIII vermittelt die kovalente Verknüpfung der Fibrinpolymere und ist damit essentiell
für die Festigkeit des Thrombus. Der schwere FXIII-Mangel ist mit 1:3.000.000 äusserst selten.
Die Patienten können eine schwere Blutungssymptomatik mit Gelenkblutungen und
intrazerebralen Blutungen aufweisen.
Bei einer Gefäßverletzung stellt die Bindung von aktiviertem Faktor VII (Faktor VIIa) an
Gewebethromboplastin („Tissue Factor“, TF) den entscheidenden Auslöser für die plasmatische
Gerinnung dar. Der TF wirkt hierbei als Kofaktor, der die Reaktionsgeschwindigkeit der Faktor
VIIa-vermittelten Aktivierung der Proenzyme Faktor X und Faktor IX um Zehnerpotenzen
steigert. Mit einer Inzidenz von 1:500.000 ist der Faktor-VII-Mangel vergleichsweise häufig unter
den seltenen Hämorrhagien
Lokalisation verschiedener Faktor VII-Mutationen
Wichtigste Ergebnisse
Bislang wurden Protokolle für ein schnelles und sicheres Mutationsscreening aller klassischen
prokoagulatorischen und inhibitorischen Gerinnungsfaktoren etabliert und damit insbesondere
Patientenkollektive mit Faktor XIII-Mangel und Faktor VII-Mangel untersucht.
In Zusammenarbeit mit Prof. Seitz aus dem Paul-Ehrlich-Institut konnten die molekularen
Ursachen bei 26 Patienten mit Faktor-XIII-Mangel aus mehreren Ländern Europas identifiziert
werden. Klinische Daten haben hierbei erstmals gezeigt, dass auch heterozygote
Mutationsträger mit Faktor-XIII-Spiegeln von etwa 50% Blutungsneigungen und
Wundheilungsstörungen aufweisen können.
Darüber hinaus wurden in einem Kollektiv von 22 Familien mit Faktor-VII-Mangel die
molekularen Ursachen ermittelt und dabei insgesamt 37 Mutationen identifiziert, von denen 7
Mutationen nicht vorbeschrieben waren. Es zeigte sich, dass die Mutationen bei 5 Familien in
homozygoter, bei 9 Familien in compound heterozygoter und bei 7 Familien in heterozygoter
Form vorlagen. Bei den Familien mit heterozygot vorliegender Mutation führten funktionell
147

Molekulare Pathophysiologie, Diagnostik und Therapie
wirksame Polymorphismen im Faktor VII-Gen zu einer weiteren Verminderung des Faktor-VII-
Spiegels und damit zur klinischen Manifestation der Blutungsneigung.
Summary
Protocols for the genetic analysis of most monogenetic haemorrhagic and thromboembolic
disorders have been established in our group. So far 26 patients with factor XIII deficiency from
all over Europe have been characterized. Of special interest is one female patient with a
heterozygous missense mutation who showed symptoms of bleeding and wound healing inspite
of factor XIII levels in the range of 50%. In another cohort of 22 patients with factor VII
deficiency 37 mutations could be found revealing 5 homozygous, 9 compound heterozygous
and 7 heterozygous mutations. In the families with heterozygous mutations the concomitant
presence of polymorphisms led to the clinical manifestation of the bleeding.
Standort Frankfurt
Arbeitsgruppe Molekulare Hämostaseologie
Projektleiter Dr. med. Christof Geisen
Mitarbeiter Daniel Delev (Doktorand)
Maria Lim-Eimer (TA)
Kristina Feldt (TA)
Dr. med. Anna Pavlova (Wissenschaftlerin)
Tina Schäfer (TA)
Katja Sittinger (Wissenschaftlerin)
Dipl.-Biol. Gabriele Spohn (Doktorandin)
Dr. rer. nat. Matthias Watzka (Wissenschaftler)
Sabine Wetzestein (TA)
Kooperationen Prof. Dr. med. J. Oldenburg, Inst. Für Exp. Hämatologie und
Transfusionsmedizin, Universität Bonn
Fr. PD Dr. med. E. Lindhoff-Last, Abt. für Angiologie, JWG-
Universität Frankfurt
PD Dr. med. R. Großmann, Hämophiliezentrum, JWG-Universität
Frankfurt
PD Dr. med. W. Kreuz, Kinderklinik III der JWG-Universität
Frankfurt
Förderung DRK-Blutspendedienst Baden-Württemberg - Hessen gGmbH
Laufzeit des Projektes andauernd
Weitere Informationen
• Ahmed RP, Biswas A, Kannan M, Bhattacharya M, Geisen C, Seifried E, Oldenburg J,
Saxena R (2005). First report of a FVII-deficient Indian patient carrying double
heterozygous mutations in the FVII gene. Thromb Res 115(6): 535-6.
• Rost S, Geisen C, Fregin A, Seifried E, Muller CR, Oldenburg J (2006) Founder mutation
Arg485Pro led to recurrent compound heterozygous GGCX genotypes in two German
patients with VKCFD type 1. Blood Coagul Fibrinolysis 17: 503-7
• Pavlova A, El-Maarri O, Luxembourg B, Lindhoff-Last E, Kochhan L, Bruhn HD, Delev D,
Watzka M, Seifried E, Oldenburg J (2006) Detection of heterozygous large deletions in the
antithrombin gene using multiplex polymerase chain reaction and denatured high
performance liquid chromatography. Haematologica 91: 1264-7
• http://www.blutspende.de/transfusionsmedizin/labordiagnostik/frankfurt/molekulare_hamost
aseologie.php
148

Molekulare Pathophysiologie, Diagnostik und Therapie
Molekulargenetische Analysen bei Hämophilie A-Patienten zur
Analyse des Hemmkörperrisikos bei Anwendung von ADVATE -
FVIII-Konzentrat
Hintergrund und Projektbeschreibung
Die Hemmkörperbildung bei Patienten mit Hämophilie A stellt die schwerste Komplikation der
Therapie mit Faktor-VIII-Gerinnungskonzentraten dar. Etwa 20-30% aller schwer betroffenen
Hämophilie A Patienten bilden meist zu Beginn der Behandlung innerhalb der ersten 20
Expositionstage einen Hemmkörper. Dieser Hemmkörper neutralisiert die Wirkung des
substitutierten FVIII. Das Risiko der Hemmkörperbildung wird entscheidend durch Art und
Lokalisation der Mutation im Faktor VIII-Gen bestimmt. Darüber hinaus wird das
Hemmkörperrisiko möglicherweise durch die Art der Applikation des FVIII-Präparats
(kontinuierliche Infusion versus Bolusgabe) beeinflusst.
In einem Teil dieser Studie soll bei „Previously Untreated Patients“ (PUPs) der für die
Hämophilie A ursächliche Defekt im FVIII-Gen aufgeklärt werden. In einem weiteren Teil der
Studie wird bei Hämophilie A-Patienten, die sich einem Kniegelenksersatz unterziehen, eine
Faktor VIII-Gendiagnostik durchgeführt. Ergänzend wird der Einfluss von Merkmalen des HLA-
Systems auf die Hemmköperbildung untersucht.
Schematische Darstellung des Faktor VII-Proteins im Tenase-Komplex
Wichtigste Ergebnisse
Der Pathomechanismus der Hemmkörperbildung basiert auf einer Immunantwort des Patienten
in Form einer Anti-FVIII-Alloantikörperbildung, da der zugeführte Faktor VIII ein körperfremdes
Protein darstellt. Seit kurzem ist bekannt, dass der Typ der Mutation einen entscheidenden
Einfluss auf das Risiko der Hemmkörperbildung hat. Unter Berücksichtigung des Einflusses der
Mutation im Faktor VIII-Gen, lässt sich die Bedeutung weiterer Einflussfaktoren für das
Hemmkörperrisiko feststellen.
149

100
75
50
25
0
Hohes Risiko
Mehrere
Domänen
88%
Molekulare Pathophysiologie, Diagnostik und Therapie
Große Leichte Kette
Deletionen 40%
41%
Einzelne
Nonsense
31%
Intron 22
Inversionen Non A-Run
Domänen
25% Schwere Kette
21% 21%
Kleine
17%
Deletionen
16%
Niedriges Risiko
Inhibitorprävalenz in Abhängigkeit vom Mutationstyp
A-Run
3%
C1-C2
10%
Missense
5%
Non C1-C2
3%
Splice site
3%
Summary
Inhibitor formation affects 20-30 % of patients with severe hemophilia A and represents the
major complication of substitution therapy with factor VIII concentrates. Since prophylactic
treatment is not possible in those patients they are at risk for progressive joint damage. The
pathomechanism of inhibitor formation is only partly understood. Beside the FVIII mutation
determinants of the immune response genes have been suggested to play an important role for
inhibitor formation. In addition the application mode (continuous versus bolus infusion) may
contribute to the risk of inhibitor formation.
Standort Frankfurt
Arbeitsgruppe Molekulare Hämostaseologie
Projektleiter Dr. med. C. Geisen, Prof. Dr. med. Johannes Oldenburg,
Mitarbeiter Maria Lim-Eimer (TA)
MuDr. Anna Pavlova (Wissenschaftlerin)
Katja Sittinger (Wissenschaftlerin)
Sabine Wetzestein (TA)
Kooperationen Prof. Dr. med. J. Oldenburg, Institut für Exp. Hämatologie und
Transfusionsmedizin, Universität Bonn
Förderung Firma Baxter
Laufzeit des Projektes 01.10.2004- 31.03.2009
Weitere Informationen
• Astermark J, Oldenburg J, Carlson J, Pavlova A, Kavakli K, Berntorp E, Lefvert AK (2006)
Polymorphisms in the TNFA gene and the risk of inhibitor development in patients with
hemophilia A. Blood 108: 3739-45
• Astermark J, Oldenburg J, Pavlova A, Berntorp E, Lefvert AK (2006) Polymorphisms in the
IL10 but not in the IL1beta and IL4 genes are associated with inhibitor development in
patients with hemophilia A. Blood 107: 3167-72
• Oldenburg J, Pavlova A (2006) Genetic risk factors for inhibitors to factors VIII and IX.
Haemophilia 12 Suppl 6: 15-22
• http://www.blutspende.de/transfusionsmedizin/labordiagnostik/frankfurt/molekulare_hamost
aseologie.php
150

Molekulare Pathophysiologie, Diagnostik und Therapie
Gentherapie der Hämophilie mittels intravaskulärer
Administration von nicht-viralen Vektoren
Hintergrund und Projektbeschreibung
Die meisten Gentherapiestrategien bisher beruhen auf viralen Vektoren als Gentransfervehikel,
während nicht-virale Methoden wegen ihrer geringen Effizienz für eine Anwendung in der
Hämophiliebehandlung meist im Abseits standen. Bei der Weiterentwicklung von viralen
Gentransfermethoden haben sich jedoch Fragen zur Sicherheit dieser Therapieansätze mehr
und mehr als limitierende Faktoren erwiesen, z.B. Mutagenese oder Aktivierung von
Onkogenen durch Integration des Vektorgenoms bei retro- oder lentiviralen Vektoren, oder
akute oder verzögerte Immunantworten auf adeno- oder adeno-assoziierte-virale Vektoren.
Obwohl nicht-virale Vektoren in der Regel eine geringere Effizienz im Vergleich zu viralen
Vektoren aufzeigen, haben Neuerungen auf dem Gebiet der Expressionskassettenkonstruktion
und Entwicklungen zu Methoden der Vektorverabreichung mittlerweile Langzeitexpression auch
durch Plasmidvektoren möglich gemacht. Ein großer Vorteil von Plasmidvektoren ist ihre
prinzipielle Einfachheit, ihre Kosteneffizienz sowie ihr hervorragendes Sicherheitsprofil. Sie
bestehen aus reiner DNA, so dass es nicht wie bei Viren zu einer Immunantwort gegen den
Trägerproteinanteil eines Vektors kommen kann. Dieses bedeutet nicht nur einen Vorteil im
Hinblick auf Sicherheitsaspekte, sondern bedeutet auch, dass sich diese Vektoren wegen der
fehlenden Immunisierung prinzipiell beliebig oft verabreichen lassen.
Reine Plasmidvektoren sind außerdem ein exzellentes System zur Testung von verschiedenen
Expressionskonstrukten in Zellkulturen sowie in Mausmodellen, z. B. von varianten Proteinen
oder alternativen Promotoren. Ergebnisse aus diesen Studien lassen sich dann wiederum auch
auf andere gentherapeutische Ansätze einfach übertragen.
151
attP
Poly Poly AA
attP/B
Faktor Faktor IX IX
Promotor Promotor (CMV) (CMV)
37°C, pH 8
+
32°C
Bakt. Bakt.
ΦC31 ΦC31
Amp Amp
attB/P
RU RU
I-Sce I-Sce II
attB
SS
37°C, pH 8
Herstellung eines Mini-Circle DNA Vektors.
Die Induktion der L-Arabinose induzierbaren ФC31 Integrase (F C31)auf dem Ursprungsplasmid führt durch
Rekombination an den Phagen-Bindungsstellen attP und attB zur Bildung von zwei zirkulären Plasmidteilen. Der eine
enthält die Expressionskassette mit dem Faktor IX oder Faktor VIII Gen (Mini-Circle) für die Gentherapie. Der andere
enthält die Plasmidbestandteile, die für eine Vermehrung in Kultur notwendig sind (Ampicillin-Resistenz Gen (Amp), der
Plasmid Replikationsursprung (RU), etc.), sowie die Integrase und die I-Sce I Endonuklease. Die Endonuklease wird
ebenfalls über L-Arabinose induziert, was nach Anpassung der Temperatur und des pH-Wertes zu einer Spaltung der
zirkulären bakteriellen DNA an einer spezifischen Endonukleaseschnittstelle (S) führt. Die linearisierte DNA wird dann
schnell in den Bakterien abgebaut. Eine Verminderung der Expression durch Gen-Silencing nach dem Gentransfer,
welches von bakteriellen Teilen der Plasmidsequenz herrührt, kann auf diese Weise verhindert werden.
Unsere Arbeitsgruppe arbeitet an der Entwicklung von nicht-viralen Ansätzen zur Behandlung
der Hämophilie. Im Besonderen sind wir an einem System zur Transfektion von
Skelettmuskelfasern interessiert, da dieser Ansatz auch auf den Menschen übertragbar scheint.
Außerdem wird das nicht-virale Gentransfermodell benutzt um Vektorexpressionskassetten

Molekulare Pathophysiologie, Diagnostik und Therapie
auch für andere Vektorsysteme zu verbessern, sowie um Fragen der biologischen Wirksamkeit
und Immunogenität von rekombinant exprimierten Proteinen zu erforschen.
Gentransferprozedur zum
Skelettmuskel.
Ein Körperglied, z.B. der Arm,
wird durch eine Druckmanschette
vom systemischen Kreislauf
getrennt und der Vektor dann mit
erhöhtem hydrostatischem Druck
in eine oberflächliche Vene
injiziert. Die Methode wird in der
Anästhesie bereits beim
Menschen angewandt. Effizienter
Gentransfer und transduktion
großer Bereiche von Muskelfasern
mit dieser Methode konnte auch in
großen Tieren, wie Hunden und
Rhesusaffen, bereits für die
Behandlung der muskulären
Dystrophie gezeigt werden.
Wichtigste Ergebnisse
In ersten Versuchen eines auf die Leber gerichteten Gentransfers konnten bei Mäusen stabile
Expressionsspiegel von humanem Faktor IX im Normalbereich (~100%) ohne Immunantwort
gegen das fremde Protein erreicht werden. Diese Ergebnisse bilden die Voraussetzung für die
folgende Benutzung des Verfahrens als Modellsystem.
Summary
New expression systems and application procedures have made non-viral gene transfer a
viable alternative to viral gene therapies strategies. Our group uses these new non-viral
approaches as model, which allows easy manipulation of the transgene, the expression
cassettes, and the immunogenic setting, to improve safety and efficacy of hemophilia gene
therapy. We are further developing a gene transfer protocol which will allow to upscale from
mice to larger animals, or when successful potentially also to humans for the treatment of
hemophilia B.
Standort Frankfurt
Arbeitsgruppe Gentherapie der Hämophilie
Projektleiter Dr. med. Jörg Schüttrumpf
Mitarbeiter Dipl. Biol. Peter Milanov
Kooperationen Dr. A. Sturm, Prof. Dr. CP Speer, Kinderklinik, Uniklinik Würzburg
Förderung Nachwuchsförderung der Johann Wolfgang Goethe Universität
Frankfurt
Laufzeit des Projektes 01.05.2006 - 1.05.2008
152

Molekulare Pathophysiologie, Diagnostik und Therapie
Optimierung einer rekombinanten FVIII Produktion in
heterologen Zellsystemen und Analyse des FVIII-
Sekretionsweges
Hintergrund und Projektbeschreibung
Die Komplexität des Blutgerinnungsfaktors FVIII bezüglich Konformation und posttranslationeller Modifikationen erlaubt
keine Expression des rekombinanten Proteins in bakteriellen Systemen, sondern bedarf der Expression in
Säugetierzellen, wie z.B. CHO (Chinese Hamster Ovary) oder COS (African Green Monkey Kidney) Zellen. In
heterologen Zelllsystemen ist die Expression des rekombinanten FVIII jedoch um 2-3 Logstufen geringer als die
Expression anderer cDNAs, was im Wesentlichen auf 4 Faktoren zurückzuführen ist
1.) geringer mRNA Level von FVIII
2.) ineffiziente Translation der FVIII-mRNA-Transkripte
3.) ineffizienter Transport des primären Translationsproduktes aus dem endoplasmatischen Retikulum (ER)
zum Golgi Apparat
4.) rasche Proteolyse des freien, ungebundenen FVIII-Proteins im Zellüberstand
Ziel dieses Projektes ist es Faktoren und Zellen zu identifizieren, die eine physiologische und effiziente Expression von
Faktor VIII in rekombinanten Systemen ermöglichen. Letztlich soll dieses Projekt darauf hinzielen, ein in Bezug auf
Faltung und Glykosilierung physiologisches Gerinnungsfaktor FVIII-Präparat rekombinant herstellen zu können.
Auswahl humaner Zelllinien mit entsprechendem Repertoire an posttranslationellen Enzymen
Entgegen der derzeitigen Vorgehensweise, tierische Säugerzellen für die Produktion von rekombinantem FVIII
einzusetzen, verspricht die Verwendung humaner Zellen aufgrund korrekter Glykosylierung und Faltung des komplexen
FVIII-Proteins eine Steigerung der Sekretion und somit Ausbeute des FVIII Proteins. Dies ist insbesondere vor dem
Hintergrund relevant, dass eine derzeitige Therapie der Hämophilie A mit rekombinanten FVIII Präparationen mit einer
Abwehrreaktion der behandelten Patienten im Sinne einer Hemmkörperbildung gegen das substituierte FVIII Protein
assoziiert ist. Dies wird z.Zt. auch mit der nicht physiologischen Glykosilierung von FVIII in heute zur Produktion
verwendeten Hamsterzelllinien in Verbindung gebracht. Unsere Arbeitsgruppe versucht daher jene Gewebezellen für
eine rekombinante Expression des FVIII Proteins zu verwenden, die auch physiologisch an der Bildung von FVIII
beteiligt sind. Hierzu zählen Hepatozyten und lebersinusoidale endotheliale Zellen (LSECs). Blutgefäßauskleidende
Endothelzellen werden ebenfalls untersucht, da sie hohe Mengen des von Willebrand-Faktors (vWF) bilden, welcher für
die Stabilität des FVIII von großer Bedeutung ist. Hier konnte unsere Arbeitsgruppe in der Vergangenheit bereits
endotheliale Vorläuferzellen (EPCs) stabil mit dem FVIII Gen transduzieren und enorm hohe FVIII Expressionsraten
zeigen
Da die primären Zellen humanen Ursprungs (Hepatozyten, LSECs, EPCs) eine begrenzte Teilungs- und
Lebensfähigkeit aufweisen und sich in dieser Form nicht für eine pharmazeutische Produktion von rekombinantem FVIII
Protein eignen würden, verfolgen wir das Ziel die verschiedenen Zelltypen zunächst zu immortalisieren. Die
Immortalisierung der Zellen erfolgt mittels Transfektion des Vektors pBudCE 4.1 (Invitrogen), der für die Proto-
Onkogene Bmi-1 und hTERT kodiert. Die Selektion stabiler Zellklone erfolgt mit Zeocin. Da die immortalisierten Zellen
später für eine pharmazeutische Produktion des FVIII Proteins in Frage kommen, wurde das für die Immortalisierung
verwendete pBudCE Plasmid unter GMP Bedingungen synthetisiert, um eine spätere PEI-Zulassung zu ermöglichen.
Analyse des FVIII-Transportweges
Wir konnten zeigen, dass die Sekretion des FVIII-Proteins in physiologisch an der FVIII Synthese beteiligten Zellen
(Hepatozyten) sehr viel effizienter abläuft als in häufig verwendeten Hamster- oder Nierenkarzinomzelllinien (Becker et
al. 2004). Die Untersuchung des intrazellulären Sekretionsweges und die Identifizierung von Faltungsproteinen
(Chaperonen), die für eine physiologische Sekretion von FVIII effizient sind, sollen einerseits eine effizienter FVIII-
Synthese ermöglichen, andererseits aber auch ein besseres Verständnis für genetische Ursachen der Hämophilie
ermöglichen.
153
A B
Herstellung eines Mini-Circle DNA Vektors.
Proliferations-Kapazität und FVIII-Sekretionsrate von Endothelialen Vorläuferzellen aus Nabelschnurblut (EPCs)
A Vergleich der Proliferationsrate von FVIII-transduzierten und Wildtyp EPCs (SEW = Kontrollvektor ohne FVIII-
Transgen). B Zeitverlauf der Sekretion an aktivem FVIII von endothelialen Vorläuferzellen nach lentiviraler Transduktion
an Tag 0

Molekulare Pathophysiologie, Diagnostik und Therapie
Wichtigste Ergebnisse
Auswahl humaner Zelllinien mit entsprechendem Repertoire an posttranslationellen Enzymen
Unsere Arbeitsgruppe konnte zeigen, dass sich endotheliale Vorläuferzellen, die aus Stammzellen des
Nabelschnurblutes isoliert wurden, besonders geeignet sind eine hocheffiziente rekombinante Expression
des FVIII Proteins in Vitro herbeizuführen. Das Verfahren wurde in Europa, den USA und Asien zum
Patent angemeldet.
A C
B
Abbildung A und B: Nach einem Temperaturblock von 4 Stunden bei 15°C und anschließendem Erwärmen auf 37°C
wurden nach 10 Minuten Transportbewegungen von vesikuläre Strukturen vom peripheren ERGIC zum perinukleären
Golgi-Komplex beobachtet. In Abbildung C ist die Bewegung eines Transportvesikels durch einen Pfeilkopf
hervorgehoben. Abstand zwischen den Bildern: 2 Sekunden. Maßstab 2 µm.
(G) Durch Akkumulation bei 20 °C wurden perinukleär e Strukturen sichtbar. Maßstab 10 µm.
Analyse des FVIII-Transportweges
Durch Analyse des intrazellulären Sekretionsweges von nativem Faktor VIII in primären Leberzellen und
rekombinantem Faktor VIII in COS-Zellen mittels konfokaler Lasermikroskopie, konnte unsere
Arbeitsgruppe bereits wichtige Erkenntnisse über den Sekretionsweg von FVIII in den verschiedenen
Zellsystemen erlangen. So zeigte sich, dass es in primären Leberzellen offenbar nicht zu einer Retention
von FVIII im ER kommt, sondern dass FVIII effizient über den klassischen Sekretionsweg ER, ER-Golgi
Intermediate Compartment (ERGIC) und Golgi-Apparat freigesetzt wird. In COS-Zellen dagegen bestätigte
sich die Erkenntnis, dass ein Großteil des FVIII-Proteins im ER zurückgehalten wird (s. Abb 1). Mit Hilfe
von Kolokalisationsexperimenten konnten wir darüber hinaus erstmals zeigen, dass FVIII-Protein für den
Transport aus dem ER zum Golgi in COPI- beschichteten, tubulären Transportvesikeln verpackt wird.
Neueste Untersuchungen zeigen, dass der ER-Golgi-Transport für FVIII Rezeptor-vermittelt über den
MCFD2-LMAN1-Komplex erfolgt. Als Nächstes soll daher mittels RNAi die Rolle der B-Domäne bei dieser
Interaktion untersucht werden. Durch Ko-Immunpräzipitation „His-getaggter“-FVIII-Konstrukte sollen
zudem weitere Interaktionspartner des FVIII Proteins bei der Synthese und Sekretion identifiziert werde.
Standort Frankfurt
Arbeitsgruppe Gentherapie der Hämophilie
Projektleiter PD Dr. med. Torsten Tonn
Mitarbeiter Dipl.-Biol. Daniela Abriss
Daniela Bott
Dipl.-Biol. Stefan Heinz
Dipl.-Biol. Stefanie Roth
Kooperationen Prof. Dr. Rainer Pepperkok, EMBL Heidelberg
Prof. Dr. Michael Ott, Zentrum für Innere Medizin, Mediz. Hochschule Hannover
Dr. med. Daniel Benten; Arbeitsgruppe Hepatologie und Zelltransplantation;
Universitätsklinikum Hamburg-Eppendorf
Förderung DFG Graduiertenkolleg GK1172 „Biologicals” -Research, Development and Safety
of Biopharmaceutical
Forschungsmittel der Universität Frankfurt am Main
Laufzeit des Projektes 01.09.2005 - 31.08.2008 bzw. 01.02.2006 - 31.01.2009
Weitere Informationen
• Becker et al., Confocal microscopy analysis of native, full length and B-domain deleted coagulation factor FVIII
trafficking in mammalian cells. Thromb Haemost 2004; 92:23-35
• Herder et al., Sustained expansion and transgene expression of coagulation factor VIII-transduced cord bloodderived
endothelial progenitor cells. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2003 ;23(12):2266-72.
• www.blutspende.de/forschung_entwicklung/wissenschaftliche_arbeitsgruppen/mth_rekombinante_expression.php
154

Molekulare Pathophysiologie, Diagnostik und Therapie
Entwicklung eines gentherapeutischen Ansatzes zur
Behandlung der Hämophilie A
Hintergrund und Projektbeschreibung
Die Gerinnungsstörung Hämophilie A ist auf einen genetischen Defekt des FVIII Gens zurückzuführen,
welcher zu einer unzureichenden Aktivität, oder einem kompletten Fehlen des FVIII Proteins in den
betroffenen Patienten.
Bisher werden hämophile Patienten durch die kontinuierliche Substitution des FVIII Proteins behandelt,
welcher aus Plasma gewonnen oder rekombinant hergestellt wird. Bezogen auf die in der gesamten Welt
erkrankten Bluter, steht diese Behandlungsoption allerdings nur einer Minderheit von Patienten in
entwickelten Ländern zur Verfügung. Eine Korrektur des Erbdefektes durch FVIII Gentherapie verspricht
eine lang anhaltende endogene Substitution des Gerinnnungsfaktors und würde die kostspieligen und für
die Patienten belastenden Transfusionen überflüssig machen. Unsere Arbeitsgruppe beschäftigt sich
daher damit, geeignete Genfähren (Vektoren) und Zielzellen für einen gentherapeutischen
Behandlungsansatz der Hämophilie zu entwickeln. Ein besonderes Augenmerk gilt hierbei ex Vivo
transduzierten hämatopoetischen Stammzellen. Zur Transduktion werden HIV-abgeleitete,
selbstinaktivierende lendtivirale Vektoren verwendet, welche eine stabile Integration des Transgens in
Stammzellen ermöglichen. Durch Differenzierung der genetisch veränderten Stammzellen in ausgereifte
Endothel- und Leberzellen, soll untersucht werden, welcher aus Stammzellen abgeleitete Zelltyp
besonderes geeignet ist eine Substitution des Gerinnungsfaktors zu gewährleisten. Zudem werden die für
eine Expression von FVIII verwendeten Vektoren weiter optimiert. So wurde die d5’UTR des FXIIIA-Gens
zwischen CMV-Promoter und der cDNA des humanen FVIII kloniert und die Expression von FVIII in
hämatopoetischen Zellen und HEK293T-Zellen signifikant gesteigert. Desweiteren untersucht die
Arbeitsgruppe den Einfluss und die Effektivität verschiedener Promotor auf die FVIII Expression. Hier
sollen virusspezifische Promotoren, wie der des Zytomegalie-Virus (CMV) mit physiologischen
Promotoren, z.B. dem Promotor des FVIII Proteins, des humanen alpha1-Antitrypsins (hAAT) und des
Elongation Factor 1 – alpha Proteins (EF1alpha), auf ihre Transduktionseffizienz und Integration in die
Zielzelle hin untersucht werden. Dies ist besonders vor dem Hintergrund neuer Erkenntnisse interessant,
die darauf hinweisen, dass bei gentherapeutischen Behandlungsansätzen auf Grund ihrer Effizienz häufig
abgeleitete virusspezifische Promotor, offenbar mit einem höheren Risiko einer malignen Transformation
assoziiert sind.
155
Kontrolle
CMV
enh CMV
CMV 5‘UTR
enh CMV 5‘UTR
C
FVIII:C [%/ml]
D
Relative
mRNA level
0 1 2 3 0 10 20 30
Abbildung 1: Effekte von Faktor XIIIA transkriptionellen Elementen auf die Expression von Faktor VIII in K562
Zellen. K562 Zellen wurden mit den angegebenen Expressionsvektoren mittels Amaxa-Nucleofektion transient
transfiziert. Die sezernierten FVIII Mengen im Kulturüberstand wurden 48 h nach Transfektion über chromogenen Assay
(C) bestimmt. Die Daten sind als Mittelwerte (± Standardfehler) von Triplikaten von sechs unabhängigen Experimenten
bei dargestellt.
Wichtigste Ergebnisse
In CD14+ Monozyten konnte eine 6-fach höhere Expression des FVIII Proteins unter Verwendung des um
die 5´UTR optimierten Vektors beobachtet werden. Dies ist vermutlich darauf zurückzuführen dass
untranslatierte Regionen den nukleären Export, die zytoplasmatische Lokalisation, die Stabilität und die
Effizienz der Translation der mRNA verändern können. Unsere Arbeitsgruppe konnte darüber hinaus
zeigen, dass der physiologische, nicht virale Promotor des EF1alpha, eine ubiquitäre und effektive FVIII
Expression in verschiedenen Zellsystemen erlaubt und eine mögliche Alternative für virusspezifische
Promotor darstellen kann.

A
FVIII:C IU / ml / 106 FVIII:C IU / ml / 10 cells 6 FVIII:C IU / ml / 10 cells 6 cells
B
Copy number/cell
6.00
5.00
4.00
3.00
2.00
1.00
0
80
70
60
50
40
30
20
10
0
293T 293T 293T
HepG2 HepG2 HepG2
Sk-Hep Sk-Hep Sk-Hep
Hepa1-6 Hepa1-6 Hepa1-6
293T 293T
HepG2 HepG2
Sk-Hep Sk-Hep
Hepa1-6 Hepa1-6
293T 293T 293T
HepG2 HepG2 HepG2
Sk-Hep Sk-Hep Sk-Hep
Hepa1-6 Hepa1-6 Hepa1-6
293T 293T
HepG2 HepG2
Sk-Hep Sk-Hep
Hepa1-6 Hepa1-6
Molekulare Pathophysiologie, Diagnostik und Therapie
293T 293T 293T
HepG2 HepG2 HepG2
Sk-Hep Sk-Hep Sk-Hep
Hepa1-6 Hepa1-6 Hepa1-6
CMV EF1α hAAT FVIII control
293T 293T
HepG2 HepG2
Sk-Hep Sk-Hep
Hepa1-6 Hepa1-6
*
293T 293T 293T
HepG2 HepG2 HepG2
Sk-Hep Sk-Hep Sk-Hep
Hepa1-6 Hepa1-6 Hepa1-6
293T 293T
HepG2 HepG2
Sk-Hep Sk-Hep
Hepa1-6 Hepa1-6
CMV EF1α hAAT FVIII
293T 293T 293T
HepG2 HepG2 HepG2
Sk-Hep Sk-Hep Sk-Hep
Hepa1-6 Hepa1-6 Hepa1-6
FVIII:C / copy
C
4.00
3.50
3.00
2.50
2.00
1.50
1.00
0.50
0
293T 293T
HepG2 HepG2
Sk-Hep Sk-Hep
Hepa1-6 Hepa1-6
D
293T 293T
HepG2 HepG2
Sk-Hep Sk-Hep
Hepa1-6 Hepa1-6
293T 293T
HepG2 HepG2
Sk-Hep Sk-Hep
Hepa1-6 Hepa1-6
*
293T 293T
HepG2 HepG2
Sk-Hep Sk-Hep
Hepa1-6 Hepa1-6
CMV EF1α hAAT FVIII
Abbildung 2: FVIII Expression in Abhängigkeit der Zellzahl und der Anzahl der lentiviralen Integrationen.
Vergleich der FVIII Expression in sortierten Leberzelllinien und HEK293T Zellen nach lentiviralen Gentransfer. Die
Zellen wurden transduziert mit dem C(FVIII-BDD)IGWS Vektor mit den entsprechenden Promotoren (untere
Bezeichnung auf der X-Achse). (A) FVIII:C-Spiegel der Kulturüberstände 48 Stunden nach Ausplattieren von 10 6 Zellen
gemessen mittels chromogenen Assay. (B) Bestimmung der mittleren viralen Kopienzahl pro Genom der transduzierten
Zelllinien. Realtime-PCR wurde mit gleichen Mengen genomischer DNA durchgeführt. Die Kopienzahl der lentiviralen
Vektoren wurden normalisiert zu ß-Aktin als interner Standard für die analysierte Genomzahlen. (C) Effizienz der FVIII-
Expression bezogen auf die virale Kopienzahl. (D) Repräsentative Aufnahme bei der FACS-Sortierung (HEK293T
Zellen transduziert mit C(FVIII-BDD)IGWS. Die Zellen in Region 3 wurden aufgefangen und
Standort Frankfurt
Arbeitsgruppe Gentherapie der Hämophilie
Projektleiter PD Dr. med. Torsten Tonn
Mitarbeiter Daniela Bott
Dipl.-Biol. Stefan Heinz
Dr. Virginia Picanco,
cand med. Daniela Went
Kooperationen Prof Dr. Pepperkok, European Molecular Biology Lab (EMBL),
Heidelberg
Dr. Manuel Grez, Georg-Speyer-Haus, Frankfurt am Main
Förderung Biotest AG
DFG - Graduiertenkolleg „Biologicals“
Laufzeit des Projektes seit 01.02.2002
156

Molekulare Pathophysiologie, Diagnostik und Therapie
Pharmakokinetik und thrombotische Aktivität von FVIII –
Etablierung und Analyse eines Mausmodels mit
fluoreszensgekoppelten FVIII (FVIII-GFP)
Hintergrund und Projektbeschreibung
Ziel des Projekts ist es, die Pharmakokinetik und die thrombotische Aktivität von verschiedenen
Gerinnungsfaktor VIII (FVIII) Varianten zu untersuchen. Dies ist für den gentherapeutischen
Einsatz sowie bei der Substitutionstherapie von Hämophiliepatienten von Bedeutung. Da nur
ein kleiner Teil des substituierten FVIII zur Korrektur des Hämophilie- Phänotyps beiträgt und oft
Unterschiede in der Kinetik der FVIII-Substitution bei verschiedenen FVIII-Präparationen
beobachtet wurden, soll in diesem Projekt eine genauere Analyse der Pharmakokinetik von
FVIII im Hinblick auf Organverteilung, Metabolismus und Clearance durchgeführt werden.
Die Verwendung von fluoreszenz-gekoppelten FVIII Varianten (FVIII-GFP), welche zuvor bereits
mit den entsprechenden nicht-gekoppelten FVIII Varianten in Hinblick auf ihre
Gerinnungseigenschaften verglichen wurden, soll eine bessere Darstellung der Kinetik im
Organismus ermöglichen. So sollen FVIII-GFP Varianten wie z.B. B-Domänen deletiert, die
Volllängenvariante, Varianten mit verlängerter Halbwertszeit und Varianten nach Inkubation mit
vWF in Hinblick auf ihre Biodistribution in hämophilen und hämostatisch normalen Mäusen
untersucht werden. Unter anderem soll im Zuge des Projektes auch die Beteiligung von FVIII an
Thrombusbildung in vivo durch Verwendung von fluoreszenz-gekoppelten FVIII in der
Intravitalmikroskopie (siehe Abbildung) beobachtet werden.
Mit diesen Untersuchungen erhoffen wir uns ein besseres Verständnis über die
Pharmakokinetik von FVIII, was zu einer effektiveren Hämophiliebehandlung bzw. zur
Entwicklung der Gentherapie beitragen soll. Mit diesen Untersuchungen erhoffen wir uns ein
besseres Verständnis über die Pharmakokinetik von FVIII, was zu einer effektiveren
Hämophiliebehandlung bzw. zur Entwicklung der Gentherapie beitragen soll.
157
A B
FVIII
EGFP
Arterielles Gefäß
40 – 60 µm
Abbildung A: Darstellung der FVIII-GFP Struktur nach Simulation mit dem Yamber2 Force Field Modell.
Abbildung B: Repräsentatives Bild einer Gerinnselbildung 4,5 Minuten nach Laser induzierter Gefäßverletzung. Bis zu
drei verschiedene Gerinnungskomponenten können gleichzeitig mittels intravitaler Videomikroskopie dargestellt werden.
Rot: Blutplättchen (Thrombozyten), Grün: tissue factor (tf), Blau: Fibrin, Gelb: tissue factor und Plättchen, Magenta:
Fibrin und Plättchen, Türkis: tissue factor und Fibrin, Weiß: Überlappung aller Komponenten. (Übernommen aus Gross
et al 2005)

Molekulare Pathophysiologie, Diagnostik und Therapie
Summary
Fuorescent labeled coagulation factors have revealed important knowledge of their contribution
to thrombus formation after laser induced vascular injury in the microcirculation of living mice.
The availability of FVIII-EGFP transgenic hemophilia A knockout mice would be highly
desireable to address several questions of FVIII gene therapy but also the role of FVIII in
thrombus formation. Therefore we fused B domain deleted and full length FVIII at its C-terminus
to the reporter gene coding for enhanced green fluorescent protein (EGFP) and demonstrated
that this fusion does not affect the specific procoagulant activity or intracellular processing of
FVIII. In addition the fluorescent signal of the EGFP moity is readily given.
To analyse the impact of different target tissues for hemopilia gene therapeutic approaches,
mice will be generated that drive the FVIII-EGFP expression from liver, muscle and
endothelial/hematopoietic lineage specific and ubiquitously active promoter. Using these mice,
the impact of recombinant FVIII expression in different organs/tissues on the spatial and
temporal distribution of FVIII protein, its fate and pharmacokinetics will be analyzed in vivo.
Moreover this FVIII-EGFP transgenic mouse model will be used to analyse the impact of FVIII
protein in vivo thrombus formation using multichannel fluorescence intravital videomicroscopy
together with laser induced endothelial injury as it has been previously described for tissue
factor.
Standort Frankfurt
Arbeitsgruppe Gentherapie der Hämophilie
Projektleiter Dipl.-Biol. Stefan Heinz
Mitarbeiter Dipl.-Biol. Stefan Heinz
Kooperationen University of Pennsylvania School of Medicine (Assistant Professor
Valder R. Arruda)
Universitätsklinikum Frankfurt, Molekulare Hämatologie (Prof. H.
von Melchner)
Förderung Finanziert über Hemophilia Awards Young career investigators
award der Bayer Healthcare, USA (Preisträger: Dipl. Biol. Stefan
Heinz)
Laufzeit des Projektes 01.01.2007 - 01.01.2009
158

Molekulare Pathophysiologie, Diagnostik und Therapie
Prospektive Untersuchung zur Bedeutung von Einflussfaktoren
auf die Blutungsinzidenz hämophiler Patienten
Hintergrund und Projektbeschreibung
Die Häufigkeit von Blutungen bei Patienten mit plasmatischen Gerinnungsstörungen wie der
Hämophilie A und B wird wesentlich vom Schweregrad der Erkrankung und damit vor allem vom
zugrunde liegenden Gendefekt beeinflusst. Das spontane Blutungsrisiko ist bei einer F VIII-
bzw. F IX-Restaktivität von unter 3 % und insbesondere bei der schweren Verlaufsform mit
Faktorenspiegeln unter 1 % erhöht. Es fällt allerdings auf, dass sich Patienten mit identischem
Gendefekt und vergleichbarer Restaktivität unerwarteter Weise erheblich in Ihrer
Blutungsfrequenz unterscheiden können. Im Rahmen der geplanten Untersuchung sollen nun
im Hämophiliezentrum Frankfurt mögliche Einflussfaktoren auf die Blutungshäufigkeit bei
Patienten mit Hämophilie evaluiert werden. Hierzu werden Patienten mit gleichem Schweregrad
einer Hämophilie (getrennt nach Hämophilie A bzw. B) gruppiert und vergleichend analysiert.
Weiterhin soll untersucht werden, ob in einem F VIII-Antikörper-Immunoassay Antikörper auch
bei unauffälligem Bethesda-Assay immunologisch nachgewiesen werden können und deren
Titer mit der Blutungshäufigkeit und den vorliegenden Angaben zur F VIII-Halbwertszeit in
Beziehung gesetzt werden kann.
Summary
This investigation focuses on so far unexplained differences in the incidence of bleeding
complications in haemophilic patients showing the same severity of their disease (incl.
genotype). Factors influencing bleeding rates will be studied in severe haemophiliacs,
comprising haemophilia A and B patients.
Standort Frankfurt
Arbeitsgruppe Hämophiliezentrum
Projektleiter PD Dr. med. R. Großmann
Mitarbeiter Dr. W. Miesbach, Dr. J. Schüttrumpf
Kooperationen
Förderung Firma Bayer
Laufzeit des Projektes 01.11.2006 - 31.10.2008
159

Molekulare Pathophysiologie, Diagnostik und Therapie
Untersuchung der Interaktion von Blutgerinnung und
zellulärem Immunsystem bei Reif- und Frühgeborenen und
deren Korrelation mit postnatalen Erkrankungen.
Hintergrund und Projektbeschreibung
Frühgeburtlichkeit ist mit einer erheblichen peri- und postnatalen Morbidität und Mortalität
verbunden. Ein großer Anteil an Komplikationen ist auf die Folgen von Atemwegerkrankungen
(Atemnotsyndrom und chronische Lungenerkrankung) und Hirnblutungen zurückzuführen. Prä-
und postnatale proinflammatorische Prozesse sind an der Pathogenese dieser Erkrankungen
bei Frühgeborenen beteiligt. Die Chorioamnionitis scheint als pränataler Einflussfaktor einen
Risikofaktor für eine chronische Lungenerkrankung und eine Hirnblutung der Frühgeborenen
darzustellen. Bei Frühgeborenen mit Atemnotsyndrom kommt es zu einer Aktivierung von
Leukozyten und des Gerinnungssystems. Bei Chorioamnionitis bzw. Funisitis
(Nabelschnurentzündung) können bereits zum Zeitpunkt der Geburt proinflammatorische
Zytokine als Hinweis auf eine Endothel-, Thrombozyten- und Leukozytenaktivierung
nachgewiesen werden. Diese inflammatorischen Reaktionen tragen zu weiteren
Organschädigungen der Frühgeborenen bei.
Ziel des Projektes ist die Untersuchung aller Frühgeborenen und die Erfassung von
Unterschieden der Interaktion von Leukozyten mit Thrombozyten bzw. mit der plasmatischen
Gerinnung zum Zeitpunkt der Geburt in Abhängigkeit von Gestationsalter, Geburtsgewicht und
dem Vorhandensein einer Chorioamnionitis bzw. Funisitis. Weiterhin soll ermittelt werden, ob
der Anteil an Leukozyten-Thrombozyten-Aggregaten oder die Faktor VIII-Spiegel und die
Expression der o. g. Marker zum Zeitpunkt der Geburt bzw. im Alter von 18 - 36 Stunden mit der
Entwicklung einer Hirnblutung korreliert. Die zweite Blutentnahme wird weiterhin zeigen, ob sich
die untersuchten Parameter bei Kindern mit Atemnotsyndrom signifikant verändern und ob
Leukozyten-Thrombozyten-Aggregate mit ihren proinflammatorischen und prokoagulatorischen
Eigenschaften möglicherweise zu einer weiteren Lungen- und sonstigen Organschädigung bei
den Frühgeborenen beitragen.
Summary
The project is focused on the role of platelet function, platelet-leukocyte interactions and of
changes in the coagulation system for neonatal diseases and bleeding complications in preterm
newborns.
Standort Frankfurt
Arbeitsgruppe Hämophiliezentrum
Projektleiter PD Dr. med. R. Großmann
Mitarbeiter Dr. W. Miesbach, Dr. J. Schüttrumpf
Kooperationen Dr. A. Sturm, Prof. Dr. CP Speer, Kinderklinik, Uniklinik Würzburg
Förderung Firma Baxter
Laufzeit des Projektes 01.10.2006 - 30.09.2008
Weitere Informationen
• AG. Sitaru, CP. Speer, S. Holzhauer, A. Obergfell, U. Walter, R. Grossmann. Platelet
CD40L: a marker for chorioamnionitis? Thrombosis and Haemostasis. 2005
Dec;94(6):1219-23.
• AG. Sitaru, S. Holzhauer, A. Obergfell, D. Singer, U. Walter, CP. Speer, R. Grossmann.
Neonatal platelets in cord blood and peripheral blood. Platelets. 2005;16(3-4):203-10.
160

Molekulare Pathophysiologie, Diagnostik und Therapie
Finanzierung der Forschung 2006
Die Forschung des DRK-Blutspendedienstes Baden-Württemberg – Hessen wird finanziert
durch Eigenmittel des Unternehmens, durch die Universitäten Frankfurt, Heidelberg, Mannheim
und Ulm sowie durch verschiedene Drittmittelgeber, die nachfolgend aufgeführt sind:
Alexion Pharmaceuticals; International PNH Registry
Baxter AG (Österreich)
Bayer Healthcare
BioRad (Frankreich)
Bundesministerium für Bildung und Forschung (BMBF)
Cerus Corp., Concord, U.S.A.
Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG)
Deutsche José Carreras Leukämie-Stiftung e.V.
DiaMed (Schweiz)
Else-Kröner-Fresenius-Stiftung
Europäische Kommission
Europäische Kommission und Bundesministerium für Gesundheit: Deutsche Gesellschaft für
technische Zusammenarbeit (GTZ)
Europäische Union (EU)
Gesellschaft für Strahlen und Ionenforschung Darmstadt
Hochschulbauförderungsgesetz (HBFG)
Hilfe für Krebskranke Kinder Frankfurt e.V.
Medion Diagnostics AG (Schweiz)
Mildred-Scheel-Stiftung der Deutschen Krebshilfe e.V.
Stiftung der Deutschen Gesellschaft für Transfusionsmedizin und Immunhämatologie (DGTI)
Tecan Schweiz AG
Wilhelm-Sander-Stiftung
161

Publikationen 2006
1. Assmus B, Honold J, Schächinger V, Britten MB,
Fischer-Rasokat U, Lehmann R, Teupe C, Pistorius K,
Martin H, Abolmaali ND, Tonn T, Dimmeler S, Zeiher
AM (2006) Transcoronary transplantation of progenitor
cells after myocardial infarction. N Engl J Med, 355(12):
1222-32. [IF 44,016]
2. Astermark J, Oldenburg J, Pavlova A, Berntorp E,
Lefvert AK (2006) Polymorphisms in the IL-10 but not in
the IL-1{beta} and IL-4 genes are associated with
inhibitor development in patients with hemophilia A.
BLOOD, 107(8): 3167-72. [IF 10,131]
3. Beck O, Seidl C, Lehrnbecher T, Kreyenberg H,
Schwabe D, Klingebiel T, Seifried E, Bader P, Koehl
U (2006) Quantification of chimerism within peripheral
blood, bone marrow and purified leukocyte subsets:
comparison of singleplex and multiplex PCR
amplification of short tandem repeat (STR) loci. EUR J
HAEMATOL, 76(3): 237-44. [IF 2,004]
4. Bekeredjian-Ding, I., S.I. Roth, S. Gilles, T. Giese, A.
Ablasser, V. Hornung, S. Endres, and G. Hartmann.
2006. T cell-independent, TLR-induced IL-12p70
production in primary human monocytes. J Immunol
176:7438-7446. [IF 6,387]
5. Berberat, P.O., H. Friess, B. Schmied, M. Kremer, S.
Gragert, C. Flechtenmacher, P. Schemmer, J. Schmidt,
T. Kraus, W. Uhl, S. Meuer, M.W. Buchler, and T. Giese.
2006. Differentially expressed genes in postperfusion
biopsies predict early graft dysfunction after liver
transplantation. Transplantation 82:699-704. [IF 3,879]
6. Beyer, M., M. Kochanek, T. Giese, E. Endl, M.R.
Weihrauch, P.A. Knolle, S. Classen, and J.L. Schultze.
2006. In vivo peripheral expansion of naive
CD4+CD25high FoxP3+ regulatory T cells in patients
with multiple myeloma. Blood 107:3940-3949. [IF 10,131]
7. Brixner V, Mosebach M, Schmidt M, Hermann S, Seifried
E, Martin H, Seidl C (2006) HLA-DRB1*0826 and HLA-
DQB1*0627, two novel class II alleles identified in blood
stem cell donors of Caucasian origin. TISSUE
ANTIGENS, 67(2): 160-2. [IF 2,747]
8. Bruchmüller I, Pirkl E, Herrmann R, Stoermer M, Eichler
H, Klüter H, Bugert P: Introduction of a validation
concept for a PCR based Mycoplasma detection assay.
Cytotherapy 8: 62-69 (2006). [IF 1,795]
9. Bugert P, Klüter H: Profiling of gene transcripts in human
platelets: An update of the platelet transcriptome.
Platelets 17: 503-504 (2006). [IF 1,451]
10. Bugert P, Vosberg M, Lese AB, Klüter H: Polymorphisms
of Human Platelet Receptor Genes: Clinical Relevance
and Diagnostic Application of Genotyping. Chapter 4 in
Focus on Genetic Screening Research, Pupecki SR
(Ed.), Nova Science Publishers; pp 73-93 (2006).
11. Ceyhan, G.O., F. Bergmann, M. Kadihasanoglu, M.
Erkan, W. Park, U. Hinz, M.W. Muller, T. Giese, M.W.
Buchler, N.A. Giese, and H. Friess. 2006. The
neurotrophic factor artemin influences the extent of
neural damage and growth in chronic pancreatitis. Gut
[IF 7,692]
12. Ceyhan, G.O., N.A. Giese, M. Erkan, A.G. Kerscher,
M.N. Wente, T. Giese, M.W. Buchler, and H. Friess.
2006. The neurotrophic factor artemin promotes
pancreatic cancer invasion. Ann Surg 244:274-281. [IF
6,328]
13. Chen Q., Hustinx H., Flegel W.A.: The RHCE allele
ceSL: the second example for D antigen expression
without D-specific amino acids. Transfusion 46: 766-772
(2006) [IF 3,160]
14. Chudy M, Schmidt M, Czudai V, Scheiblauer H, Nick S,
Mosebach M, Hourfar MK, Seifried E, Roth WK, Grünelt
E, Nübling CM (2006) Hepatitis B virus genotype G
monoinfection and its transmission by blood
components. HEPATOLOGY, 44(1): 99-107. [IF 9,792]
Publikationen 2006
15. Dengjel J, Nastke M-D, Gouttefangeas C, Gisioudis G,
Schoor O, Altenberend F, Müller M, Krämer B, Missiou
A, Sauter M, Hennenlotter J, Wernet D, Stenzl A,
Rammensee H-G, Klingel K, Stevanovic S. Unexpected
abundance of HLA class II presented peptides in primary
renal cell carcinomas. In: CLIN CANCER RES, Vol. 12
2006 , P. 4163-4170 [IF 5.715]
16. Dewey R.A., Diez I.A., Ballmaier M., Filipovich A., Greil
J., Güngör T., Happer C., Maschan A., Noyan F.,
Pannicke U., Schwarz K., Snapper S., Welte K., Klein C.:
Retroviral WASP gene transfer into human
hematopoietic stem cells reconstitutes the actin
cytoskeleton in myeloid progeny cells differentiated in
vitro. Exp. Hematol. 34: 1161-1169 (2006) [IF 4,019]
17. Dietz K., Beier F., Balabanov S., Schrezenmeier H.,
Brümmendorf T.H.: Telomere shortening in patients with
paroxysmal nocturnal hemoglobinuria (PNH) detected by
proaerolysin flow-FISH (Response). Blood 108: 3620
(2006) [IF 10,131]
18. El-Maarri O, Singer H, Klein C, Watzka M, Herbiniaux U,
Brackmann HH, Schröder J, Graw J, Müller CR,
Schramm W, Schwaab R, Haaf T, Hanfland P,
Oldenburg J (2006) Lack of F8 mRNA: a novel
mechanism leading to hemophilia A. BLOOD, 107(7):
2759-65. [IF 10,131]
19. Enders A., Fisch P., Schwarz K., Duffner U., Pannicke
U., Nikolopoulos E., Peters A., Orlowska-Volk M.,
Schindler D., Friedrich W., Selle B., Niemeyer C., Ehl S.:
A severe form of human combined immunodeficiency
due to mutations in DNA ligase IV. J. Immunol. 176:
5060-5068 (2006) [IF 3,507]
20. Enders A., Zieger B, Schwarz K., Yoshimi A.,
Speckmann C., Knoepfle E.-M., Kontny U., Müller U.,
Nurden A., Rohr J., Henschen M., Pannicke U.,
Niemeyer C., Nurden P., Ehl S.: Lethal hemophagocytic
lymphohistiocytosis in Hermansky-Pudlak syndrome type
II. Blood 108: 81-87 (2006) [IF 10,131]
21. Esteban R., Montero R., Flegel W.A., Wagner F.F.,
Subirana L., Parra R., Ribera A., Nogués N.: The D
category VI type 4 allele is prevalent in the Spanish
population. Transfusion 46: 616-623 (2006) [IF 3,160]
22. Fehrenbach E, Schneider EM. Trauma-induced systemic
inflammatory response versus exercise-induced
immunomodulatory effects. In: SPORTS MED, Vol. 36
No. 5 , 2006 , P. 373-384 [IF 3.333]
23. Feuchtinger T, Matthes-Martin S, Richard C, Lion T,
Fuhrer M, Hamprecht K, Handgretinger R, Peters C,
Schuster FR, Beck R, Schumm M, Lotfi R, Jahn G, Lang
P. Safe adoptive transfer of virus-specific T-cell immunity
for the treatment of systemic adenovirus infection after
allogeneic stem cell transplantation. In: BRIT J
HAEMATOL, Vol. 134 2006 , P. 64-76 [IF 4.080]
24. Flegel W.A., Eicher N.I., Doescher A., Hustinx H.,
Gowland P.L., Mansouri Taleghani B., Petershofen E.K.,
Bauerfeind U., Ernst M., Zabern I. von, Schrezenmeier
H., Wagner F.F.: In-frame triplet deletions in RHD alter
the D antigen phenotype. Transfusion 46: 2156-2161
(2006) [IF 3,160]
25. Flegel W.A., Molecular genetics of RH and its clinical
application. Transfusion clinique et biologique 13: 4-12
(2006) [IF 0,721]
26. Flegel W.A., Wagner F.F., Chen Q., Schlanser G.,
Frame T., Westhoff C.M., Moulds M.K.: The RHCE allele
ceCF: the molecular basis of Crawford (RH43).
Transfusion 46: 1334-1342 (2006) [IF 3,160]
27. Flegel W.A.: How I manage donors and patients with the
weak D phenotype. Current Opinion in Hematology 13:
476-483 (2006) [IF 4,510]
28. Frank B, Hemminki K, Meindl A, Wappenschmidt B,
Klaes R, Schmutzler RK, Untch M, Bugert P, Bartram
CR, Burwinkel B: Association of the ARLTS1 Cys148Arg
variant with familial breast cancer risk. Int J Cancer 118:
2505-2508 (2006). [IF 4,700]
162

Publikationen 2006
29. Frank B, Hemminki K, Wappenschmidt B, Klaes R,
Meindl A, Schmutzler RK, Bugert P, Untch M, Bartram
CR, Burwinkel B: Variable number of tandem repeats
polymorphism in the SMYD3 promoter region and the
risk of familial breast cancer. Int J Cancer 118: 2917-
2918 (2006). [IF 4,700]
30. Frank B, Hemminki K, Wappenschmidt B, Meindl A,
Klaes R, Schmutzler RK, Bugert P, Untch M, Bartram
CR, Burwinkel B: Association of the CASP10 V410I
variant with reduced familial breast cancer risk and
interaction with the CASP8 D302H variant.
Carcinogenesis 27: 606-609 (2006). [IF 5,108]
31. Frankhauser P, Grimmer Y, Bugert P, Deuschle M,
Schmidt M, Schloss P: Characterization of the neuronal
dopamine transporter DAT in human blood platelets.
Neurosci Letters 399: 197-201 (2006). [IF 1,898]
32. Gehring, F. K. Schwingende Quarze verraten die
Blutgruppe. BMBF Newsletter Nr. 24 / Februar 2006, 6-7
(2006) [IF nicht bekannt]
33. Gehring, F. K., Gronmaier, R. "Mikrofluidische Plattform
für die Blutanalytik, Blutgruppenbestimmung mit
inetgrierten Schwingquarzsensoren" , Bioforum 6/2006,
38-40, GIT Verlag (2006) [IF nicht bekannt]
34. Goede J.S., Benz R., Fehr J., Schwarz K., Heimpel H.:
Congenital dyserythropoietic anemia type I with bone
abnormalities, mutations of the CDAN I gene, and
significant responsiveness to alpha-interferon therapy.
Ann. Hematol. 85: 591-595 (2006) [IF 2,193]
35. Gössler UR, Bieback K, Bugert P, Heller T, Sadick H,
Hörmann K, Riedel F:In vitro analysis of integrin
expression during chondrogenic differentiation of
mesenchymal stem cells and chondrocytes upon
dedifferentiation in cell culture. Int J Mol Med 17: 301-
307 (2006). [IF 2,090]
36. Gössler UR, Bugert P, Bieback K, Bag S, Sadick H,
Klüter H, Hörmann K, Riedel F: A comparison of the
gene expression patterns of human chondrocytes and
chondrogen differentiated mesenchymal stem cells for
tissue engineering. HNO 54: 258-266 (2006). [IF 0,484]
37. Gössler UR, Bugert P, Bieback K, Sadick H, Baisch A,
Hörmann K, Riedel F:In vitro analysis of differential
expression of collagens, integrins, and growth factors in
cultured human chondrocytes. Otolaryngol Head Neck
Surg 134: 510-515 (2006). [IF 1,218]
38. Göttig S, Möbest D, Rüster B, Grace B, Winter S,
Seifried E, Gille J, Wieland T, Henschler R (2006) Role
of the monomeric GTPase Rho in hematopoietic
progenitor cell migration and transplantation. EUR J
IMMUNOL, 36(1): 180-9. [IF 4,876]
39. Gulbinas, A., P.O. Berberat, Z. Dambrauskas, T. Giese,
N. Giese, F. Autschbach, J. Kleeff, S. Meuer, M.W.
Buchler, and H. Friess. 2006. Aberrant gata-3 expression
in human pancreatic cancer. J Histochem Cytochem
54:161-169. [IF 2,208]
40. Guo K, Schaefer R, Paul A, et al. A new technique for
the isolation and surface mobilisation of mesenchymal
stem cells from whole bone marrow using high sepcific
DNA-aptamers. STEM CELLS 2006; (24): 2220-2231 [IF
6.094]
41. Guo, J., J. Kleeff, Y. Zhao, J. Li, T. Giese, I. Esposito,
M.W. Buchler, M. Korc, and H. Friess. 2006. Yesassociated
protein (YAP65) in relation to Smad7
expression in human pancreatic ductal adenocarcinoma.
Int J Mol Med 17:761-767. [IF 2,090]
42. Härtel C, Iblher P, Puzik A, Wortmeier K, Ebel B, Schultz
C, Müller-Steinhardt M: Immunosuppressive activity of
the immunophilin-binding drug Sanglifehrin A in human
whole blood: potent inhibition of interleukin-6 produced
by lymphocytes and monocytes. Scand J Immunol 63:
26-34 (2006). [IF 2,023]
43. Heimpel H., Höchsmann, B., Wiesneth, M.: Therapie mit
Erythrozytenkonzentraten bei chronischer Anämie.
Hämotherapie 7: 32-43 (2006) [IF nicht bekannt]
44. Heimpel H., Schwarz K., Ebnöther M. et al.: Congenital
dyserytropoietic anemia type I (CDA I): molecular
genetics, clinical appearance, and prognosis based on
163
long-term observation. Blood 107: 334-340 (2006) [IF
10,131]
45. Herberth, G., C. Daegelmann, A. Weber, S. Roder, T.
Giese, U. Kramer, R.P. Schins, H. Behrendt, M. Borte,
and I. Lehmann. 2006. Association of neuropeptides with
Th1/Th2 balance and allergic sensitization in children.
Clin Exp Allergy 36:1408-1416. [IF3,553 ]
46. Hillmen P., Young N.S., Schubert J., Brodsky R.A.,
Socié G., Muus P., Röth A., Szer J., Elebute M.O.,
Nakamura R., Browne P., Risitano A.M., Hill A.,
Schrezenmeier H., Fu C.-L., Maciejewski J., Rollins S.A.,
Mojcik C.F., Rother R.P., Luzzatto L.: The complement
inhibitor eculizumab in paroxysmal nocturnal
hemoglobinuria. N. Engl. J. Med. 355: 1233-1243 (2006)
[IF 44,016]
47. Hirv K., Pannicke U., Mytilineos J., Schwarz K.: Disulfide
bridge disruption in the α2 domain of the HLA class I
molecule leads to low expression of the corresponding
antigen. Human Immunology 67: 589-596 (2006) [IF
2,467]
48. Holzapfel V., Lorenz M., Weiss C.K., Schrezenmeier H.,
Landfester K., Mailänder V.: Synthesis and biomedical
applications of functionalized fluorescent and magnetic
dual reporter nanoparticles as obtained in the
miniemulsion process. J. Phys.: Condens. Matter 18:
S2581-S2594 (2006) [IF 2,145]
49. Hönig M., Schwarz K.: Omenn syndrome: a lack of
tolerance on the background of deficient lymphocyte
development and maturation. Curr. Opin. Rheumatol. 18:
383-388 (2006) [IF 4,226]
50. Hönig M., Schwarz K.: Schwerer kombinierter
Immundefekt mit Nachweis von B-Zellen (T - B + -SCID).
Allergologie 29: 507-512 (2006) [IF 0,369]
51. Kälsch T, Elmas E, Nguyen XD, Wolpert C, Klüter H,
Borggrefe M, Haase KK, Dempfle CE: Enhanced
expression of platelet CD40-ligand by in vitro
lipopolysaccharide-challenge in patients with ventricular
fibrillation complicating acute myocardial infarction. Int J
Cardiol 107: 350-355 (2006). [IF 1,765]
52. Kälsch T, Nguyen XD, Elmas E, Grebert N, Suselbeck T,
Klüter H, Borggrefe M, Dempfle CE: Coagulation
activation and expression of CD40 ligand on platelets
upon in vitro lipopolysaccharide-challenge in patients
with unstable angina. Int J Cardiol 111: 217-223 (2006).
[IF 1,765]
53. Kayed, H., J. Kleeff, A. Kolb, K. Ketterer, S. Keleg, K.
Felix, T. Giese, R. Penzel, H. Zentgraf, M.W. Buchler, M.
Korc, and H. Friess. 2006. FXYD3 is overexpressed in
pancreatic ductal adenocarcinoma and influences
pancreatic cancer cell growth. Int J Cancer 118:43-54.
[IF 4,700]
54. Kayed, H., J. Kleeff, S. Keleg, X. Jiang, R. Penzel, T.
Giese, H. Zentgraf, M.W. Buchler, M. Korc, and H.
Friess. 2006. Correlation of glypican-1 expression with
TGF-beta, BMP, and activin receptors in pancreatic
ductal adenocarcinoma. Int J Oncol 29:1139-1148. [IF
2,681]
55. Kern S, Eichler H, Stoeve J, Klüter H, Bieback K:
Comparative analysis of mesenchymal stem cells from
bone marrow, umbilical cord blood, or adipose tissue.
Stem Cells 24: 1294-1301 (2006). [IF 6,094]
56. Klaffschenkel RA, Biesemeier A, Waidmann M, Northoff
H, Steuerer W, Koenigsrainer A, Lembert N. A closed
system for isolation and purification of human islets using
the cobe 2991 cell processor may reduce the need of
cleanroom facilities. In: CELL TRANSPLANTATION in
press [IF 3.5]
57. Kolb, A., J. Kleeff, N. Arnold, N.A. Giese, T. Giese, M.
Korc, and H. Friess. 2006. Expression and differential
signaling of heregulins in pancreatic cancer cells. Int J
Cancer [IF 4,700]
58. Koninger, J., N.A. Giese, M. Bartel, F.F. di Mola, P.O.
Berberat, P. di Sebastiano, T. Giese, M.W. Buchler, and
H. Friess. 2006. The ECM proteoglycan decorin links
desmoplasia and inflammation in chronic pancreatitis. J
Clin Pathol 59:21-27. [IF 2,170]

59. Kubistova Z., Mrazek F., Tudos Z., Kriegova E.,
Ambruzova Z., Mytilineos J., Petrek M.: Distribution of 22
cytokine gene polymorphisms in the healthy Czech
population. Int J Immunogenet. 33: 261-267 (2006) [IF
nicht bekannt]
60. Lang PA, Beringer O, Nicolay J, Amon O, Kempe DS,
Hermle T, Attanasio P, Akel A, Schaefer R, et al. Suicidal
death of erythrocytes in recurrent hemolytic-uremic
syndrome. J MOL MED 2006 Apr 19 [IF 4.702]
61. Li L., Giannopoulos K., Reinhardt P., Tabarkiewicz J.,
Schmitt A., Greiner J., Rolinski J., Hus I., Dmoszynska
A., Wiesneth M., Schmitt M.: Immunotherapy for patients
with acute myeloid leukemia using autologous dendritic
cells generated from leukemic blasts. Int. J. Oncol. 28:
855-861 (2006) [IF 2,681]
62. Lorenz M.R., Holzapfel V., Musyanovych A., Nothelfer
K., Walther P., Frank H., Landfester K., Schrezenmeier
H., Mailänder V.: Uptake of functionalized, fluorescentlabeled
polymeric particles in different cell lines and stem
cells. Biomaterials 27: 2820-2828 (2006) [IF 4,698]
63. Ludwig RJ, Alban S, Bistrian R, Boehncke WH,
Kaufmann R, Henschler R, Gille J (2006) The ability of
different forms of heparins to suppress P-selectin
function in vitro correlates to their inhibitory capacity on
bloodborne metastasis in vivo. THROMB
HAEMOSTASIS, 95(3): 535-40. [IF 3,056]
64. Luettringhaus T.A., Cho D., Ryang D.W., Flegel W.A.:
An easy RHD genotyping strategy for D- East Asian
persons applied to Korean blood donors. Transfusion 46:
2128-2137 (2006) [IF 3,160]
65. Michalski, C.W., F.F. Di Mola, K. Kummel, M. Wendt,
J.S. Koninger, T. Giese, N.A. Giese, and H. Friess. 2006.
Human inflammatory bowel disease does not associate
with Lawsonia intracellularis infection. BMC Microbiol
6:81. [IF 2,176]
66. Mosebach M, Brixner V, Bader P, Klingebiel TH, Seifried
E, Seidl C (2006) Intergenic recombination with HLA-C
leads to a novel HLA-A*19 allele, HLA-A*2910, that is
characterized by a functionally inactive amino acid
exchange in the loop connecting the alpha and alpha
domains. TISSUE ANTIGENS, 67(1): 75-8. [IF 2,747]
67. Mueller MM, Seifried E (2006) Blood transfusion in
Europe: basic principles for initial and continuous training
in transfusion medicine: an approach to an European
harmonisation. (La transfusion sanguine en Europe:
principes de base pour la formation initiale et continue
en médecine transfusionelle : vers une harmonisation
européenne.) Transfus Clin Biol 13:282-9 [IF 0,721]
68. Mueller MM, Seifried E (2006) Do We Still Need
Preoperative Autologous Blood Donation? - It Is High
Time for a Reappraisal! Transfus Med Hemother, 33:
336-347. [IF 0,449]
69. Mueller MM, Seifried E (2006) Nutzen-Risiko-Bewertung
der präoperativen Eigenblutspende (PAB): Individuelle
Indikationsstellung erforderlich. Anästh Intensivmed, 47:
79-92. [IF 0,602]
70. Mueller MM, Henschler R, Seifried E (2006)
Übertragbarkeit einer Leukämie durch Blutprodukte?
internist prax 46:325-6; chir praxis 2005/2006;65:705-6;
gynäkol prax 2006; 30:275-6; pädiat prax 2006;68:192-4
; tägl prax 2006; 47:277-8 [IF n.b.]
71. Munder, M., H. Schneider, C. Luckner, T. Giese, C.D.
Langhans, J.M. Fuentes, P. Kropf, I. Mueller, A. Kolb, M.
Modolell, and A.D. Ho. 2006. Suppression of T-cell
functions by human granulocyte arginase. Blood
108:1627-1634. [IF 10,131]
72. Mytilineos J., Pabst K, Stracke S, Flach C. Maier J.:
Acute graft loss due to monospecific HLA class II
immunization? A case report. Visuals of the 7 th European
Clinical Histocompatibility Workshop: 38-40 (2006) [IF
nicht bekannt]
73. Mytilineos J., Seidl C., Holzberger G., Nguyen X.D.,
Wernet D.: Aktueller Stand der
Transplantationsimmunologischen Diagnostik.
Hämotherapie 8: 4-16 (2006) [IF nicht bekannt]
74. Mytilineos J.: Alloimmunization Prior to Kidney
Transplantation Methodology and Clinical Impact.
Publikationen 2006
Visuals of the 7 th European Clinical Histocompatibility
Workshop: 1-3 (2006) [IF nicht bekannt]
75. Niewolik D., Pannicke U., Lu H., Ma Y., Wang L.-C.V.,
Kulesza P., Zandi E., Lieber M.R., Schwarz K.: DNA-
PKcs dependence of Artemis endonucleolytic activity,
differences between hairpins and 5' or 3' overhangs. J.
Biol. Chem. 281: 33900-33909 (2006) [IF 5,854]
76. Ottinger H., Müller C., Beelen D.W., Ehninger G.,
Schmitz N., Zander A., Schrezenmeier H.:
Entwicklungen in der hämatopoetischen
Stammzelltransplantation. Daten des Deutschen
Registers für Stammzelltransplantationen. Deutsches
Ärzteblatt 103(37): A2381-AA2386 (2006) [IF nicht
bekannt]
77. Paschen A, Song M, Schenk S, Janda J, Nguyen XD,
Osen W, Schadendorf D, Geginat G: Identification of a
cross-reactive HLA-DRB1*0301-restricted CD4 T cell
response directed against cholesterol-binding cytolysins
from two different pathogens. Microbes Infect 8: 2034-
2043 (2006). [IF 3,154]
78. Passweg J.R., Pérez W.S., Eapen M., Camitta B.M.,
Gluckman E., Hinterberger W., Hows J.M., Marsh
J.C.W., Pasquini R., Schrezenmeier H., Socié G., Zhang
M.-J., Bredeson C.: Bone marrow transplants from
mismatched related and unrelated donors for severe
aplastic anemia. Bone Marrow Transplantation 37: 641-
649 (2006) [IF 2,643]
79. Pavlova A, El-Maarri O, Luxembourg B, Lindhoff-Last E,
Kochhan L, Bruhn HD, Delev D, Watzka M, Seifried E,
Oldenburg J (2006) Detection of heterozygous large
deletions in the antithrombin gene using multiplex
polymerase chain reaction and denatured high
performance liquid chromatography. Haematol Hematol
J, 91(9): 1264-7. [IF 4,575]
80. Prante C, Bieback K, Funke C, Schon S, Kern S, Kuhn J,
Gastens M, Kleesiek K, Gotting C: The formation of
extracellular matrix during chondrogenic differentiation of
mesenchymal stem cells correlates with increased levels
of xylosyltransferase I. Stem Cells 24: 2252-2261 (2006).
[IF 6,094]
81. Radecke F., Peter I., Radecke S., Gellhaus K., Schwarz
K., Cathomen T.: Targeted chromosomal gene
modification in human cells by single-stranded
oligodeoxynucleotides in the presence of a DNA doublestrand
break. Molecular Therapy 14: 798-808 (2006)
[IF 5,443]
82. Radecke S., Radecke F., Peter I., Schwarz K.: Physical
incorporation of a single-stranded oligodeoxynucleotide
during targeted repair of a human chromosomal locus. J.
Gene Med. 8: 217-228 (2006) [IF 3,699]
83. Ramos-Lopez E, Ghebru S, Van Autreve J, Aminkeng F,
Herwig J, Seifried E, Seidl C, Van der Auwera B,
Badenhoop K (2006) Neither an intronic CA repeat within
the CD48 gene nor the HERV-K18 polymorphisms are
associated with type 1 diabetes. TISSUE ANTIGENS,
68(2): 147-52. [IF 2,747]
84. Rehbinder B, Wullstein CH, Bechstein WO, Probst M,
Engels K, Kriener S, Döbert N, Schwarz W, Brixner V,
Steffan D, Gauer S, Geiger H, Hauser IA (2006) Epsteinbarr
virus-associated posttransplant lymphoproliferative
disorder of donor origin after simultaneous pancreaskidney
transplantation limited to pancreas allograft: A
case report. AM J TRANSPLANT, 6(10): 2506-11. [IF
6,002]
85. Richter R, Forssmann U, Henschler R, Escher S,
Frimpong-Boateng A, Forssmann WG (2006) Increase of
expression and activation of chemokine CCL15 in
chronic renal failure. BIOCHEM BIOPH RES CO, 345(4):
1504-12. [IF 3,000]
86. Ringwald, J., I. Metz, R. Zimmermann, V. Weisbach, C.
Rabe, E. Strasser, S. Seyboth, R. Eckstein: Hepatitis B
vaccination status among healthy adults in Germany.
Health Policy 2006; 79: 306 – 312 [IF 0,964]
87. Rojewski M.T., Schrezenmeier H., Flegel W.A.: Tissue
distribution of blood group membrane proteins beyond
red cells: Evidence from cDNA libraries. Transfus. Apher.
Sci. 35: 71-82 (2006) [IF 1,657]
164

Publikationen 2006
88. Rost S, Geisen C, Fregin A, Seifried E, Müller CR,
Oldenburg J (2006) Founder mutation Arg485Pro led to
recurrent compound heterozygous GGCX genotypes in
two German patients with VKCFD type 1. BLOOD
COAGUL FIBRIN, 17(6): 503-7. [IF 1,657]
89. Ruster B, Gottig S, Ludwig RJ, Bistrian R, Muller S,
Seifried E, Gille J, Henschler R (2006) Mesenchymal
stem cells (MSCs) display coordinated rolling and
adhesion behavior on endothelial cells. BLOOD,
108(12): 3938-44. [IF 10,131]
90. Schächinger V, Erbs S, Elsässer A, Haberbosch W,
Hambrecht R, Hölschermann H, Yu J, Corti R, Mathey
DG, Hamm CW, Süselbeck T, Assmus B, Tonn T,
Dimmeler S, Zeiher AM, REPAIR-AMI-
Investigators (2006) Intracoronary bone marrow-derived
progenitor cells in acute myocardial infarction. N Engl J
Med, 355(12): 1210-21. [IF 44,016]
91. Schächinger V, Erbs S, Elsässer A, Haberbosch W,
Hambrecht R, Hölschermann H, Yu J, Corti R, Mathey
DG, Hamm CW, Süselbeck T, Werner N, Haase J,
Neuzner J, Germing A, Mark B, Assmus B, Tonn T,
Dimmeler S, Zeiher AM, REPAIR-AMI-
Investigators (2006) Improved clinical outcome after
intracoronary administration of bone-marrow-derived
progenitor cells in acute myocardial infarction: final 1year
results of the REPAIR-AMI trial. EUR HEART J,
27(23): 2775-83. [IF 7,341]
92. Schächinger V, Tonn T, Dimmeler S, Zeiher AM (2006)
Bone-marrow-derived progenitor cell therapy in need of
proof of concept: design of the REPAIR-AMI trial. Nat
Clin Pract Cardiovasc Med, 3 Suppl 1: S23-8. [IF nicht
bekannt]
93. Schaefer R, Guo KT, Paul A, et al. Aptamer based
isolation of Mesenchymal Stem Cells in Comparison to
Plastic Adherence. TRANSF MED HEMOTHER Suppl 1
(33) p.2, 2006 [IF 0.449]
94. Schaefer R, Kehlbach R, Wiskirchen J, et al. Transferrin-
Receptor Up Regulation of Mesenchymal Stem Cells by
Labeling with Superparamagnetic Iron Oxide Contrast
Agent. RADIOLOGY 2006 (in press since Nov 2006) [IF
5.377]
95. Scharberg, E.A., K. Panter, J. Senne, S. Penz, E.
Richter, G. Rink, H. Klüter, P. Bugert: Serology and
molecular background of seven new RHCE alleles.
Transfusion 2006; 46 (S): 25 (A) [IF 3,160]
96. Schmidt M, Hourfar MK, Heck J, Weis C, Montag T,
Nicol SB, Seifried E (2006) ScansystemTM Enables
Rapid and Sensitive Bacterial Detection in Platelets
Stored in Additive Solution with Implementation of
Standard Positive Control Capsules. Transfus Med
Hemother, 33: 274-278. [IF 0,449]
97. Schmidt M, Hourfar MK, Nicol SB, Spengler HP, Montag
T, Seifried E (2006) FACS technology used in a new
rapid bacterial detection method. TRANSFUSION MED,
16(5): 355-61. [IF 1,396]
98. Schmidt M, Hourfar MK, Nicol SB, Wahl A, Heck J, Weis
C, Tonn T, Spengler HP, Montag T, Seifried E, Roth
WK (2006) A comparison of three rapid bacterial
detection methods under simulated real-life conditions.
TRANSFUSION, 46(8): 1367-73. [IF 3,160]
99. Schmidt M, Hourfar MK, Wahl A, Nicol SB, Montag T,
Roth WK, Seifried E (2006) Fluorescence quencher
improves SCANSYSTEM for rapid bacterial detection.
VOX SANG, 90(4): 276-8. [IF 1,888]
100. Schmidt M, Nübling CM, Scheiblauer H, Chudy M, Walch
LA, Seifried E, Roth WK, Hourfar MK (2006) Anti-HBc
screening of blood donors: a comparison of nine anti-
HBc tests. VOX SANG, 91(3): 237-43. [IF 1,888]
101. Schmidt M, Roth WK, Seifried E, Hourfar MK (2006)
Donor screening for agents of bioterror. TRANSFUSION,
46(4): 678; author reply 678-9. [IF 3,160]
102. Schmidt, C., T. Giese, B. Ludwig, M. Menges, M.
Schilling, S.C. Meuer, S. Zeuzem, and A. Stallmach.
2006. Increased cytokine transcripts in pouchitis reflect
the degree of inflammation but not the underlying entity.
Int J Colorectal Dis 21:419-426. [IF 1,749]
165
103. Schmitt M., Li L., Giannopoulos K., Chen J., Brunner C.,
Barth T., Schmitt A., Wiesneth M., Döhner K., Döhner H.,
Greiner J.: Chronic myeloid leukemia cells express
tumor-associated antigens eliciting specific CD8+ T-cell
responses and are lacking costimulatory molecules. Exp.
Hematol. 34: 1709-1719 (2006) [IF 4,019]
104. Schneider, M., P. Buchler, N. Giese, T. Giese, J. Wilting,
M.W. Buchler, and H. Friess. 2006. Role of
lymphangiogenesis and lymphangiogenic factors during
pancreatic cancer progression and lymphatic spread. Int
J Oncol 28:883-890. [IF 2,681]
105. Schrezenmeier H., Höchsmann B., Körper S., Schubert
J.: Aktuelles zur Diagnostik und Therapie der
paroxysmalen nächtlichen Hämoglobinurie.
Hämotherapie 8: 17-26 (2006) [IF nicht bekannt]
106. Schrezenmeier H., Wiesneth M., Reinhardt P., Tonn T.,
Seifried E.: Zelltherapie mit Granulozyten, Lymphozyten
und natürlichen Killerzellen. Hämotherapie 6: 4-19
(2006) [IF nicht bekannt]
107. Schuettrumpf J, Liu JH, Couto LB, Addya K, Leonard
DG, Zhen Z, Sommer J, Summer J, Arruda VR (2006)
Inadvertent germline transmission of AAV2 vector:
findings in a rabbit model correlate with those in a human
clinical trial. MOL THER, 13(6): 1064-73. [IF 5,443]
108. Schuettrumpf J, Zou J, Zhang Y, Schlachterman A, Liu
YL, Edmonson S, Xiao W, Arruda VR (2006) The
inhibitory effects of anticoagulation on in vivo gene
transfer by adeno-associated viral or adenoviral vectors.
MOL THER, 13(1): 88-97. [IF 5,443]
109. Seidl C, Schellenberg E, Sobaga L, O’Connell M, van
Kimpers P, McMillan Douglas A, Gorham M, Letowska
M, de Wit J, Seifried E on behalf of the Project’s
participants. EU-Q-Blood-SOP: Development of
European Quality Management in Transfusion Medicine.
Transfusion Today 2006; 69:8-10. [IF nicht bekannt]
110. Seifried E, Mueller MM (2006) Transfusionsmedizin
heute: Präparatesicherheit. Quo vadis 02/06:4-18. [IF
n.b.]
111. Shrikhande, S.V., J. Kleeff, H. Kayed, S. Keleg, C.
Reiser, T. Giese, M.W. Buchler, I. Esposito, and H.
Friess. 2006. Silencing of X-linked inhibitor of apoptosis
(XIAP) decreases gemcitabine resistance of pancreatic
cancer cells. Anticancer Res 26:3265-3273. [IF 1,604]
112. Simon P, Fehrenbach E, Niess AM. Regulation of
immediate early gene expression by exercise: Short cuts
for the adaptation of immune function. In: EXERC
IMMUNOL REV, Vol. 12 2006 , P. 112-131 [IF 3.467]
113. Socie G., Mary J.Y., Schrezenmeier H., Marsh J.,
Bacigalupo A., Loscasciulli A., Fuehrer M, Bekassy A.,
Tichelli A., Passweg J.: Granulocyte-stimulationg factor
and severe aplastic anemia – A survey by the European
Group for Blood and Marrow Transplantation (EBMT).
Blood [IF 10,131]
114. Sommerer, C., M. Konstandin, T. Dengler, J. Schmidt, S.
Meuer, M. Zeier, and T. Giese. 2006. Pharmacodynamic
monitoring of cyclosporine a in renal allograft recipients
shows a quantitative relationship between
immunosuppression and the occurrence of recurrent
infections and malignancies. Transplantation 82:1280-
1285. [IF 3,879]
115. Stern M., Passweg J.R., Locasciulli A., Socie G.,
Schrezenmeier H., Bekassy A.N., Fuehrer M., Hows J.,
Korthof E.T., McCann S., Tichelli A., Zoumbos N.C.,
Marsh J.C., Bacigalupo A., Gratwohl A., fort he Aplastic
Anemia Working Party of the European Group for Blood
and Marrow Transplantation: Influence of donor/recipient
sex matching on outcome of allogeneic hematopoietic
stem cell transplantation for aplastic anemia.
Transplantation 82: 218-226 (2006) [IF 3,160]
116. Su, Y., P. Buchler, A. Gazdhar, N. Giese, H.A. Reber,
O.J. Hines, T. Giese, M.W. Buchler, and H. Friess. 2006.
Pancreatic Regeneration in Chronic Pancreatitis
Requires Activation of the Notch Signaling Pathway. J
Gastrointest Surg 10:1230-1242. [IF 2,290]
117. Veltkamp, C., R. Ruhwald, T. Giese, F. Autschbach, I.
Kaden, R. Veltkamp, R.B. Sartor, and W. Stremmel.
2006. CD4+CD25+ cell depletion from the normal CD4+
T cell pool prevents tolerance toward the intestinal flora

and leads to chronic colitis in immunodeficient mice.
Inflamm Bowel Dis 12:437-446. [IF 3,012]
118. Wagner K, Hemminki K, Grzybowska E, Klaes R,
Burwinkel B, Bugert P, Schmutzler RK, Wappenschmidt
B, Butkiewicz D, Pamula J, Pekala W, Forsti A:
Polymorphisms in genes involved in GH1 release and
their association with breast cancer risk. Carcinogenesis
27: 1867-1875 (2006). [IF 5,108]
119. Wagner, C., C. Ochmann, M. Schoels, T. Giese, S.
Stegmaier, R. Richter, F. Hug, and G.M. Hansch. 2006.
The complement receptor 1, CR1 (CD35), mediates
inhibitory signals in human T-lymphocytes. Mol Immunol
43:643-651. [IF 4,307]
120. Wahl A, Karo O, Nicol SB, Lambrecht B, Spengler HP,
Nauwealers F, Schmidt M, Müller TH, Montag T (2006)
Improvement of bacteria detection by flow cytometry. J
Lab Med, 30 (6): 394-401. [IF nicht bekannt]
121. Warzecha J, Göttig S, Brüning C, Lindhorst E,
Arabmothlagh M, Kurth A (2006) Sonic hedgehog protein
promotes proliferation and chondrogenic differentiation
of bone marrow-derived mesenchymal stem cells in vitro.
J Orthop Sci, 11(5): 491-6. [IF nicht bekannt]
122. Wiehe J.M.I., Niesler C., Torzewski J., Zimmermann O.,
Wiesneth M., Schmitt M., Schwarz K., Döhner H.,
Hombach V., Greiner J.: Efficient transient genetic
labeling of human CD34+ progenitor cells for in vivo
application. Regenerative Med. 1: 223-234 (2006) [IF
nicht bekannt]
Publikationen 2006
123. Wilkening S, Bermejo JL, Burwinkel B, Klaes R, Bartram
CR, Meindl A, Bugert P, Schmutzler RK, Wappenschmidt
B, Untch M, Hemminki K, Forsti A: The single nucleotide
polymorphism IVS1+309 in mouse double minute 2 does
not affect risk of familial breast cancer. Cancer Res 66:
646-648 (2006). [IF 7,616]
124. Yu X., Wagner F.F., Witter B., Flegel W.A.: Outliers in
RhD membrane integration are explained by variant RH
haplotypes. Transfusion 46: 1343-1351 (2006) [IF 3,160]
125. Zeng J, Müller-Berghaus J, Nguyen XD, Klüter H,
Schonhaber H, Song M, Schwinn N, Schadendorf D,
Goerdt S, Eichmüller S, Dippel E: Identification of HLA
class I dependent immunogenic peptides from clonotypic
TCRbeta expressed in cutaneous T-cell lymphoma. Int J
Cancer 119: 2476-2480 (2006). [IF 4,700]
126. Zeng X., Schwarz K.: Making V(D)J rearrangement
visible: Quantification of recombination efficiency in real
time at the single cell level. Journal of Immunological
Methods 315: 133-143 (2006) [IF 2,572]
127. Zenz T., Schlenk R.F., Glatting G., Neumaier B.,
Blumstein N., Buchmann I., Harsdorf S. von, Ringhoffer
M., Wiesneth M. et al.: Bone marrow transplantation
nephropathy after an intensified conditioning regimen
with radioimmunotherapy and allogeneic stem cell
transplantation. J. Nucl. Med. 47: 278-286 (2006) [IF
4,684]
166

Wissenschaftlichen Vorträge, publizierte Abstracts
2006
1. Agildere, A.: Gewinnung und Herstellung von
Blutkomponenten. Fortbildung klinische
Transfusionsmedizin zur Erlangung der Qualifikation als
Transfusions-verantwortlicher/-beauftragter in der
Stadtklinik Baden-Baden, Baden-Baden, 08.07.2006 (V)
2. Agildere, A.: Gewinnung und Herstellung von Plasma
und Plasmaderivaten, Virusinaktivierung. Fortbildung
klinische Transfusionsmedizin zur Erlangung der
Qualifikation als Transfusions-verantwortlicher/beauftragter
in der Stadtklinik Baden-Baden, Baden-
Baden, 07.07.2006 (V)
3. Avent N.D., Martinez A., Flegel W.A., Olsson M., Nogues
N., Pisacka M., Scott M., Daniels D., de Haas M.: The
BloodGen project: toward mass scale genotyping for
human blood group antigens. Vox Sang. 91(suppl 3)33-
34 (2006)
4. Baila S, Furlan Freguia C, Dunn D, Mingozzi F,
Schuettrumpf J, Arruda VR. Protease-Activated Receptor
2 as a Novel Target for Immune Modulation for AAV-
Mediated Gene Transfer to Skeletal Muscle. ASGT
Baltimore, 2006 (V)
5. Baila S, Furlan Freguia C, Iacobelli N, Dunn D,
Schuettrumpf J, Mingozzi F, Andrade-Gordon P, Arruda
VR. Protease-Activated Receptor 2 (PAR-2) as a Novel
Target To Prevent Inhibitor Formation to FIX. Blood 108:
229a, ASH Orlando 2006 (V)
6. Berberat P, H Friess, C Flechtenmacher, S Meuer, T
Giese:Gene Expression in Postperfusion Biopsies
Predicts Early Graft Dysfunction After Liver
Transplantation. FOCIS 6th ANNUAL MEETING June 1-
5, 2006 • San Francisco Marriott • San Francisco (P)
7. Beyer M, Kochanek M, Weihrauch MR, Giese T, Endl E,
Knolle PA, Classen S, Schultze Jl:Dynamics Of
Cd4+Cd25highfoxp3+ Regulatory T Cells During Tumor
Progression Revealed in Monoclonal Gammopathy of
Unknown Significance And Multiple Myeloma.16 th
European Congress of Immunology, Paris, September 6-
9, 2006 (P)
8. Braunstein J, Autschbach F, Giese T, Lasitschka F,
Heidtmann A, Sido B, Schroeder A, Nebl G, Samstag Y,
Meuer S: Up-Regulation of the Pi-3 Kinase Pathway In
Lamina Propria T Lymphocytes. 16 th European
Congress of Immunology, Paris, September 6-9, 2006
(P)
9. Cario H., Rives Sola S., Neusuess A., Kohne E.,
Schwarz K.: Molecular analyses in familial and sporadic
congenital primary erythrocytosis. 11 th Congress of the
European Hematology Association (EHA), Amsterdam,
15–18 June 2006. haematologica – the hematology
journal 91 (S1): 352 (Abstract No. 0964) (2006) (V)
10. Chen J., Schmitt A., Chen B., Rojewski M., Greiner J.,
Guillaume P., Döhner H., Bunjes D., Schmitt M.: Imatinib
inhibits both CD4+ regulatory cells and CD8+ T
lymphocytes specifically directed against the leukemiaassociated
antigen RHAMM/CD168. 48 th Annual Meeting
of the American Society of Hematology (ASH), Orlando,
9-12 December 2006. Blood 108 (11, Part 1): 624a
(Abstract No. 2201) (2006)
11. Danzer M., Polin H., Schröder S., Mytilineos J., Gabriel
C.: HLA-Cw*0740, a new allele mistyped by generic
deuencing and identified by allelic separation. 14.
Jahrestagung der Deutschen Gesellschaft für
Immungenetik (DGI), Innsbruck, 12.-14. November 2006
(Abstract N. A13) (A)
12. Dengler, T.: Epidemiologie der Blutspender in Baden-
Württemberg – Hessen, Ergebnisse 2005. Arbeitskreis
Hämotherapie am Institut Baden-Baden, Baden-Baden,
29.06.2006 (V)
13. Dengler, T.: Qualitätskontrolle von Blutprodukten und
Eigenblutpräparaten. Fortbildung klinische
Transfusionsmedizin zur Erlangung der Qualifikation als
167
Transfusions-verantwortlicher/-beauftragter in der
Stadtklinik Baden-Baden, Baden-Baden, 08.07.2006 (V)
14. Dengler, T.: Vergleich der epidemiologischen Daten des
DRK-Blutspendedienstes Baden-Wüttemberg – Hessen
2005. Transfusionsmedizinische Fortbildung am Institut
Baden-Baden, Baden-Baden, 23.03.2006 (V)
15. Drexler C.,M. Bayer,M. Riegelnegg,M. Schmidt, S.
Sipurzynski, M. Vadon, G. Lanzer: Should anti-HBc be
introduced in the screening of blood donations?, 2006
DGTI, Frankfurt, 20.09.2006 (P)
16. Findhammer S., Schellenberg E., Koerner K., Karl A.,
Wiesneth M., Seifried E., Sireis W.: Implementation of an
Error-Risk-Management Reporting System (ERMS) at
the Red Cross Blood Donor Service Baden-
Württemberg-Hessen – First results. 39 th Annual
Congress of the German Society for Transfusion
Medicine and Immunohematology (DGTI), Frankfurt, 19-
22 September 2006. Transfus. Med. Hemother. 33 (S1):
16 (Abstract No. OS6.8) (2006) (V)
17. Flach C., Mytilineos J.: Unterschiedliche HLA-
Antikörpernachweismethoden und ihre Interpretation. 14.
Jahrestagung der Deutschen Gesellschaft für
Immungenetik (DGI), Innsbruck, 12.-14.10.06 (Abstract
No. M1) (V)
18. Flegel W.A., Lüttringhaus T.A., Cho D., Ryang D.: Easy
RHD genotyping in D negative East Asian blood donors.
AABB Annual Meeting, Miami Beach, 21-24 October
2006. Transfusion 46 (9S): 140A (Abstract No. SP321)
(2006) (P)
19. Flegel W.A.: Aktuelle Aspekte des Rhesus Blutgruppen-
Systems. Blutspendezentrale Zürich, Zürich, Schweiz.
13.6.2006 (V)
20. Flegel W.A.: Blood group genotyping in Germany. FDA
Workshop on Molecular Methods in Immunohematology.
NIH Lister Hill Center, Bethesda, MD, USA. 25.9.2006
(V)
21. Flegel W.A.: Current applications of RHD genotyping in
patients and blood donors. Australian Red Cross Blood
Service. Blood Center Melbourne. Melbourne,
Australien. 4.8.2006 (V)
22. Flegel W.A.: DNA analysis vs. serology (Organization
and Chairperson of 3 h seminar). 59th Annual Meeting,
American Association of Blood Banks. Miami Beach, FL,
USA. 24.10.2006 (V)
23. Flegel W.A.: Erythrozytenantigene: klinische Bedeutung.
Transfusionsmedizinisches Seminar für Ärzte in der
Weiterbildung zur Transfusionsmedizin der DGTI und
des BDT. Veranstalter: Prof. G. Bein, Bielefeld.
15.05.2006 (V)
24. Flegel W.A.: Immunohematology I: Erythrozytenantigene
(Vorsitz einer Sitzung). 39. Kongress der Deutschen
Gesellschaft für Transfusionsmedizin und
Immunhämatologie. Frankfurt 20.09.2006 (V)
25. Flegel W.A.: Molecular genetics of RH and its clinical
application (Eröffnungsvortrag). International Conference
on Rh protein superfamily. Paris, Frankreich, 4.5.2006
(V)
26. Flegel W.A.: Molekulare Genotypisierung von RH: Ein
Erfahrungsbericht aus Deutschland. 1. Internationales
RHESUS-Forum der Fa. Ortho-Clinical Diagnostics,
Heidelberg, 28.05.06 (V)
27. Flegel W.A.: Rhesus-Blutgruppensystem: Klinische
Bedeutung. 39. Jahreskongress der Deutschen
Gesellschaft für Transfusionsmedizin und
Immunhämatologie (DGTI), Frankfurt, 20.09.06 (V)
28. Flegel W.A.: Spezielle Methoden in der Rhesus-D-
Bestimmung: Indikationen und Aussagekraft. 39.
Jahreskongress der Deutschen Gesellschaft für
Transfusionsmedizin und Immunhämatologie (DGTI),
Frankfurt, 21.09.06 (V)

29. Flegel W.A.: What to do about weak D: a European
perspective (45 min). 59th Annual Meeting, American
Association of Blood Banks. Miami Beach, FL, USA.
24.10.2006 (V)
30. Flegel, W.A., Westhoff, C., Tani, Y., Poole, G., Tissot, J.-
D.: Molecular genotyping for Rh: Panel discussion
(Moderator, 60 min). Ortho-W.I.R.E. Forum. Heidelberg.
18.5.2006 (V)
31. Flegel, W.A.: Blood group genotyping and its clinical
implications. The Institute for Transfusion Medicine,
Dept. Pathology, University of Pittsburgh. Host: Darrell
Triulzi, Pittsburgh, PA, USA. 1.11.2006 (V)
32. Flegel, W.A.: Genetik und Physiologie der Blutgruppen.
Institut für Tropenmedizin, Universität Tübingen.
Veranstalter: Prof. Dr. med. P. G. Kremsner, Tübingen.
23.11.2006 (V)
33. Flegel, W.A.: Introduction to molecular genotyping (30
min). Ortho-W.I.R.E. Forum. Heidelberg, 18.5.2006 (V)
34. Flegel, W.A.: Molecular genotyping for Rh: the German
experience (40 min). Ortho-W.I.R.E. Forum. Heidelberg,
18.5.2006 (V)
35. Flegel, W.A.: Perspectives in Rh: Molecular genotyping
for Rh blood groups and its impact on transfusion
medicine (Organization and Chairperson of 8 h seminar).
Ortho-W.I.R.E. Forum. Heidelberg. Video streaming:
http://www.ortho-wire.com/resource-center/orthoforum.cfm
18.5.2006 (V)
36. Flegel, W.A.: weak D and its clinical implications. XXXVII
Convegno nazionale di Studi di medicina trasfusionale.
Paestum, Italien 7.10.2006 (V)
37. Furlan Freguia C, Schuettrumpf J, Baila S, Liu JH, Bunte
R, Camire RM, Arruda VR. Effects of Continuous
Expression of Activated Protein C (APC) in Novel Murine
Thrombosis Models. ASGT Balitmore, 2006 (P)
38. Furlan Freguia C, Schuettrumpf J, Baila S,
Schlachterman A, Zou J, Zhou S, Arruda VR.
Differences in the Anticoagulant Activity of Murine and
Human Activated Protein C (APC) in Mouse Thrombosis
Models. Blood 108: 425a, ASH Orlando 2006 (P)
39. Geisen C (2006) Vitamin K-Zyklus- Molekulargenetik und
Bedeutung von VKORC1. 14. Rostocker Symposium
über Klinische Probleme in der Hämostaseologie,
Rostock/Warnemünde, 2. September 2006 (V)
40. Geisen C, Luxembourg B, Watzka M, Sittinger K,
Steffens M, Müller CR, Wienker TF, Lindhoff-Last E,
Seifried E, Oldenburg J (2006) Vitamin K Epoxide
Reductase (VKORC1) haplotypes and their impact on
the pharmacogenetics of oral anticoagulation.
Gemeinsame Jahrestagung der DGHO,ÖGHO und
SGMO, Leipzig, 04. - 08. November. 2006 (V)
41. Geisen C, Watzka M, Sittinger K, Luxembourg B,
Steffens M, Müller CR, Wienker TF, Lindhoff-Last E,
Seifried E, Oldenburg J (2006) Pharmacogenetics of
oral anticoagulation – VKORC1-haplotypes determine
the inter-individual and inter-ethnical variability. 39.
Jahreskongress der Deutschen Gesellschaft für
Transfusionsmedizin und Immunhämatologie (DGTI),
Frankfurt, 19.-22. September. 2006 (V)
42. Geisen C, Watzka M, Sittinger K, Luxembourg B,
Steffens M, Müller CR, Wienker TF, Lindhoff-Last E,
Seifried E, Oldenburg J (2006) Pharmacogenetics of
oral anticoagulation - VKORC1-haplotypes determine the
inter-individual and inter-ethnical variability. 48th Annual
Meeting of the American Society of Hematology (ASH),
Orlando, 9-12. Dezember 2006. Blood108:216a (V)
43. Geisen C, Luxembourg B, Watzka M, Steffens M, Müller
CR, Wienker TF, Lindhoff-Last E, Seifried E, Oldenburg
J (2006) VKORC1 haplotypes determine the interindividual
and inter-ethnical variability of oral
anticoagulation. 50. Jahrestagung der Deutschen
Gesellschaft für Thrombose und Hämostaseforschung
(GTH), Basel, 15.-18.Februar 2006 (V)
44. Geisen C, Luxembourg B, Watzka M, Steffens M, Müller
CR, Wienker TF, Lindhoff-Last E, Seifried E, Oldenburg
J (2006) Pharmakogenetik der Coumarintherapie -
Macht genetische Diagnostik die Therapie sicherer?
Wissenschaftlichen Vorträge, publizierte Abstracts 2006
Jahrestagung der IGLD, Göttingen, 30.-31. März 2006
(V)
45. Geisen C, Luxembourg B, Watzka M, Steffens M, Müller
CR, Wienker TF, Lindhoff-Last E, Seifried E, Oldenburg
J (2006) Pharmakogenetik der oralen Antikoagulation -
VKORC1-Haplotypen determinieren die inter-individuelle
und inter-ethnische Variabilität der Wirksamkeit von
Vitamin K-Antagonisten. 35. Jahrestagung der DGA,
Dresden, 6. - 9. September 2006 (V)
46. Geisen C, Rost S, Spohn G, Fregin A, Watzka M,
Dimichele DM, Haubelt H, Heistinger M, Kadar J,
Kemkes-Matthes B, Lages P, Lindhoff-Last E,
Luxembourg B, Pollmann H, Zimmermann R, Müller CR,
Seifried E, Oldenburg J (2006) Various missense
mutations in the Vitamin K Epoxide Reductase Complex
Subunit 1 (VKORC1) cause hereditary Coumarin
resistance. 50. Jahrestagung der Deutschen
Gesellschaft für Thrombose und Hämostaseforschung
(GTH), Basel, 15.-18. Februar 2006 (V)
47. Geisen C, Schwind P, Seifried E. (2006) Performance
evaluation of a novel lateral flow device for rapid multiparameter
blood grouping without centrifugation. 39.
Jahreskongress der Deutschen Gesellschaft für
Transfusionsmedizin und Immunhämatologie (DGTI),
Frankfurt, 19.-22. September. 2006. Transfus Med
Hemother, 33 (suppl. 1), 49 (P)
48. Geisen C, Schwind P, Seifried E. (2006) Performance
Evaluation Study of a Novel Lateral Flow Assay for
Simultaneous Typing of ABO, D, Rhesus Subgroups and
K ("MDmulticard"). ISBT, Capetown, 01.09.2006. Vox
Sang (P)
49. Geisen C, Schwind P, Seifried E. (2006) Rapid multiparameter
blood grouping without centrifugation -
performance evaluation with donor, patient and neonatal
samples. 59th Annual Meeting, American Association of
Blood Banks (AABB), Miami Beach, USA, 24. Oktober.
2006. Transfusion 46, (9S), 143A (P)
50. Giese T, C Sommerer, M Zeier and S Meuer:
Pharmacodynamic monitoring of calcineurin inhibitors by
quantitative analysis of NFAT-regulated gene
expression. 7 th International Conference on New
Trends in Immunosuppression and Immunotherapy,
Berlin, February 16-19, 2006 (P)
51. Giese T: Wie stark sollte das Immunsystem nach
Transplantation unterdrückt werden? DGKL, Mannheim
1.-4. Oktober 2006 (V)
52. Greiner J., Torzewski J., Ponsaerts P., Rojewski M.T.,
Kronawitter D., Schrezenmeier H., Hombach V., Döhner
H., Schmitt M., Wiesneth M., Zimmermann O., Wiehe
J.M.: Highly efficient mRNA- and cDNA-based transient
gene delivery into human progenitor cells. 48th Annual
Meeting of the American Society of Hematology (ASH),
Orlando, 9-12 December 2006. Blood 108 (11, Part 2):
464b (Abstract No. 5471) (2006) (P)
53. Greiner J., Wiehe J., Ponsaerts P., Rojewski M.,
Homann J., Kronawitter D., Schrezenmeier H., Hombach
V., Wiesneth M., Zimmermann O., Torzewski J.: Highly
efficient mRNA- und cDNA-based gene delivery into
human progenitor cells. Gemeinsame Jahrestagung der
Deutschen, Österreichischen und Schweizerischen
Gesellschaften für Hämatologie und Onkologie (DGHO),
Leipzig, 4. – 8. November 2006. Onkologie 29(S3): 60
(Abstract No. V355) (2006) (V)
54. Heinz S, Went D, Bott D, Roth S, Seifried E, Tonn T.
Improvement of recombinant FVIII expression in
monocytic and megakaryocytic lineage hematopoietic
cells through introduction of FXIIIA regulatory elements.
50. Jahrestagung der Deutschen Gesellschaft für
Thrombose- und Hämostaseforschung (GTH), Basel,
15.-18. Februar 2006 (V)
55. Heinz S, Went D, Bott D, Seifried E, Tonn T. Enhanced
Recombinant Expression of FVIII in 293T and
Hematopoetic Cells Using an Expression Vector
Containing the FXIIIA 5‘ Untranslated Region. 39.
Jahrestagung der Deutschen Gesellschaft für
Transfusionsmedizin und Immunhämatologie (DGTI)
e.V. zusammen mit der International Society for Cell
Therapy – EUROPE. (ISCT-Europe) 19.-22.September
2006 (V).
168

Wissenschaftlichen Vorträge, publizierte Abstracts 2006
56. Heinz S, Went D, Bott D, Seifried E, Tonn T. mRNA-
Stabilisation as a tool to improve recombinant FVIII
expression. 13. Jahrestagung der Deutschen
Gesellschaft für Gentherapie (DG-GT), Düsseldorf, 12.–
14. Juli 2006 (P).
57. Herberth G, Daegelmann C, Weber A, Roeder S, Giese
T, Kraemer U, Schins R, Behrendt H, Borte M, Lehmann
I: Association Between Neuropeptides, Th1/Th2
Polarization And Allergy Risk In Children. 16 th
European Congress of Immunology, Paris, September 6-
9, 2006 (P)
58. Hillmen P., Muus P., Dührsen U., Risitano A., Schubert
J., Young N.S., Schrezenmeier H., Szer J., Brodsky
R.A., Hill A., Socié G., Rollins S.A., Rother R.P.: The
terminal complement inhibitor eculizumab reduces
thrombosis in patients with paroxysmal nocturnal
hemoglobinuria. 48th Annual Meeting of the American
Society of Hematology (ASH), Orlando, 9-12 December
2006. Blood 108 (11, Part 1): 40a (Abstract No. 123)
(2006) (V)
59. Hirv K., Fischer M., Müller C., Schrezenmeier H.,
Mytilineos J.: Unrelated blood stem cell donor search
duration and success rate in association with HLA-DRB1
allele frequencies and DRB1-DQB1 linkage
disequilibrium. Gemeinsame Jahrestagung der
Deutschen, Österreichischen und Schweizerischen
Gesellschaften für Hämatologie und Onkologie (DGHO),
Leipzig, 4. – 8. November 2006. Onkologie 29(S3): 110
(Abstract No. P537) (2006) (P)
60. Hirv K., Merz A., Schrezenmeier H., Mytilineos J.: High
resolution HLA-A-, -B and Cw typing with an allele
group-specific sequencing approach in hematopoietic
stem cell transplant patients and their unrelated donors.
39th Annual Congress of the German Society for
Transfusion Medicine and Immunohematology (DGTI),
Frankfurt, 19-22 September 2006. Transfus. Med.
Hemother. 33 (S1): 53 (Abstract P7.2) (2006) (P)
61. Hirv K., Mytilineos J.: Die Häufigkeit und
Charakterisierung neuer HLA-Allele. 14. Jahrestagung
der Deutschen Gesellschaft für Immungenetik (DGI),
Innsbruck, 12.-14.10.06 (Abstract No. P1) (P)
62. Hirv K.: Die Häufigkeit und Charakterisierung neuer
HLA-Allele. Forschungsseminar des DRK-
Blutspendedienstes. Karlsruhe, 17. 11.2006. (V)
63. Hirv K.: Erfahrungen mit LABType� SSO für HLA-DRB1
und -DQB1. Vortrag auf der DGI-
Fortbildungsveranstaltung: Molekularbiologische
Methoden in der HLA-Diagnostik. Essen, 30.03.2006. (V)
64. Hirv K.: HLA-Klasse I Sequenzierung - Erfahrungen aus
Ulm. HLA-Kurs „Typisierungsstrategien für die
hochauflösende HLA-Typisierung. Wien, 14. 12.2006.
(V)
65. Hirv K.: HLA-Typisierungsstrategien - Sequenzierung.
Vortrag auf der DGI-Weiterbildungsveranstaltung:
Typisierungsstrategien in der Hochauflösung von HLA
Klasse I. Ulm, 16.03.2006. (V)
66. Hirv K.: Kriterien zur Suche allogener
Blutstammzellspender. 4. DGI Histokompatibilitäts
Workshop. Birkenfeld, 27.04.2006. (V)
67. Hirv K.: Methoden zur HLA-Typisierung. 4. DGI
Histokompatibilitäts Workshop. Birkenfeld, 27.04.2006.
(V)
68. Hirv K.: Methoden zur HLA-Typisierung. Workshop
„Blutstammzelltransplantation“ des Berufsverbandes
Deutscher Transfusionsmediziner. Ulm, 31.03.2006. (V)
69. Höchsmann B., Schauwecker P., Fischer C., Storch A.,
Schrezenmeier H., Huber R., Wiesneth M.: No significant
increase of circulating CD34+ cells in patients after
ischemic stroke. 11th Congress of the European
Hematology Association (EHA), Amsterdam, 15-18 June
2006. haematologica – the hematology journal 91 (S1).
464 (Abstract No. 1297) (2006) (P)
70. Hönig M., Albert M., Schulz A., Sparber-Sauer M.,
Schütz C., Belohradsky B., Schwarz K., Rojewski M.,
Bode H., Debatin K.-M. und Friedrich W.: Neurologische
Komplikationen nach Stammzelltransplantation bei
Kindern mit SCID bei ADA-Mangel. 102. Jahrestagung
der Deutschen Gesellschaft für Kinder- und
169
Jugendmedizin (DGKJ), Mainz, 14.-17. September 2006
(Abstract No. DGKJ-VO-11) (2006) (V)
71. Hönig M., Schulz A., Schütz C., Friedrich W., Kersten T.,
Pannicke U. und Schwarz K.: Somatic reversion of
lymphocyte subpopulations after HSCT in a patient with
JAK3 deficiency. 12. Meeting of the European Society
for Immunodeficiencies (ESID), Budapest, 4.-7. Oktober
2006 (Abstract No. J10) (2006) (P)
72. Hönig M., Schulz A.., Lahr G., Heinrich K., Pannicke U.,
Schwarz K. und Friedrich W.: IL7RA defieciency: typical
and atypical cases. Vortraag auf der 23. Jahrestagung
der Arbeitsgemeinschaft Pädiatrische Immunologie
(API). Ittingen, 19.05.06 (V)
73. Hourfar M. K., A. Themann, V. Brixner, E. Seifried, M.
Schmidt HIGHLY SENSITIVE AND FULLY
AUTOMATED HBV DNA EXTRACTION WITH THE
QIAGEN BIOROBOT MDX TO INDENTIFY CHRONIC
HBV CARRIERS., 2006 ISBT, Capetown 01.09.2006 (P)
74. Hourfar M. K., K.W. Roth,V. Schottstedt, C. Jork,
M.Weber-Schehl, C. Mahnhard, U. Mayr-Wohlfahrt, K.
Gubbe,V. Brixner,M. Schmidt, E. Seifried The German
Red Cross NAT-Study: Results of screening more than
30 Million Blood Donations for HIV-1, HCV and HBV.
2006 DGTI, Frankfurt, 20.09.2006 (V)
75. Hourfar M. K.,M. Koller, R. Kehrli, E. Seifried,M.
Schmidt, Tecan TE-Poolsafe balance module allows
monitoring of the pooling process for NAT-Testing, 2006
DGTI, Frankfurt, 20.09.2006 (V)
76. Hourfar M. K.,V. Brixner, E. Seifried,M. Schmidt Highly
sensitive and fully automated HBV DNA extraction with
the Qiagen BioRobot MDx to indentify chronic HBV
carriers, 2006 DGTI, Frankfurt, 20.09.2006 (V)
77. Hourfar M. K.1, M. Koller2, R. Kehrli2, A. Themann1,
W.K. Roth1, E. Seifried1, M. Schmidt1:TECAN TE-
POOLSAFE(TM) BALANCE MODULE ALLOWS
MONITORING OF THE POOLING PROCESS FOR
NAT-TESTING, 2006 ISBT, Capetown 01.09.2006 (P)
78. Hourfar M.K., Roth W.K., Schottstedt V., Jork C., Weber-
Schehl M., Mahnhard C., Mayr-Wohlfart U., Gubbe K.,
Brixner V., Schmidt M., Seifried E.: The German Red
Cross NAT-Study: Results of screening more than 30
million blood donations for HIV-1, HCV and HBV. 39th
Annual Congress of the German Society for Transfusion
Medicine and Immunohematology (DGTI), Frankfurt, 19-
22 September 2006. Transfus. Med. Hemother. 33 (S1):
14 (Abstract No. OS6.3) (2006) (V)
79. Hourfar M.K.1, C. Pfleiderer2, J. Eckert1, A. Themann1,
E. Seifried1, M. Nuebling2, M. Schmidt1 RESULTS OF
NAT- AND ANTIBODY-SCREENING FOR WEST NILE
VIRUS IN GERMANY AND AUSTRIA, 2006 ISBT,
Capetown 01.09.2006 (P)
80. Hourfar M.K.1, W.K. Roth1, A. Themann1, K. Gubbe2,
U. Mayr-Wohlfart3, E. Seifried1, M. Schmidt1
EXPERIENCE OF A LARGE GERMAN RED CROSS
BLOOD DONOR SERVICE WITH NAT-TESTING:
RESULTS OF SCREENING MORE THAN 9 MILLION
BLOOD DONATIONS FOR HIV-1, HCV AND HBV, 2006
ISBT, Capetown 01.09.2006 (P)
81. Hügle B., Suchowerskyj P., Ehl S., Schwarz K., Roesler
J., Schuster V.: An unususal case of Autoimmune
Lymphoproliferative Syndrome Type III. Vortrag auf der
23. Jahrestagung der Arbeitsgemeinschaft Pädiatrische
Immunologie (API). Ittingen, 19.05.06 (V)
82. IMPLEMENTATION OF ANTI-HBC-TESTING INTO
BLOOD DONOR SCREENING IN GERMANY, 2006
ISBT, Capetown 01.09.2006 (P)
83. Kalwak K., Owoc-Lempach J., Schwarz K., Van der Burg
M., Pannicke U., Van Dongen J.J.M., Pituch,-
Noworolska A., Zembala M., Gorczyska E., Turkiewicz
D. und Chybicka A.: Successful HLA-mismatched
unrelated hematopoietic stem cell transplantation in two
brothers with atypical t-B-SCID due to hypomorphic RAG
mutations. 12. Meeting of the European Society for
Immunodeficiencies (ESID) Budapest, 4.-7. Oktober
2006 (Abstract No. J5) (2006). (P)
84. Köninger J, Bartel M, Giese T, Büchler M, Friess H,
Giese N.: Structural Elements of Stroma are Linking
Desmoplasia, Inflammation and Tumor Cell Behaviour In

Wissenschaftlichen Vorträge, publizierte Abstracts 2006
Pancreatic Cancer. 16 th European Congress of
Immunology, Paris, September 6-9, 2006 (V)
85. Köninger J, Bartel M, Giese T, Büchler M, Friess H,
Giese N.: Structural Elements of Stroma are Linking
Desmoplasia, Inflammation and Tumor Cell Behaviour In
Pancreatic Cancer. 16 th European Congress of
Immunology, Paris, September 6-9, 2006 (V)
86. Konstandin M, M Schoels, T Dengler, S Meuer, T Giese:
Pharmacodynamic Monitoring of Cyclosporine by
Suppression of NFAT Regulated Gene Expression in
Peripheral Blood Cells of Cardiac Allograft Recipients on
Standard and Reduced Dosage Regimens Allows
Prediction of Infections. FOCIS 6th ANNUAL MEETING
June 1-5, 2006 • San Francisco Marriott • San Francisco
(P)
87. Konstandin M, Sommerer C, Dengler T, Zeier M, Meuer
S, Giese T: Pharmacodynamic Monitoring of Calcineurin
Inhibitors Predicts The Risk of Infection Due To
Excessive Immunosuppression of Transplanted Patients.
16 th European Congress of Immunology, Paris,
September 6-9, 2006 (P)
88. Körper S., Baur G., Notter M., Schrezenmeier H.:
Openers of mitochondrial K+ channels induce growth
inhibition and downregulation of differentiation markers
in haemopoietic cells. 32nd Annual Meeting of the
European Group for Blood and Marrow Transplantation
(EBMT), Hamburg, 19-22 March 2006. Bone Marrow
Transplantation 37 (Suppl. 1): S37 (Abstract No. O264)
(2006) (V)
89. Körper S., Baur G., Schrezenmeier H.: The
mitochondrial ATP dependent K+ channel regulates
growth and differentiation of hematopoietic cells. 39th
Annual Congress of the German Society for Transfusion
Medicine and Immunohematology (DGTI), Frankfurt, 19-
22 September 2006. Transfus. Med. Hemother. 33 (S1):
1 (Abstract No. OS1.2) (2006) (V)
90. Krause M., A. Carlebach , W. Miesbach, S. Staszewski,
R. Grossmann. Effektivität von pegyliertem Interferon
und Ribavirin in der Hepatitis C Therapie bei hämophilen
Patienten bei Koinfektion mit HIV. Hämophilie
Symposium Hamburg, 10. - 11. 11. 2006 (P)
91. Krause M., C. Kessel, C. von Auer, W. Kreuz, I. Scharrer
, C. Königs. Epitope mapping of inhibitory antibodies and
inhibitor elimination with rituximab in patients with
acquired haemophilia. Jahrestagung der GTH Basel, 15.
02. – 18 . 02. 2006 (P)
92. Krause M., C. Königs, C. Kessel, I. Scharrer, R.
Grossmann, W. Kreuz. Response to anti CD20
monoclonal antibody rituximab and epitope mapping of
inhibitory antibodies in patients with acquired
haemophilia. World Congress WFH, Vancouver, 21. 05.
– 25. 05. 2006. (P)
93. Krause M., C. Königs, C. Kessel, I. Scharrer, R.
Grossmann, W. Kreuz. Response to anti CD20
monoclonal antibody rituximab and epitope mapping of
inhibitory antibodies in patients with acquired
haemophilia. ASH 2006, 12/2006. (P)
94. Krause M., C. Königs, C. Kessel, I. Scharrer, W. Kreuz,
R. Grossmann. Ansprechen des monoklonalen anti- CD
20 Antikörpers Rituximab und Epitopenmapping von
Antikörpern bei Patienten mit erworbener
Hemmkörperhämophilie. DGTI Frankfurt, 21.09.2006.
(V)
95. Krause M., C. v.Auer, L. Hovy, I. Scharrer, A. Kurth.
Evaluation of thrombotic events in hemophiliacs
undergoing major orthopaedic surgery without
thrombosis prophylaxis. World Congress WFH,
Vancouver, 21. 05. – 25. 05. 2006. (P)
96. Krause M., C. von Auer, G. Ashmelash, L. Hovy , I.
Scharrer, A. Kurt. Evaluierung thromboembolischer
Ereignisse bei Patienten mit Hämophilie und ‚großen‘
orthopädischen Operationen ohne
Thromboseprophylaxe. Jahrestagung der GTH Basel,
15. 02. – 18 . 02. 2006 (P)
97. Krause M., K. Hochmuth, N. Huckschlag, I. Scharrer, A.
Kurth. Frequency of osteoporosis and osteopenia in
patients with haemophilia A and B. World Congress
WFH, Vancouver, 21. 05. – 25. 05. 2006. (P)
98. Locasciulli A., Oneto R., Bacigalupo A., Socié G.,
Korthof E., Bekassy A., Passweg J., Schrezenmeier H.,
Führer M.: Acquired aplastic anaemia: current outcome
of bone marrow transplantation and immunosuppression:
a report from the Severe Aplastic Anaemia Working
Party of the European Blood and Marrow Transplant
Group (SAA-WP EBMT). 32nd Annual Meeting of the
European Group for Blood and Marrow Transplantation
(EBMT), Hamburg, 19-22 March 2006. Bone Marrow
Transplantation 37 (Suppl. 1): S41 (Abstract No. 301)
(2006) (V)
99. Locasciulli A., Oneto R., Bacigalupo A., Socié G.,
Korthof E., Bekassy A., Schrezenmeier H., Passweg J.,
Führer M. on behalf of the Severe Aplastic Anemia
Working Party of the European Group for Blood and
Marrow Transplantation (EBMT): Outcome of patients
with aplastic anemia given first line transplantation or
immunosuppression in the last decade: A report from
European Group of Blood and Marrow Transplantation
(EBMT). 48th Annual Meeting of the American Society of
Hematology (ASH), Orlando, 9-12 December 2006.
Blood 108 (11, Part 1): 20a (Abstract No. 52) (2006) (V)
100. Mailänder V., Hennel E., Rojewski M., Wiesneth M.,
Schrezenmeier H.: Mechanism of immunosuppression
by mesenchymal stem cells of normal adults and aplastic
anemia patients. 39th Annual Congress of the German
Society for Transfusion Medicine and
Immunohematology (DGTI), Frankfurt, 19-22 September
2006. Transfus. Med. Hemother. 33 (S1): 7 (Abstract No.
OS3.5) (2006) (V)
101. Mailänder V., Lorenz M., Schmitz B., Musyanovych A.,
Holzapfel V., Landfester K., Aschoff A., Wiesneth M.,
Schrezenmeier H.: Methods and tools for labelling
cellular therapeutics for MRI detection. 32nd Annual
Meeting of the European Group for Blood and Marrow
Transplantation (EBMT), Hamburg, 19-22 March 2006.
Bone Marrow Transplantation 37 (Suppl. 1): S63
(Abstract No. P387) (2006) (P)
102. Mailänder V.: Markierung von Stammzellen: Methoden
und Grenzen. Institutsseminar Mannheim, 24.05.06. (V)
103. Mailänder: Regenerative Therapie beim Myokardinfarkt:
Ergebnisse der Präparation der ersten Patienten. Workin-Progress
der Abteilung Transfusionsmedizin,
Universitätsklinikum Ulm, 05.07.06 (P)
104. Marx M., Schauwecker P., Höchsmann B., Harsdorf
S.V., Bunjes D., Schrezenmeier H., Wiesneth M.:
Monitoring of engraftment and relapse after allogeneic
hematopoietic stem cell transplantation based on lineage
specific short-tandem-repeat chimerism. 39th Annual
Congress of the German Society for Transfusion
Medicine and Immunohematology (DGTI), Frankfurt, 19-
22 September 2006. Transfus. Med. Hemother. 33 (S1):
36 (Abstract No. P1.3) (2006) (P)
105. Marx M.: Linienspezifische STR-basierte
Chimärismusanalyse nach allogener
Stammzelltransplantation. Work-in-Progress der
Abteilung Transfusionsmedizin, Universitätsklinikum
Ulm, 22.11.06 (V)
106. Matthes, G., I. Eichhorn, K. Schnurr: Tumor screening of
donor look-back samples by Electron Spin Resonance
Spectroscopy (ESR/EPR). 39. Jahrestagung der DGTI,
Frankfurt/M., 19.-22.09.2006 (P)
107. Merz A., Mytilineos J.: Zytokingenpolymorphismen bei
Patienten mit AML, ALL und CML. 14. Jahrestagung der
Deutschen Gesellschaft für Immungenetik (DGI),
Innsbruck, 12.-14.10.06 (Abstract No. P9) (P)
108. Merz A., Skambraks A., Schrezenmeier H., Mytilineos J.:
A PCR-SSP method for NOD2/CARD15 gene 3 SNP
analysis. 39th Annual Congress of the German Society
for Transfusion Medicine and Immunohematology
(DGTI), Frankfurt, 19-22 September 2006. Transfus.
Med. Hemother. 33 (S1): 53 (Abstract P7.3) (2006) (P)
109. Meuer S: Klinische Konsequenzen der individuellen
Dosisanpassung von Calcineurininhibitoren DTG,
Münschen 20.10,2006 (V)
110. Miesbach W., B. Lugallio, A. Vogel, G. Asmelash, I.
Scharrer. A Successful Liver Transplant in a Patient with
Anti-Thrombocytic Antibodies and Severe Haemophilia
170

Wissenschaftlichen Vorträge, publizierte Abstracts 2006
171
A. World Congress WFH, Vancouver, 21. 05. – 25. 05.
2006. (P)
111. Miesbach W., C. von Auer, I. Scharrer, R. Grossmann.
Erfolgreiche Lebertransplantation bei zwei Patienten mit
schwerer Hämophilie A. Hämophilie Symposium
Hamburg, 10. - 11. 11. 2006 (P)
112. Miesbach W., C. von Auer, I. Scharrer. The occurrence
of a factor VIII inhibitor in a patient with mild Haemophilia
A during treatment for chronic hepatitis C with interferon.
World Congress WFH, Vancouver, 21. 05. – 25. 05.
2006. (P)
113. Miesbach W., F. Abdallah, M. Boehm, G. Asmelash, W.
Mwanda, I. Scharrer. Experiences during two years of
Twinning Frankfurt-Nairobi. World Congress WFH,
Vancouver, 21. 05. – 25. 05. 2006. (P)
114. Miesbach W., K. Klingenberg, C. von Auer, I. Scharrer.
The prevalence of thrombosis in patients with
thrombocytopenia. Jahrestagung der GTH Basel, 15. 02.
– 18 . 02. 2006 (P)
115. Miesbach W., R. Hudek, B. Putz, G. Asmelash, C. von
Auer, I. Scharrer. The immunological profile of patients
with antiphospholipid antibodies. Routine screening in
patients with antiphospholipid antibodies? Jahrestagung
der GTH Basel, 15. 02. – 18 . 02. 2006 (P)
116. Miesbach W., V. Catania, B. Putz, G. Asmelash, C. von
Auer, T. Vigh, D. Galanakis, I. Scharrer. Congenital
dysfibrinogenemia clinical manifestations in relation to
the fibrinogen gene mutation. Jahrestagung der GTH
Basel, 15. 02. – 18 . 02. 2006 (P)
117. Miesbach W., V. Catania, D. Galanakis, I. Scharrer, R.
Grossmann. Fibrinogen gene mutations in relation to the
clinical manifestations of dysfibrinogenemia. 39.
Jahreskongress der DGTI, Frankfurt, 19. 09.- 22. 09.
2006. (P)
118. Miesbach W., V. Catania, D. Galanakis, I. Scharrer.
Successful treatment with fibrinogen during pregnancy in
patients with dysfibrinogenemia. World Congress WFH,
Vancouver, 21. 05. – 25. 05. 2006. (V)
119. Miesbach W., V. Catania, T. Vigh, D.Galanakis, I.
Scharrer. Congenital dysfibrinogenemia - clinical
manifestations in relation to the fibrinogen gene
mutation. World Congress WFH, Vancouver, 21. 05. –
25. 05. 2006. (V)
120. Mueller MM, Seifried E: Blood Transfusion in Europe:
Basic Principles for Initial and Continuous Training: A
European Harmonisation. 14th Euro´Sat Seminars for
Advances in Transfusion” des „European Network of
Transfusion Medicine Societies – EuroNet-TMS“ in
Paris, 12. 10. 2006 (V)
121. Müller C.: Strategien zur Suche nicht-verwandter
Blutstammzellspender. 39. Jahreskongress der
Deutschen Gesellschaft für Transfusionsmedizin und
Immunhämatologie (DGTI), Frankfurt, 21.09.06 (V)
122. Müller MM, Henschler R, Seifried E: Übertragbarkeit von
Leukämien durch Blutprodukte ? – Eine Übersicht.
Ärztliche Mittwochsfortbildung im Institut für
Transfusionsmedizin und Immun-hämatologie des
Klinikums der Johann Wolfgang Goethe-Universität
Frankfurt am Main und des DRK-Bluspendedienstes
Baden-Württemberg – Hessen gGmbH; Frankfurt, 15.
03. 2006 (V)
123. Müller MM: Autologe Transfusion. 53.
Transfusionsmedizinischer Fortbildungskurs für Ärzte
und MTAs; Institut für Transfusionsmedizin und
Immunhämatologie; Klinikum der Johann Wolfgang
Goethe-Universität Frankfurt am Main & DRK-
Blutspendedienst Baden-Württemberg-Hessen gGmbH,
Frankfurt am Main, 12. 05 2006 (V)
124. Müller MM: Blutgerinnung – Zelluläre Mechanismen.
Lehrauftrag Immunhämatologie an der MTA-Schule der
Städtischen Kliniken Frankfurt am Main-Höchst;
Sommersemester 2006; Frankfurt-Höchst, 02. 06. 2006
(V)
125. Müller MM: Eisenstoffwechsel und transfusionsinduzierte
Eisenüberladung. Weiterbildung für bayerische
Klinikums-Apotheker, Würzburg, 19. 10. 2006 (V)
126. Müller MM: Immunhämatologie: Das AB0-System.
Lehrauftrag Immunhämatologie an der MTA-Schule der
Städtischen Kliniken Frankfurt am Main-Höchst;
Sommersemester 2006; Frankfurt-Höchst , 05. 05.2006
(V)
127. Müller MM: Transfusionsmedizin / Klinische
Hämotherapie. Lehrauftrag Immunhämatologie an der
MTA-Schule der Städtischen Kliniken Frankfurt am Main-
Höchst; Sommersemester 2006; Frankfurt-Höchst, 30.
06 2006 (V)
128. Munder M, Schneider H, Luckner C, Giese T, Langhans
CD, Fuentes Jm, Kropf P, Mueller I, Kolb A, Modolell M,
Ho AD: Human Granulocyte Arginase Suppresses T-
Lymphocyte Functions. 16 th European Congress of
Immunology, Paris, September 6-9, 2006 (P)
129. Mytilineos J.: Acute graft oss due to monospecific HLA-
Class II immunization? A case report. 7th European
Histocompatibility Workship, Cascais, 27.04.2006. (V)
130. Mytilineos J.: EBMT-Bericht. Work in Progress, Ulm,
19.04.2006. (V)
131. Mytilineos J.: EFI -NEWS und Standards. Vortrag auf der
DGI-Weiterbildungsveranstaltung:
Typisierungsstrategien in der Hochauflösung von HLA
Klasse I. Ulm, 16.-17.03.2006. (V)
132. Mytilineos J.: Eilige Suche nach einem
Stammzellspender bei Risiko-AML. Studientreffen der
AMLSGI. Neu-Ulm, 21.09.2006. (V)
133. Mytilineos J.: HLA Typing Techniques. Genomix 2006.
3rd International workshop on genomics research,
Varadero, Cuba, 9.11.2006. (V)
134. Mytilineos J.: HLA-class I Typing by Sequencing
Techniques. Genomix 2006. 3rd International workshop
on genomics research, Varadero, Cuba, 5.11.2006. (V)
135. Mytilineos J.: Immungenetik und HLA: Bedeutung für die
Transplan-tation. Vortrag im Rahmen des Walter-
Brendel-Kollegs für Transplanta-tionsmedizin, Wildbad-
Kreuth, Tegernsee, 12.03.2006. (V)
136. Mytilineos J.: Qualitätssicherung im Immungenetischen
Labor. Altes und Neues über die EFI-Akkreditierung.
Vortrag im Rahmen des jährlichen Fortbildungsseminars
der Fa. Biotes, Bad Nauheim, 17.01.2006 (V)
137. Mytilineos J.: Zytokin SNP-Diagnostik: 1. Luminex
„FlexMap Carboxy Bead“ Technologie 2.
Zytokinpolymorphismen in der Stammzelltransplantation.
Forschungsseminar des DRK-Blutspende-dienstes.
Karlsruhe, 17.11.2006. (V)
138. "Nanotechnology, a Base for New Tools for Blood
Diagnostics "IPFA/PEI 13th NAT Workshop on
“Surveillance and Screening of Blood Borne Pathogens”,
June 2006 Bern, Switzerland, eingeladener Vortrag
139. Nicol S.B.1, M. Schmidt2, J. Brachert1, Th. Montag1
GROWTH PROPERTIES OF DIFFERENT BACTERIA
STRAINS IN PLATELET CONCENTRATES AND
CONSEQUENCES FOR THE APPLICATION OF
SCREENING METHODS, 2006 ISBT, Capetown
01.09.2006 (P)
140. Niewolik D., Lu H., Ma Y., Lieber M.R. Schwarz K. und
Pannicke, U.: Two DNA-PKcs dependent modes in the
activation of Artemis endonucleolytic features. 12.
Meeting of the European Society for Immunodeficiencies
(ESID), Budapest, 4.-7. Oktober 2006 (Abstract No. E15)
(2006) (P)
141. Ottinger H.D., Müller C., Beelen W.D., Zander A.,
Ehninger G., Schrezenmeier H. für das Deutsche
Register für Stammzelltransplantationen e. V.: The
German Registry for Stem Cell Transplantations (named
DRST) wins increasing impact as platform to launch
national clinical studies in the field of hematopoietic stem
cell transplantation. Gemeinsame Jahrestagung der
Deutschen, Österreichischen und Schweizerischen
Gesellschaften für Hämatologie und Onkologie (DGHO),
Leipzig, 4. – 8. November 2006. Onkologie 29(S3): 124
(Abstract No. P584) (2006) (P)
142. Pannicke U., Niewolik D., Lu H., Ma Y., Lieber M.R. und
Schwarz K.: Two DNA-PKcs dependent steps in the
activation of Artemis functions. Vortrag auf der 23.

Wissenschaftlichen Vorträge, publizierte Abstracts 2006
Jahrestagung der Arbeitsgemeinschaft Pädiatrische
Immunologie (API). Ittingen, 19.05.06 (V)
143. Piccin A., McCann S., Oneto R., Bacigalupo A.,
Locasciulli A., Marsh J., Schrezenmeier H., Socié G.,
Tichelli A., Passweg J.: Autologous recovery in severe
aplastic anaemia following stem cell transplantation.
32nd Annual Meeting of the European Group for Blood
and Marrow Transplantation (EBMT), Hamburg, 19-22
March 2006. Bone Marrow Transplantation 37 (Suppl. 1):
S41 (Abstract No. 302) (2006) (V)
144. Putzbach J., Merz A., Schrezenmeier H., Mytilineos J.:
Zytokin SNP-Diagnostik unter Verwendung der Luminex
"Flexmap Carboxy Bead"-Technologie. 14. Jahrestagung
der Deutschen Gesellschaft für Immungenetik (DGI),
Innsbruck, 12.-14.10.06 (Abstract No P27) (P)
145. Radecke F., Radecke S., Peter I. und Schwarz K.:
Physical Incorporation of a Single-stranded
Oligodeoxynucleotide During Targeted Repair of a
Human Chromosomal Locus. 13. Jahrestagung der
Deutschen Gesellschaft für Gentherapie (DG-GT).
Düsseldorf, 12.-14. Juli 2006 (Abstract No 11) (2006) (P)
146. Rautenberg C., Speckmann C., Nikolopoulos E., Fisch
P., Schwarz K., Pannicke U., Hershfield M.S.,
Grimbacher B. und Ehl S.: A case of late-onset
adenosine deaminase deficiency. 12. Meeting of the
European Society for Immunodeficiencies (ESID),
Budapest, 4.-7. Oktober 2006 () (2006) (P)
147. Rautenberg C., Thiel D., Horn J., Schwarz K., Peter H.-
H. und Grimbacher B.: Unsolved case: Recurrent fever
and lymphopenia and a 28 year old patient. Vortrag auf
der 23. Jahrestagung der Arbeitsgemeinschaft
Pädiatrische Immunologie (API). Ittingen, 19. 05.06 (V)
148. Reinhardt P., Schauwecker P., Krug E., Maccari B.,
Schrezenmeier H., Wiesneth M.: Bone marrow
separation for AB0-incompatible and volume-reduced
transplantation using a closed cytapheresis-system. 39th
Annual Congress of the German Society for Transfusion
Medicine and Immunohematology (DGTI), Frankfurt, 19-
22 September 2006. Transfus. Med. Hemother. 33 (S1):
17 (Abstract No. OS7.5) (2006) (V)
149. Reinhardt P.: Hydroxyäthylstärke in der
Hämapheresepraxis. 39. Jahreskongress der Deutschen
Gesellschaft für Transfusionsmedizin und
Immunhämatologie (DGTI), Frankfurt, 19.09.06 (V)
150. Richter, E.: 1. Novelle Transfusionsgesetz – Forderung
zur Qualitätssicherung bei der Anwendung von
Blutprodukten. Ortenauer Anästhesiefortbildung,
Herzzentrum Lahr/Baden, Lahr, 15.03.2006 (V)
151. Richter, E.: Musterverfahrensdienstanweisung –
Aktualisierung 2006. Sitzung Arbeitskreis Hämotherapie
am Institut Baden-Baden, Baden-Baden, 29.06.2006 (V)
152. Richter, E.: Thrombozytenlagerung: Unterbrechung der
Agitation – Verlängerung der Lagerdauer auf 7 Tage.
Transfusionsmedizinische Fortbildung am Institut
Mannheim, Mannheim, 01.03.2006 (V)
153. Richter, E.: Votum 33 AK Blut. Sitzung Arbeitskreis
Hämotherapie am Institut Baden-Baden, Baden-Baden,
30.11.2006 (V)
154. Ringhoffer M., Harsdorf S. von, Schmitt M., Wiesneth M.,
Greiner J., Zenz T., Stilgenbauer S., Döhner H., Bunjes
D.: Reduced-intensity conditioning followed by T-cell
depleted allogeneic SCT for patients with chronic
myeloid leukaemia and minimal residual disease at the
time of transplant: high risk of molecular relapse. 32nd
Annual Meeting of the European Group for Blood and
Marrow Transplantation (EBMT), Hamburg, 19-22 March
2006. Bone Marrow Transplantation 37 (Suppl. 1): S196
(Abstract No. P754) (2006) (P)
155. Ringhoffer S., Bunjes D., Wenzel P., Wiesneth M.,
Greiner J., Ringhoffer M.: Rapid and economical
determination of the sjTREC / DbJb-TREC ratio by a
multiplex-nested real-time polymerase chain reaction
assay. 32nd Annual Meeting of the European Group for
Blood and Marrow Transplantation (EBMT), Hamburg,
19-22 March 2006. Bone Marrow Transplantation 37
(Suppl. 1): S71 (Abstract No. P407) (2006) (P)
156. Rohr J., Enders A., Zieger B., Schwarz K., Yoshimi A.,
Speckmann C., Knoepfle E.-M., Kontny U., Müller C.,
Nurden A., Henschen M., Pannicke U., Niemeyer C.,
Nurden P. und Ehl S.: Lethal hemophagocytic
lymphohistiocytosis in Hermansky-Pudlak Syndrome
Type II. Vortrag auf der 23. Jahrestagung der
Arbeitsgemeinschaft Pädiatrische Immunologie (API).
Ittingen, 19. 05.06 (V)
157. Rojewski M., Becker T., Baur G., Wiesneth M.,
Schrezenmeier H.: Ex vivo expansion of mesenchymal
stem cells for regenerative therapy: Impact of stem cell
source and plating density on efficacy of ex vivo
expansion. 39th Annual Congress of the German Society
for Transfusion Medicine and Immunohematology
(DGTI), Frankfurt, 19-22 September 2006. Transfus.
Med. Hemother. 33 (S1): 38 (Abstract No. P1.8) (2006)
(P)
158. Rojewski M.T., Weber B.M., Schrezenmeier H.: Bone
marrow derived human mesenchymal stem cells induce
apoptosis in Jurkat cells and modulate proliferation of
other malignant cell lines: MSC as new tool for antitumour
therapy? Annual Meeting of the European Group
for Blood and Marrow Transplantation, Hamburg, 19-22
March 2006. Bone Marrow Transplantation 37 (Suppl. 1):
S154 (Abstract No. P639) (2006) (P)
159. Scharberg, E.A., H. Tsuneyama, K. Ogasawara, M.
Uchikawa, H.H. Keller, E. Richter, P. Bugert: RH MOD
phenotype caused by double heterozygosity for two new
alleles of the RHAG gene. 29th Congress of the Internat.
Soc. for Blood Transfusion, Cape Town, 2.-7.09.2006 (P)
160. Scharberg, E.A., H. Tsuneyama, K. Ogasawara, M.
Uchikawa, H.H. Keller, E. Richter, P. Bugert: RH MOD
phenotype caused by double heterozygosity for two new
alleles of the RHAG gene. 39. Jahrestagung der DGTI,
Frankfurt/M., 19.-22.09.2006 (V)
161. Scharberg, E.A., K. Panter, J. Senne, S. Penz, E.
Richter, G. Bojarsky, M. Leuteritz: The first two case
reports of anti-JAHK (Rh 53) in pregnant women. 29th
Congress of the Internat. Soc. for Blood Transfusion,
Cape Town, 2.-7.09.2006 (P)
162. Scharberg, E.A., K. Panter, J. Senne, S. Penz, E.
Richter, G. Rink, H. Klüter, P. Bugert: Serology and
molecular background of seven new RHCE alleles. 59 th
Ann. Meeting AABB, Miami Beach, 21.-24.10.2006 (V)
163. Scharberg, E.A.: Blutgruppenserologische
Untersuchungen vor und nach der Geburt – Morbus
haemolyticus neonatorum: prä- und postpartale
Therapie. Fortbildung Labor Enders, Stuttgart,
18.10.2006 (V)
164. Scharberg, E.A.: Falldemonstration weak D. Sitzung
Arbeitskreis Hämotherapie am Institut Baden-Baden,
Baden-Baden, 29.06.2006 (V)
165. Scharberg, E.A.: Immunhämatologie –
Antikörperscreening, Antikörperdifferenzierung. DIW-
MTA Fortbildung, Offenburg, 25.09.2006 (V)
166. Scharberg, E.A.: Immunhämatologische Grundlagen.
Fortbildung klinische Transfusionsmedizin zur Erlangung
der Qualifikation als Transfusions-verantwortlicher/beauftragter
in der Stadtklinik Baden-Baden, Baden-
Baden, 07.07.2006 (V)
167. Scharberg, E.A.: JAHK-Antigen (RH 53) – serologische
Eigenschaften und molekulare Basis.
Transfusionsmedizinische Fortbildung am Institut
Klinische Transfusionsedizin Ulm, Ulm, 22.03.2006 (V)
168. Scharberg, E.A.: Nebenwirkungen der Bluttransfusion,
Meldung und Abklärung von Transfusionsreaktionen.
Fortbildung klinische Transfusionsmedizin zur Erlangung
der Qualifikation als Transfusions-verantwortlicher/beauftragter
in der Stadtklinik Baden-Baden, Baden-
Baden, 08.07.2006 (V)
169. Scharberg, E.A.: Neufassung der Richtlinien zur
Gewinnung von Blut und Blutbestandteilen und zur
Anwendung von Bluprodukten (Hämotherapie).
Ortenauer Anästhesiefortbildung, Herzzentrum
Lahr/Baden, Lahr, 15.03.2006 (V)
170. Scharberg, E.A.: Problemfälle in der
immunhämatologischen Diagnostik.
Fortbildungsveranstaltung Transfusionsmedizin, DiaMed,
Ottobrunn, 04.12.2006 (V)
172

Wissenschaftlichen Vorträge, publizierte Abstracts 2006
171. Scharberg, E.A.: Problemfälle in der
immunhämatologischen Diagnostik.
Fortbildungsveranstaltung Transfusionsmedizin, DiaMed,
Ottobrunn, 12.12.2006 (V)
172. Scharberg, E.A.: Schwach positive Reaktionen (AKS,
Eigenkontrolle). Klinische Konsequenzen. Sitzung
Arbeitskreis Hämotherapie am Institut Baden-Baden,
Baden-Baden, 30.11.2006 (V)
173. Scharberg, E.A.: Unerwünschte Wirkungen von
Blutkomponenten und Plasmaderivaten:
Falldemonstration. Anästhesiefortbildung Herzzentrum
Bad Krozingen, Bad Krozingen, 23.11.2006 (V)
174. Schellenberg E., Findhammer S., Frank K., Loehr M.,
Geusendam G., Dengler T., Mayr-Wohlfart U., Schmidt
M., Seifried E., Sireis W.: Epidemiology of HIV, HCV and
HBV infections in about 1.4 million voluntary, nonremunerated
blood donations of the German Red Cross
Blood Donor Service Baden-Wuerttemberg-Hessen in
the year 2005. 39th Annual Congress of the German
Society for Transfusion Medicine and
Immunohematology (DGTI), Frankfurt, 19-22 September
2006. Transfus. Med. Hemother. 33 (S1): 60 (Abstract
No. P9.3) (2006) (P)
175. Schellenberg E., Findhammer S., Koerner K., Karl A.,
Klüter, H., Wiesneth M., Seifried E., Sireis W.:
Implementation and First Results of an Error-Risk-
Management Reporting System (ERMS) at the Red
Cross Blood Donor Service Baden-Württemberg-
Hessen. Seminar Hemovigilance, Porto (2006) (P)
176. Schellenberg E., S. Findhammer, K. Frank, M.
Loehr,G.Geusendam,T. Dengler,U.Mayr-Wohlfahrt, M.
Schmidt, E. Seifried,W. Sireis Epidemiology of HIV, HCV
and HBV infections in about 1.4 million voluntary, nonremunerated
blood donations of the German Red Cross
Blood Donor Service Baden-Wuerttemberg/Hessen in
the year 2005, 2006 DGTI, Frankfurt, 20.09.2006 (P)
177. Schellenberg E.1, S. Findhammer1, K. Frank2, K.
Gubbe2, A. Karl2, G. Geusendam3, A. Vosberg3, T.
Dengler1, U. Mayr-Wohlfahrt1, M. Loehr4, E. Gruenelt4,
M. Schmidt1, W. Sireis1, E. Seifried1 EPIDEMIOLOGY
OF HIV, HCV AND HBV INFECTIONS IN ABOUT 1.4
MILLION VOLUNTARY, NON-REMUNERATED BLOOD
DONATIONS OF THE GERMAN RED CROSS BLOOD
DONOR SERVICE BADEN-WUERTTEMBERG-
HESSEN IN THE YEAR 2005. 2006 ISBT, Capetown
01.09.2006 (P)
178. Schmidt M. Comparison of different bacterial detection
methods under routine conditions- multicenter study of
the German Red Cross blood donor services 2006
Macopharma Symposium, Polnische Transfusionstage,
Krakau, 21.11.2006 (V)
179. Schmidt M. Implementation of Anti-HBc Screening at the
German Red Cross Institute, 2006 ISBT, Capetown
01.09.2006 (V)
180. Schmidt M. Implementation of anti-HBc screening at the
German Red Cross Institute Frankfurt 2006 ABBOTT
Symposium Belgrade, 09.11.2006 (V)
181. Schmidt M. Molekulare Virusdiagnostik, besondere
Qualitätsanforderungen 2006 DGTI, Frankfurt,
20.09.2006 (V)
182. Schmidt M. Safety control of blood and blood products
2006 Berliner Medizinische Gesellschaft, Berlin
13.12.2006 (V)
183. Schmidt M., A. Themann, V. Brixner, E. Seifried, M.K.
Hourfar TAQMAN NADIS ENABLES FULL
MONITORING OF NAT SCREENING AND
PRODUCTION OF NAT REAGENTS, 2006 ISBT,
Capetown 01.09.2006 (P)
184. Schmidt M., A.Themann,V. Brixner, E. Seifried,
K.Hourfar TaqMan NADIS enables full monitoring of NAT
screening and production of NAT reagents, 2006 DGTI,
Frankfurt, 20.09.2006 (V)
185. Schmidt M., K.Hourfar, A.Themann, M. Eickmann,T.
Laue, E. Seifried Blood donor screening for influenza
virus including H5N1 – is it necessary and feasible?
2006 DGTI, Frankfurt, 20.09.2006 (V)
173
186. Schmidt M., M. Di Giambattista, P. Caillet-Fauquet, E.
Seifried, K. Hourfar, R. Laub : Specific Anti-B19
antibodies and B19 infectivity in Parvovirus-B19-DNApositive
donors and risk of of transmission, 2006 DGTI,
Frankfurt, 20.09.2006 (V)
187. Schmidt M., M. Di Giambattista, P. Caillet-Fauquet, M-L.
Draps, T. Branckaert, A. Themann, Y. de Launoit, E.
Seifried, M. K. Hourfar, R. Laub SPECIFIC ANTI-B19
ANTIBODIES AND B19 INFECTIVITY IN
PARVOVIRUS-B19-DNA-POSITIVE DONORS AND
RISK OF TRANSMISSION, 2006 ISBT, Capetown
01.09.2006 (V)
188. Schmidt M., M. K. Hourfar, A. Themann, M. Eickmann,
T. Laue, E. Seifried: Blood donor screening for influenza
virus including H5N1 – is it necessary and feasible?
2006 ISBT, Capetown 01.09.2006 (V)
189. Schmidt M., S.-B. Nicol, K. Hourfar,W. Sireis,
W.Weichert, E. Seifried, T. Montag : Contamination of
platelet concentrates with Klebsiella pneumonia – still a
risk?, 2006 DGTI, Frankfurt, 20.09.2006 (P)
190. Schmidt M.; A. Karakassopoulos; J. Burkhart; R.
Deitenbeck; J. Asmus, T. H. Müller,
191. Schmidt M.1, A. Themann1, S.-B Nicol2, T. Montag2,
W.K. Roth3, E. Seifried1, M.K. Hourfar1 NOVEL
APPLICATION WITH QUENCHING DYE IMPROVES
OPTIMIZED SCANSYSTEMTM FOR RAPID
BACTERIAL DETECTION, 2006 ISBT, Capetown
01.09.2006 (P)
192. Schmidt M.1, A. Vosberg2, G. Geusendam3, T.
Dengler4, K. Janetzko5, K. Gubbe6, K. Frank6, A. Karl6,
M. Loehr7, E. Gruenelt7, W. Sireis1, W.K. Roth8, E.
Seifried1, M.K. Hourfar1 ANTI-HBC SCREENING OF
BLOOD DONORS - A COMPARISON OF SEVEN ANTI-
HBC SCREENING ASSAYS, 2006 ISBT, Capetown
01.09.2006 (P)
193. Schmidt M.1, M.K. Hourfar1, G. Geusendam2, A.
Vosberg3, T. Dengler4, K. Janetzko5, K. Gubbe6, K.
Frank6, A. Karl6, M. Loehr7, E. Gruenelt7, W. Sireis1, E.
Seifried1
194. Schmidt M.1, S.-B Nicol2, M.K. Hourfar1, W. Sireis1, W.
Weichert1, E. Seifried1, T. Montag2 DEATH AFTER
TRANSFUSION OF PLATELET CONCENTRATE
CONTAMINATED WITH KLEBSIELLA PNEUMONIAE,
2006 ISBT, Capetown 01.09.2006 (P)
195. Schmitt A., Giannopoulos K., Reinhardt P., Li L., Döhner
H., Wiesneth M., Schmitt M.: Quantitative expression
analysis of Toll-like receptor-2, -4 and -9 in dendritic cells
generated from blasts of patients with acute myeloid
leukemia. Gemeinsame Jahrestagung der Deutschen,
Österreichischen und Schweizerischen Gesellschaften
für Hämatologie und Onkologie (DGHO), Leipzig, 4. – 8.
November 2006. Onkologie 29(S3): 223 (Abstract No.
P899) (2006) (P)
196. Schmitt M., Schmitt A., Giannopoulos K., Li L., Liebisch
P., Chen J., Ringhoffer M., Guillaume P., Ritter G.,
Rojewski M., Gnjatic S., Döhner H., Jochen J.:
RHAMM/CD168-R3 peptide vaccination of patients with
acute myeloid leukemia (AML), myelodysplastic
syndrome (MDS) and multiple myeloma (MM) elicits
immunological and clinical responses. 48th Annual
Meeting of the American Society of Hematology (ASH),
Orlando, 9-12 December 2006. Blood 108 (11, Part 1):
125a (Abstract No. 409) (2006)
197. Schrezenmeier H., Müller C., Beelen D.W., Ottinger H.:
German Registry for Stem Cell Transplantation (DRST):
A national transplant registry as basis for quality
assurance and scientific studies. 39th Annual Congress
of the German Society for Transfusion Medicine and
Immunohematology (DGTI), Frankfurt, 19-22 September
2006. Transfus. Med. Hemother. 33 (S1): 1 (Abstract No.
OS1.1) (2006) (V)
198. Schrezenmeier H.: A randomised controlled study in
newly diagnosed severe aplastic anaemia patients
receiving antithymocyte globulin (ATG) and cyclosporin
A, with or without G-CSF. Update on study progress.
Vortrag auf dem Jahreskongress der European Group
for Blood and Marrow Transplantation (EBMT),
Hamburg, 21.03.06. (V)

199. Schrezenmeier H.: Bakterielle Kontamination von
Blutkomponenten. Vortrag beim Qualitätszirkel
Transfusionsmedizin im Robert-Bosch-Krankenhaus
Stuttgart, 23. Februar 2006. (V)
200. Schrezenmeier H.: Campath in refractory SAA. Vortrag
auf dem Jahreskongress der European Group for Blood
and Marrow Transplantation (EBMT), Hamburg,
21.03.06. (V)
201. Schrezenmeier H.: Mesenchymale Stammzellen:
Charakterisierung, Ex-vivo-Expansion und klinische
Anwendungen. Vortrag auf der Sitzung der DGTI-
Sektion "Transplantation und Zelltherapie" in Kassel,
27.04.06 (V)
202. Schrezenmeier H.: PNH. Vortrag auf dem
Jahreskongress der European Hematology Association
(EHA), Amsterdam, 17.06.06 (V)
203. Schrezenmeier H.: SAA bei Erwachsenen und PNH:
Diagnose und Therapie. Vortrag im Rahmen der 10.
Jahrestagung der Interdisziplinären Gruppe für Labor
und Durchflusszytometrie (IGLD), Göttingen, 31.03.06
(V)
204. Schuettrumpf J, Zou J, Furlan Freguia C, Baila S, Liu JH,
Andrade-Gordon P, Arruda VR. Coagulation and Viral
Transduction: Protease-Activated Receptors modulate
AAV and Anenoviral Gene Transfer Efficacy. DG-GT
Düsseldorf 2006 (V)
205. Schuettrumpf J, Zou J, Furlan Freguia C, Baila S, Liu JH,
Andrade-Gordon P, Arruda VR The Role of Protease-
Activated Receptors on Viral-Based Gene Transfer
Efficacy. DGTI Frankfurt 2006 (V)
206. Schuetz, C., Schulz, A., Pannicke, U., Hoenig, M.,
Blanche, S., Moshous, D., De Villartay, J.P., Cavazzano-
Calvo, M., Debre, M., Hirsch, I., Schwarz, K.., Fischer, A
und Friedrich W. Are complications after hematopoietic
stem cell transplantation (HSCT) more frequent in SCID
patients with Artemis versus RAG mutations? 12.
Meeting of the European Society for Immunodeficiencies
(ESID), Budapest, 4.-7. Oktober 2006 (Abstract No. J7)
(2006) (P)
207. Schüttrumpf J. Gentherapie der Hämophilie. DGTI
Frankfurt 2006 (V)
208. Schütz C., Gatz S., Sparber-Sauer M., Hönig M., Schulz
A., Schwarz K. und Friedrich W.: Are autoinflammatory
syndromes indications for stem cell transplantation
(HSCT)? Vortrag auf der 23. Jahrestagung der
Arbeitsgemeinschaft Pädiatrische Immunologie (API).
Ittingen, 19.05.06 (V)
209. Schwarz K., Goede J., Kohne E., Schmid M., Heimpel
H.: Genetic heterogeneity in congenital dyserythropoietic
anemia type I (CDAI). Gemeinsame Jahrestagung der
Deutschen, Österreichischen und Schweizerischen
Gesellschaften für Hämatologie und Onkologie (DGHO),
Leipzig, 4. – 8. November 2006. Onkologie 29(S3): 10
(Abstract No. V146) (2006) (V)
210. Schwarz K., Radecke F., Radecke S., Peter I.: Towards
targeted repair of human chromosomal loci by use of
single-stranded oligodeoxynucleotides. 39th Annual
Congress of the German Society for Transfusion
Medicine and Immunohematology (DGTI), Frankfurt, 19-
22 September 2006. Transfus. Med. Hemother. 33 (S1):
11 (Abstract No. OS5.2) (2006) (V)
211. Schwarz K.: Gentherapie – auf das Nukleotid gebracht.
Seminar, BSD Baden-Württtemberg-Hessen, Institut
Mannheim. Mannheim, 14.06.06 (V)
212. Schwarz K.: Methoden zur Genkorrektur. Vortrag im
Rahmen VII. BDT-Workshop
Blutstammzelltransplantation. Ulm, 31.03.06. (V)
213. Schwarz K.: Stabile Expression von HLA Merkmalen?
Vortrag auf der Jahrestagung des Arbeitskreises Süd der
Deutschen Gesellschaft für Abstammungsbegutachtung.
München, 02.12.06 (V)
214. Seidl C. HLA-Polymorphismen und die Bedeutung in der
Forensik. 4. DGI Histokompatibilitäts Workshop, Stefan
Morsch Stiftung, Birkenfeld, 27.-28.04. 2006.
215. Seidl C. NK Zellrezeptor Bestimmung für die
Blutstammzelltransplantation und Immuntherapie. 4. DGI
Wissenschaftlichen Vorträge, publizierte Abstracts 2006
Histokompatibilitäts Workshop, Stefan Morsch Stiftung,
Birkenfeld, 27.-28.04. 2006.
216. Seidl C. Zertifizierung nach DIN ISO 9001.
Qualitätsmanagement in der Zelltherapie – von der
ersten Verfahrensanweisung zur gelungenen
Zertifizierung und/oder Akkkreditierung herstellender
Institutionen. 10. Jahrestagung der IGLD,
Universtiätsklinikum, Göttingen, 29.03-01.04. 2006.
217. Seidl C., R. Henschler, E. Schellenberg, A. McMillan
Douglas, C. Smit Sibinga, M. Gorham, M. Letowska, J.
de Wit, E. Seifried on behalf of the Project’s participant.
DRK BSDBH, Germany; HBRK, Belgium; NBT, Bulgaria;
MOH, Cyprus; VFN, Czech Republic; EBS, Estonia;
EFS, France; HNBT, Hungary; BTS, Iceland; NBTS,
Ireland; ISS, Italy; IBT, Malta; IHBP, Poland; FMP,
Romania; Sanquin, The Netherlands; SNBTS and NBS,
United Kingdom. EU-Q-BLOOD-SOP: A European
initiative developing quality management criteria. 14.
Jahrestagung der DGI, Innsbruck 12.-14.10.2006.
218. Seyboth, S.: Autologe Hämotherapie und
fremdblutsparende Maßnahmen. Fortbildung klinische
Transfusionsmedizin zur Erlangung der Qualifikation als
Transfusions-verantwortlicher/-beauftragter in der
Stadtklinik Baden-Baden, Baden-Baden, 08.07.2006 (V)
219. Seyboth, S.: Organisation und Durchführung der
Bluttransfusion, blutgruppenserologische Diagnostik vor
und nach der Transfusion. Fortbildung klinische
Transfusionsmedizin zur Erlangung der Qualifikation als
Transfusions-verantwortlicher/-beauftragter in der
Stadtklinik Baden-Baden, Baden-Baden, 08.07.2006 (V)
220. Seyboth, S.: Reanimation/Notfallversorgung,
aktualisierte Vorgaben. Transfusions-medizinische
Fortbildung am Institut Baden-Baden, Baden-Baden,
16.11.2006 (V)
221. Seyboth, S.: Votum 34 AK Blut. Sitzung Arbeitskreis
Hämotherapie am Institut Baden-Baden, Baden-Baden,
30.11.2006 (V)
222. Seyhun Y., Mytilineos J., Turkmen A., Oguz S.F., Kekik
C., Aydin F., Carin M.: The relationship between cytokine
gene polymorphisms and graft rejection in patients who
underwent a living-donor renal transplantation. 20th EFI
Conference, Oslo, 8-11 June 2006. Tissue Antigens 67:
509 (Abstract No. P-131) (2006) (A)
223. Siepermann M., Lankisch P., Moshous D., Schwarz K.,
Schaper J., Schwahn B., Feyen O. und Niehues T. CNS
vasculitis in 3 year old girl and mutations in the perforin
gene treated by allogeneic stem cell transplantation.
Vortrag auf der 23. Jahrestagung der
Arbeitsgemeinschaft Pädiatrische Immunologie (API).
Ittingen, 19.05.06 (V)
224. Sireis W., E. Schellenberg, S. Findhammer, K. Frank, A.
Karl, G.Geusendam, T.Dengler, M. Loehr, M. Schmidt,
E. Seifried Implementation of Anti-HBc blood donor
screening – Outcome with regard to HbsAg negative,
HBV NAT negative and anti-HBc positive blood donors,
2006 DGTI, Frankfurt, 20.09.2006 (P)Mueller MM,
Seifried E: Blood Transfusion in Europe: Basic
Principles for Initial and Continuous Training: A
European Harmonisation. 14th Euro´Sat Seminars for
Advances in Transfusion” des „European Network of
Transfusion Medicine Societies – EuroNet-TMS“ in
Paris, 12. 10. 2006 (V)
225. Speckmann C., Rautenberg C., Nikolopoulos E., Fisch
P., Rohr J., Schwarz K., Pannicke U., Hershfield M.,
Grimbacher B. und Ehl S.: „Leaky“ SCID – eine
diagnostische und therapeutische Herausforderung. 102.
Jahrestagung der Deutschen Gesellschaft für Kinder-
und Jugendmedizin (DGKJ), Mainz, 14.-17. September
2006: (Abstract No. DGKJ-PS-101) (2006) (V)
226. Speckmann C., Enders A., Baumann U., Warnatz K.,
Niehues T., Schuster V., Hügle B., Janssen G., Neubert
J., Selle B., Schwabe D., Dickerhoff R., Kopp M.,
Niemeyer C., Superti-Furga A., Rössler J., Rohr J., Lahr
G., Pannicke U., Schwarz K. und S. Ehl S.: Genetische
und immunologische Variabilität bei Autoimmun-
Lymphoproliferativem Syndrom (ALPS). 102.
Jahrestagung der Deutschen Gesellschaft für Kinder-
und Jugendmedizin (DGKJ), Mainz, 14.-17. September
2006: (Abstract No. DGKJ-VO-11) (2006) (V)
174

Wissenschaftlichen Vorträge, publizierte Abstracts 2006
227. Speckmann C., Rautenberg C., Fisch, P., Nikolopoulos
E., Pannicke U., Grimbacher B., Schwarz K., Hershfield
M. und Ehl S.: To treat or not to treat? A therapeutic
dilemma in late-onset ADA deficiency. Options for the
management of ADA-SCID. Hamburg, 19.03.06. (V)
228. Speckmann C., Rautenberg C., Nikolopoulos E., Fisch
P., Schwarz K., Pannicke U., Hershfield M., Grimbacher
B. und Ehl S.: Late-onset ADA deficiency. Vortrag auf
der 23. Jahrestagung der Arbeitsgemeinschaft
Pädiatrische Immunologie (API). Ittingen, 19.05.06 (V)
229. Sturm A., H. Hebestreit, C. Koenig, A. Obergfell, U.
Walter, R. Grossmann. Differential regulation of platelet
proinflammatory and hemostatic functions in clinically
stable patients with cystic fibrosis. DGTI Frankfurt,
21.09.2006. (V)
230. Weinauer W., E. Seifried and G. Walther-Wenke
Comparison of three bacterial detection methods under
routine conditions, 2006 ISBT, Capetown 01.09.2006 (V)
231. Wiesneth M., Reinhardt P., Gronau S., Schmitt M., Atz
J., Schrezenmeier H., Riechelmann H.: Bispecific
trifunctional MoAb-opsonised lymphocytes for antitumour
therapy. Annual Meeting of the European Group
for Blood and Marrow Transplantation, Hamburg, 19-22
March 2006. Bone Marrow Transplantation 37 (Suppl. 1):
S68-S69 (Abstract No. P402) (2006) (P)
232. Wiesneth M.: Blutspender retten Leben. Feier '50 Jahre
DRK-Blutspendedienst in Baden-Württemberg', Stuttgart,
27.01.06 (V)
233. Wiesneth M.: Gesetz über Qualität und Sicherheit von
menschlichen Geweben und Zellen (Gewebegesetz).
Sitzung der Sektion "Sicherheit in der Hämotherapie" der
Deutschen Gesellschaft für Transfusionsmedizin und
Immunhämatologie" (DGTI), Langen, Paul-Ehrlich-
Institut, 23.06.06 (V)
234. Wiesneth M.: Herstellung und Qualitätskontrolle von
Blutprodukten. 34. Fortbildungskurs Klinische
Transfusionsmedizin (Kursteil A und B) für
Transfusionsverantwortliche, Transfusionsbeauftragte
und Leiter von Blutdepots bzw. von
blutgruppenserologischen Laboratorien, Ulm, 30.11.06
(V)
235. Wiesneth M.: Nebenwirkungen und Zwischenfälle bei der
Blutspende. Fortbildungsveranstaltung für
Voruntersuchende Ärztinnen und Ärzte des DRK-
Blutspendedienstes Baden-Württemberg – Hessen, Ulm,
Institut Ulm, 02.12.06 (V)
236. Wiesneth M.: Präparation und Transplantation
hämatopoetischer Stammzellen. VII. Workshop
175
"Blutstammzelltransplantation" des Berufsverbands
Deutscher Transfusionsmediziner, Ulm, 30.03.06 (V)
237. Wiesneth M.: Präparation und Transplantation
hämatopoetischer Stammzellen – Immuntherapie.
Transfusionsmedizinisches Seminar für Ärzte in der
Weiterbildung für Transfusionsmediziner der DGTI und
des BDT, Bielefeld, 20.05.06 (V)
238. Wiesneth M.: Projekte der AG 'Stammzelltransplantation
und Immuntherapie'. Forschungsseminar des DRK-
Blutspendedienstes Baden-Württemberg – Hessen,
Karlsruhe, 18.11.06 (V)
239. Wiesneth M.: Von der Blutspende zur regenerativen
Zelltherapie. Kreisversammlung des DRK-
Kreisverbandes Schwäbisch-Hall – Crailsheim e.V.,
Frankenhardt-Honhardt, 07.07.06 (V)
240. Wiesneth M.: Zelluläre Immuntherapie und
Blutstammzelltransplantation. Klinische
Transfusionsmedizin – Fortbildungsveranstaltung zur
Qualifikation als Transfusionsverantwortliche/r und
Transfusionsbeauftragte/r, Baden-Baden, 08.07.06 (V)
241. Wiesneth M.: Zelluläre Immuntherapie und
Blutstammzelltransplantation. 34. Fortbildungskurs
Klinische Transfusionsmedizin (Kursteil A und B) für
Transfusionsverantwortliche, Transfusionsbeauftragte
und Leiter von Blutdepots bzw. von
blutgruppenserologischen Laboratorien, Ulm, 01.12.06
(V)
242. Wild C., F. Behrens, T. Tonn, E. Märker-Hermann, E.
Seifried, J.P. Kaltwasser and C. Seidl. Natural killer cell
immunoglobulin-like receptor gene analysis in patients
with psoriatic arthritis and rheumatoid arthritis. 14.
Jahrestagung der DGI, Innsbruck 12.-14.10.2006.
243. Young N.S. Antonioloi E., Rotoli B., Schrezenmeier H.,
Schubert J., Urbano-Ispizua A., Coyle L., Casto C. de,
Fu C.-L., Maciejewski J.P., Mojcik C.F., Rother R.P.,
Hillmen P.: Safety and efficacy of the terminal
complement inhibitor eculizumab in patients with
paroxysmal nocturnal hemoglobinuria: Interim Shepherd
Phase IIII Clinical Study. 48th Annual Meeting of the
American Society of Hematology (ASH), Orlando, 9-12
December 2006. Blood 108 (11, Part 1): 290 a (Abstract
No. 971) (2006) (P)
244. Zabern I. von, Wagner F.F., Flegel W.A.: RHD gene
carriers among serologically D negative donors: Alleles
and population frequency in Southwest Germany. 39th
Annual Congress of the German Society for Transfusion
Medicine and Immunohematology (DGTI), Frankfurt, 19-
22 September 2006. Transfus. Med. Hemother. 33 (S1):
4 (Abstract No. OS2.2) (2006) (V)

Wissenschaftspreise / Posterpreise 2006
Frankfurt:
Die Verdienste von Priv. Doz. Dr. med. Torsten Tonn auf dem Gebiet der Kresbsforschung sind
am 15. September 2006 mit dem Fritz-Acker-Preis ausgezeichnet worden. Der Preis wird
jährlich von der Fritz-Acker-Stiftung an Wissenschaftler verliehen, die sich auf dem Fachgebiet
der Krebsforschung oder der Herzleiden besonders verdient gemacht haben.
Heidelberg:
Astellas Posterpreis wurde an Dr. Thomas Giese für die Arbeit: „Pharmacodynamic monitoring
of calcineurin inhibitors by quantitative analysis of NFAT-regulated gene expression“ auf der 7.
Internationalen Konferenz „New Trends in Immunosuppression and Immunotherapy“, am 19.
Februar 2006 in Berlin verliehen.
Mannheim:
Posterpreis: Kocaömer A, Kern S, Klüter H, Bieback K:
Human AB-Serum as well as Thrombin-activated Platelet Rich Plasma are Suitable Alternatives
to Fetal Calf Serum for the Expansion of Mesenchymal Stem Cells.
PS1.7: Transfus Med Hemother 33 (S1) (2006).
Ulm:
Posterpreis der DGTI an Herrn Dr. Marx und Koautoren für den Beitrag:
Monitoring of engraftment and relapse after allogeneic hematopoietic stem cell transplantation
based on lineage specific short-tandem-repeat chimerism. 39 th Annual Congress of the German
Society for Transfusion Medicine and Immunohematology (DGTI), Frankfurt, 19-22 September
2006
Radecke F., Radecke S., Peter I., Schwarz K.: Physical incorporation of a single-stranded
oligodeoxynucleotide during targeted repair of a human chromosomal locus. 2. Posterpreis der
Deutschen Gesellschaft für Gentherapie e. V., Düsseldorf, 12.-14.07.2006.
176

Ausgerichtete wissenschaftliche Kongresse,
Symposien 2006
Baden-Baden
8. Baden-Badener Tag der Impf- und Reisemedizin, Baden-Baden (Leitung: Dr. A. Agildere)
(07.10.2006)
Frankfurt
Organisation des 1st EU-Q-Blood-SOP Project Meetings in Frankfurt am Main, 19.-21. Januar
2006 (Leitung Prof. Dr. med. C. Seidl)
Organisation des EU-Working Group Meetings ‘Special Blood Components’ in Budapest,
Hungarian National Blood Transfusion Service, 11.-13.Mai 2006. (Leitung Prof. Dr. med. C.
Seidl)
Organisation des 2nd Joint EU-Q-Blood-SOP Working Group Project Meetings in Frankfurt am
Main, 1.-3. Juni 2006. (Leitung Prof. Dr. med. C. Seidl)
39. Jahrestagung der Deutschen Gesellschaft für Transfusionsmedizin und Immunhämatologie
(DGTI) in Kooperation mit der International Society for Cellular Therapy (ISCT) - Europe in
Frankfurt am Main, 19.-22. September 2006 (Kongresspräsident: Prof. Dr. E. Seifried; Sekretär:
Prof. Dr. C. Seidl und PD Dr. T. Tonn
Organisation des MDT-Meetings innerhalb des EU-Q-Blood-SOP Project in Frankfurt am Main,
29.-30. November 2006. (Leitung Prof. Dr. C. Seidl)
Mannheim
17. + 18.03.2006, Lehrgebäude - alten Brauerei, Universitätsklinikum Mannheim
Fortbildungsveranstaltung zur Qualifikation als Transfusionsverantwortliche(r) und
Transfusionsbeauftragte(r)
19. + 20.05.2006, Seminarraum Institut Mannheim
Workshop START-MSC
17. + 18.11.2006 Akademiehotel, Karlsruhe
DRK-Forschungsseminar
06. - 07.12.2006, Seminarraum Institut Mannheim
2. OsteoCord Meeting
Ulm
VII. Workshop: Blutstammzelltransplantation Ulm
(Leitung: Dr. M. Wiesneth, Prof. H. Schrezenmeier) in Zusammenarbeit mit dem Berufsverband
Deutscher Transfusionsmedizin (30. – 31.03.2006)
Mehrere Veranstaltungen zum Mass Blood Group Genotyping im Rahmen Gastprofessur Prof.
Dr. Denomme, Universität Toronto; Canadian Blood Service (Mai 2006)
Heidelberg
22.-23. Mai 2006
Symposium „100 Jahre Immunologie in Heidelberg“
Tübingen
29./30. September 2006
Congress on Characterisation, Preparation and Clinical Applications of Non Hematopoetic Stem
Cells
177

Lehrveranstaltungen 2006
Frankfurt
Vorlesungsteil Transfusionsmedizin und Immunhämatologie
Klinische Immunologie (Querschnittsbereich 4) Teil 1:
Klinische Immunologie und Transfusionsmedizin
Dozenten: Prof. Dr. med. E. Seifried und Mitarbeiter
Vorlesung ‘Grundlagen der Transfusionsmedizin und
Immunhämatologie’
Dozenten: Prof. Dr. med. E. Seifried, Prof. Dr. med. C. Seidl,
PD Dr. med. R. Henschler, PD Dr. med. T. Tonn, PD Dr. med.
W. Weichert, Dr. med. M. Schmidt, Dr. med. C. Geisen
Vorlesung ‘Pathophysiologie und Therapie von
Krankheitsbildern der Blutgerinnung’
Dozenten: Prof. Dr. med. E. Seifried, Dr. med. C. Geisen, PD
DR. R. Großmann, Dr. W. Miesbach, Dr. M. Krause
Seminar: Grundlagen der Stammzellbiologie
Dozenten: Prof. Dr. med. E. Seifried, PD Dr. med. R.
Henschler
Doktorandenseminar: Grundlagen der Immungenetik:
Molekulare Struktur und klinische Bedeutung des HLA-
Systems
Dozent: Prof. Dr. med. C. Seidl
Seminar: Aktuelle Entwicklung der Virussicherheit in der
Hämotherapie
Dozent: Dr. med. M. Schmidt, Prof. Dr. med. C. Seidl, Prof.
Dr. med. E. Seifried
Seminar: Klinische Transplantationsimmunologie –
Immungenetik und Zelltherapie
Dozent: Prof. Dr. med. C. Seidl, PD Dr. med. T. Tonn
Differentialdiagnostisches Fall-Seminar Immunhämatologie
Dozenten: Prof. Dr. med. C. Seidl, PD Dr. med. R. Henschler,
PD Dr. med. T. Tonn, Dr. med. C. Geisen
Immunhämatologisches Praktikum
-anteilig aus dem Institut für Transfusionsmedizin und
Immunhämatologie -
Dozenten: Prof. Dr. med. E. Seifried, Prof. Dr. med. C. Seidl,
PD Dr. med. R. Henschler, PD Dr. med. T. Tonn, Dr. med. C.
Geisen, Dr. med. M. M. Müller
Wahlfach Transfusionsmedizin und Hämotherapie /
Immunhämatologie
Dozenten: Prof. Dr. med. E. Seifried, Prof. Dr. med. C. Seidl,
PD Dr. med. R. Henschler, PD Dr. med. T. Tonn
Fachweiterbildung Intensivpflege und Anästhesie des
Klinikums der JW Goethe-Universität Frankfurt
Dozenten: Dr. med. M. M. Müller und Dr. med. S. Findhammer
Praktikumsteile ‘Immunhämatologie, Hämatologie und Niere’
des Kurses Klinische Chemie und Hämatologie
(scheinpflichtige Veranstaltung - Innere Medizin)
Dozenten: Prof. Dr. med. C. Seidl, PD Dr. med. R. Henschler,
PD Dr. med. T. Tonn, C. Geisen, Dr. med. M. M. Müller, Dr.
med. M. Schmidt
MTA-Schule Städtische Kliniken Frankfurt am Main – Höchst:
Lehrauftrag für Immunhämatologie Sommersemester 2006 Dr.
V. Brixner, Dr. C. Geisen, Dr. M.M. Müller
Heidelberg
Modul Immunologie im Propäddeutischen Block 5 * 1 Woche
Modul klinische Infektiologie / Immunologie im Block III 8 * 2
Wochen
Allgemeine und klinische Immunologie für Mediziner und
Naturwissenschaftler, 1st.
Immunchemie für Mediziner und Naturwissenschaftler, 1st.
Einführung in die zelluläre Immunologie für Mediziner und
Naturwissenschaftler, 1st.
Immunologische Mediatoren: Entzündungsreaktion und
Infektabwehr, für Mediziner und Naturwissenschaftler, 1st.
Lehrveranstaltungen 2006
Klinische Immunologie und Rheumatologie, 2st.
Ringvorlesung: Zelluläre Immunologie, 2st.
Das Histokompatibilitäts-System des Menschen, 1st.
Einführung in die Immunhämatologie und Transfusionsmedizin
Seminar für Fortschritte auf dem Gebiet der Immunologie, für
Mediziner und Naturwissenschaftler, 2st.
Problemorientiertes Lernen (POL); Immunologie für Mediziner:
Klinisch-immunologische Fälle (Gruppenarbeit)
Ausgewählte Kapitel der Immunologie, 4st.
Monoklonale Antikörper in Diagnostik und Therapie, 2st.
Leukozytenmigration- und adhäsion, 1st.
Immundiagnostisches Seminar: Die Diagnostik von
Infektionen, Autoimmun- und anderer Erkrankungen mit
immunologischen Techniken, 2st.
Immunologisches Praktikum für Mediziner und
Naturwissenschaftler
Immundiagnostisches Praktikum
Die immunologische Untersuchung der Stammesgeschichte
des Menschen und anderer Primaten, 1st.
Mannheim
Klüter, H., Bieback, K., Bugert, P., Kern, S:
Studiengang: MaReCuM, Modul I naturwissenschaftlich
Propädeutik/Zelle I
30.10.-15.12.2006
Klüter, H., Kerowgan, M., Janetzko, K., Bieback, K., Bugert,
P., Müller-Steinhardt, M., Nguyen, X. D., Schuller, A.,
Stichling, F.:
Blockkurs 'Transfusionsmedizin', 03. - 07.04.2006,
Bibliothek/Labor Institut Mannheim
Blockkurs 'Transfusionsmedizin', 25. - 29.09.2006,
Bibliothek/Labor Institut Mannheim
Klüter, H., Bugert, P., Neumaier, M., Bohus, M., Hof, H., Yard,
B., Schadendorf, D., Riedel, F., Müller-Steinhardt, M.:
Querschnittsbereich 4: „Infektiologie/Immunologie“ 23.10.2006
Querschnittsbereich 4: „Infektiologie/Immunologie“ 07.12.2006
PJ-Seminar, 10.01.2006, Bibliothek Institut Mannheim
PJ-Seminar, 07.03.2006, Bibliothek Institut Mannheim
PJ-Seminar, 23.05.2006, Bibliothek Institut Mannheim
PJ-Seminar, 10.10.2006, Bibliothek Institut Mannheim
PJ-Seminar, 21.11.2006, Universitätsklinikum Mannheim
PJ-Seminar, 12.12.2006, Universitätsklinikum Mannheim
Griffiths D, Klüter H: Advances in clinical immunology
Klüter, H., Bieback, K., Kerowgan, M., Bugert, P., Kern, S.,
Müller-Steinhardt, M.:
Transfusionsmedizinisches und immunologisches Kolloquium:
18.01.2006, Dr. Hirv, DRK-Blutspendedienst Baden-
Württemberg-Hessen, Institut Ulm,
NK-KIR Rezeptorsystem; Bedeutung für die allogene
Stammzelltransplantation
25.01.2006, Dr. Lannert, Universitätsklinikum Heidelberg,
Abteilung Innere Medizin V,
Similarities and Differences of Human Healthy and Malignant
Hematopoietic Stem Cells
08.02.2006, Dr. Gössler, Universitätsklinikum Mannheim,
Hals-Nasen-Ohrenklinik, Stammzellen im Tissue Engineering -
new hope oder nur hype
22.02.2006, Dr. Schmidt, Leiter der Infektionsserologie DRK
Blutspendedienst
Baden-Württemberg-Hessen, Institut Frankfurt, Neue
Pathogene und ihre Relevanz für die Transfusionsmedizin
178

Lehrveranstaltungen 2006
01.03.2006, Herr Dr. Richter, DRK-Blutspendedienst Baden-
Württemberg-Hessen, Institut Baden-Baden
Thrombozyten-Lagerung: Unterbrechung der
Agitation/Verlängerung der Lagerzeit auf 7 Tage
22.03.2006, Herr Dr. Tonn, DRK Blutspendedienst Baden-
Württemberg-Hessen, Institut Frankfurt, HLA-Labor
REPAIR AMI: Eine randomisierte, doppelblinde Multizenter-
Studie zur Reinfusionvon Knochenmark-Progenitorzellen bei
akutem Myokardinfarkt
05.04.2006, Frau Mara Vinci, Universitätsklinikum Mannheim,
Neurochirurgische Klinik,
Analysis of the Multistep Process of EPCs recruitment during
Tumor Angiogenesis .
26.04.2006, Herr Prof. Hastka, Universitätsklinikum
Mannheim, III. Medizinische Klinik,
"Hochdosistherapie und Stammzell-transplantation".
10.05.2006, Frau Dr. Offergeld, Robert Koch-Institut, Abteilung
für Infektionsepidemiologie
24.05.2006, Herr Dr. Mailänder, DRK-Blutspendedienst
Baden-Württemberg-Hessen, Institut Ulm,
Markierung von Stammzellen
07.06.2006, Frau Dr. Martina Meinke, Charité-
Universitätsmedizin Berlin, Campus Benjamin Franklin Institut
für Medizinische Physik und Lasermedizin
Zerstörungsfreie Hämoglobinmessung in Blutprodukten
14.06.2006, Herr Dr. Schwarz, DRK-Blutspendedienst Baden-
Württemberg-Hessen, Institut Ulm
Genkorrektur-mechanismen
05.07.2006, Herr Dr. Voelskow, Datenschutzschulung
27.09.2006, Herr Dr. Reinhardt, DRK-Blutspendedienst
Baden-Württemberg-Hessen, Institut Ulm
Leukozytapharesen (Anreicherung der mononukleären
Zellfraktion aus autologen und allogenen Zytapheresen )
11.10.2006, Frau Prof. Brojer und Frau Dr. Michalewska,
polnisches nationales Referenzlabor für NAT und
Immunhämatologie
“NAT screening for viral markers in Poland" Blood grouping
(ABO, RhD, other phenotypes) in Polish donors”
25.10.2006, Herr PD Dr. med. Johannes Greil,
Universitätsklinik Heidelberg, Klinik für Kinder- und
Jugendmedizin,
Allogene Stammzell-transplantation bei Kindern und
Jugendlichen
08.11.2006, Herr Dr. Schmidt, MACSmolecular, Miltenyi Biotec
GmbH,
Vorstellung der MACS molecular-Technik
22.11.2006, Herr Professor Dr. Lutz Fricke, UKSH Campus
Lübeck, Transplantationszentrum,
CMV nach Transplantation - Prophylaxe oder präemptive
Therapie?
29.11.2006, Herr MUDr. W. Sireis, DRK Blutspendedienst
Baden Württemberg-Hessen,
Institut Frankfurt,
Struktur und Aufgaben des QM, Erstellung und Lenkung der
SOPs, ARM-System, Change Control Verfahren
01.02.2006, Nicole Dostmann, Mikrosatelliteninstabilität bei
colorektalen Adenomen
15.02.2006, Birthe Lauer
08.03.2006, Dr. rer. nat. Peter Bugert, Rezeptoren der
Thrombozyten und das Thromboserisiko bei Patienten mit
Lupus Antikoagulanz
15.03.2006, Dr. med. M. Kerowgan, Kryoglobuline
29.03.2006, Asli Kocaömer, Etablierung eines standardisierten
Isolations-und Expansionsprotokoll von mesenchymalen
Stammzellen für den klinischen Einsatz
12.04.2006, Robert Skeate, Diagnosis and Treatment of
Refractoriness to Platelet Transfusions at the University of
Minnesota Medical Center
179
03.05.2006, Kathrin Stamer, Molekulare und funktionelle
Charakterisierung von CD40L
17.05.2006, Stephan Gerodez, Untersuchungen zur GMPkonformen
Präparation von Nabelschnurblut: Quantifizierung
von SCID repopulating cells
31.05.2006, Nathalie Hoßfeld, Identifizierung und
Charakterisierung von Genen der akuten Entzündung
21.06.2006, Christian Kessler, Co-Transplantation von
mesenchymalen Stammzellen und hämatopoetischen
Stammzellen im SCID-Mausmodell
28.06.2006, Dr. med. Franziska Stichling, Stufenplan
12.07.2006, Kathrin Ferlik, Vergleichende
Genexpressionsanalyse von mesenchymalen Stammzellen
aus Nabelschnurblut und Fettgewebe während der
chondrogenen Differenzierung
13.09.2006, Probevorträge für den DGTI-Kongress
04.10.2006, Dr. Kühl, Technik zur Gewinnung von
Progenitorzellen aus dem Auge
18.10.2006, Annette Schuller, Variante Creutzfeldt-Jakob-
Erkrankung Stellungnahme des
Robert-Koch-Instituts
15.11.2006, Angelika Schedel, Charakterisierung der
molekularen Grundlagen des Aspirin-like Defekts bei
pädiatrischen Patienten und deren Familien
13.12.2006, Johanna Hage, Genanalyse bei Patienten mit
Morbus Osler
Tübingen
Infektionen durch Blutprodukte
i-KliC: Infektion
OTA-Unterricht: Transfusionsrisiken, Dokumentation,
Regelwerke, Rückverfolgung
Infektionen durch Blutprodukte i-KliC: Infektion
PJ-Studenten: Thrombopenie , Hämolyse
Infektionen durch Blutprodukte i-KliC: Infektion
PJ-Studenten: Risiken bei homologer Bluttransfusion,autologe
Bluttransfusion
OTA-Unterricht: Blut
Apparative und molekularbiologische Methoden in der
Sportmedizin (TüKlic)
Forschungsseminar Transfusionsmedizin
Doktoranden- und Diplomandenkolloquium Sportmedizin
Grundbegriffe der Blutphysiologie (OTA)
Reaktionsmuster des Organismus – Entzündung (OTA)
Reaktionsmuster des Organismus - Krankhafte
Veränderungen and Zelle und Gewebe (OTA)
Zentrales und peripheres Nervensystem (Logopädieschule)
i-Klic Transfusionsmedizin
Skills Lab Transfusionsmedizin i.R. Blockpraktikum Innere
Medizin
Ulm
WS 2005/2006:
Einführung in die klinische Medizin
Prof. Dr. H. Schrezenmeier
SS 2006:
Einführung in die klinische Medizin
Prof. Dr. H. Schrezenmeier
WS 2005/2006:
Wahlpflichtfach Transfusionsmedizin
(2 SWS; mit Prüfung; scheinpflichtig)
Prof. Dr. H. Schrezenmeier

SS 2006:
Wahlpflichtfach Transfusionsmedizin
(2 SWS; mit Prüfung; scheinpflichtig)
Prof. Dr. H. Schrezenmeier
WS 2005/2006:
Spezielle Aspekte der klinischen Pharmakologie: Blutprodukte
als Medikamente (mit Prüfung; scheinpflichtig)
Prof. Dr. H. Schrezenmeier
SS 2006:
Spezielle Aspekte der klinischen Pharmakologie: Blutprodukte
als Medikamente (mit Prüfung; scheinpflichtig)
Prof. Dr. H. Schrezenmeier
SS 2006:
Vorlesung
Mikrobiologie/Virologie/Immunologie/Transfusionsmedizin
(Prof. Dr. H. Schrezenmeier; Prof. Dr. W. A. Flegel; PD Dr. J.
Mytilineos; Dr. K. Schwarz)
- Grundlagen von Blutgruppenantigenen
- Durchführung von Transfusionen
- Herstellung, Eigenschaften von Blutprodukten
- Indikationen für Blutprodukte
- Leitlinien Hämotherapie; Dokumentationen der
Transfusionstherapie
- unerwünschte Wirkungen von Transfusionen
- Transplantationsimmunologie
SS 2006:
Praktikum (3 x): Transfusion
Prof. Dr. W.A. Flegel
WS 2005/2006:
POL-Gruppe: Blutprodukte: Anwendung und unerwünschte
Wirkungen
Prof. Dr. H. Schrezenmeier
Lehrveranstaltungen 2006
POL-Gruppe: Indikation für Transfusionen;
Transfusionsreaktionen
Prof. Dr. W.A. Flegel
SS 2006:
POL-Gruppe: Zelltherapie
Prof. Dr. H. Schrezenmeier
POL-Gruppe: Immundefekte
PD Dr. J. Mytilineos
POL-Gruppe: Indikation für Transfusionen;
Transfusionsreaktionen
Prof. Dr. W.A. Flegel
SS 2006:
Vorlesung Transfusionsmedizin in „Mikrobiologie für Studenten
der Zahnmedizin“
Prof. Dr. W.A. Flegel
Praktikum Transfusionsmedizin in „Mikrobiologie für Studenten
der Zahnmedizin“
Prof. Dr. W.A. Flegel
WS 2005/2006:
Vorlesung „BLOOD“ im Rahmen des Masterstudiengangs
„Advanced Materials“
Prof. Dr. H. Schrezenmeier
SS 2006:
Vorlesung „BLOOD“ im Rahmen des Masterstudiengangs
„Advanced Materials“
Prof. Dr. H. Schrezenmeier
180

Fortbildungsveranstaltungen 2006
Fortbildungsveranstaltungen 2006
Baden Baden
26.01.2006
Voigt, B.: Unterweisung nach der Gefahrstoffverordnung,
Institut Baden-Baden
16.02.2006
Butz, H.: Prionen und Prionenreduktion – Sicherheit in der
Transfusionsmedizin, Institut Baden-Baden
23.03.2006
Dengler, T.: Vergleich der epidemiologischen Daten des DRK-
Blutspendedienstes Baden-Württemberg – Hessen 2005,
Institut Baden-Baden
27.04.2006
Schmidt, M.: Bakterielle Kontamination von Blutprodukten,
Nachweismethoden, klinische Relevanz und Inaktivierung,
Institut Baden-Baden
18.05.2006
Henschler, R.: Blutstammzellen, Institut Baden-Baden
22.06.2006
Tonn, T.: Knochenmarkvorläuferzellen zur Therapie des
Herzinfarktes, Institut Baden-Baden
29.06.2006
Sitzung Arbeitskreis Hämotherapie, Institut Baden-Baden
7./8.7.2006
Fortbildung Klinische Transfusionsmedizin zur Erlangung der
Qualifikation als Transfusionsverantwortlicher/-beauftragter,
Stadtklinik Baden-Baden
12.10.2006
Brojer, E.: NAT screening for viral markers in Poland.
Michalewska, B.: Blood grouping (AB0, RhD, other
phenotypes) in Polish donors. Institut Baden-Baden
19.10.2006
Herr, G.: Avitale Gewebetransplantate – Gewebebank Baden-
Baden, Institut Baden-Baden
16.11.2006
Seyboth, S.: Reanimation/Notfallversorgung, aktualisierte
Vorgaben, Institut Baden-Baden
21.12.2006
Bugert, P.: AB0-Blutgruppensystem – Genotyp/Phänotyp
Korrelation, Institut Baden-Baden
Frankfurt
11.01.06
PD Dr. C. Seidl, Dr. R. Henschler, MUDr. W. Sireis
Institut für Transfusionsmedizin Frankfurt, DRK
Blutspendedienst Baden-Württemberg-Hessen
Vorstellung des Projektes EU-Q-Blood-SOP zur Erstellung
eines Qualitätsmanuals für SOPs
26.01.06
Prof. Maciej Kurpisz, Department of Reproductive Biology and
Stem Cells
Polish Academy of Sciences, Poznan, Polen
Myoblasts – physiology and application in medicine
01.02.06
Dr. Rudolf Richter,
Institut für Transfusionsmedizin Frankfurt, DRK
Blutspendedienst Baden-Württemberg-Hessen
Klinische Einsatzmöglichkeiten mesenchymaler Stammzellen
08.02.06
PD Dr.G. Geerling, - ausgefallen – nachgeholt am 08.02.06
Univ. Augenklinik Würzburg
Herstellung und Anwendung von autologem Serum zur
Therapie in der Opthamologie
22.02.06
Dr. Stephan Findhammer
„Abweichungs- und Risikomanagement“
181
01.03.06
Dr.Birgit Linnemann
Klinikum der Johann-Wolfgang-Goethe Universität, Frankfurt
am Main
Arterielle Thrombosen und Thrombophile
Gerinnungsstörungen
08.03.06
Nicola Krzossok und Prof. Schächinger, Uni-FfM
Institut für Transfusionsmedizin Frankfurt, DRK
Blutspendedienst Baden-Württemberg-Hessen
Herstellung von Zelltherapiepräparaten für die Repair-AMI-
Studie
15.03.06
Dr. Markus Müller,
Institut für Transfusionsmedizin Frankfurt, DRK
Blutspendedienst Baden-Württemberg-Hessen
Übertragung von Leukämien durch Blutprodukte?
22.03.06
Dr. Gesine Bug
Klinikum der Johann-Wolfgang-Goethe Universität,
Frankfurt/M.
Steuerung des Proliferationsverhaltens von gesunden und
leukämischen Stammzellen durch Valproinsäure
29.03.06
Fortbildungsveranstaltung für Ärzte und MTAs
Referenten des Institutes für Transfusionsmedizin Frankfurt,
DRK Blutspendedienst Baden-Württemberg-Hessen
05.04.06
Dr. Knut Gubbe
Institut für Transfusionsmedizin Plauen, DRK
Blutspendedienst Sachsen
Validierung und Routinebetrieb der in-house-NAT zum
Nachweis transfusionsassoziierter Viren im
DRK-BSD-Sachsen gGmbH
12.04.06
Herr Prof. Josef A. Käs Universität Leipzig; Frau Dr. Karin
Schütze PALM Microlaser Technologies, Bernried
Optical Stretcher und MicroBeam-Technologien
19.04.06
Dipl.-Biol. H.-U. Pfeiffer
Institut für Transfusionsmedizin Frankfurt, DRK
Blutspendedienst Baden-Württemberg-Hessen
Aktueller Stand der Zulassungen von Blutpräparaten im DRK
Blutspendedienst Baden-Württemberg – Hessen
26.04.06
Dr. Christof Geisen
Institut für Transfusionsmedizin Frankfurt, DRK
Blutspendedienst Baden-Württemberg-Hessen
Evaluationsstudie für ein neues Blutgruppen-
Bestimmungsverfahren
03.05.06
Dr. med. Jörg Schüttrumpf, Institut für Transfusionsmedizin
Frankfurt, DRK Blutspendedienst Baden-Württemberg-Hessen
Gentherapie für Hämophilie B
10.05.06
Institut für Transfusionsmedizin Frankfurt, DRK
Blutspendedienst Baden-Württemberg-Hessen
53. Transfusionsmedizinischer Fortbildungskurs für Ärzte und
MTAs
17.05.06
MUDr. Sireis, Kontrolleiter, Institut für Transfusionsmedizin
Frankfurt, DRK Blutspendedienst Baden-Württemberg-Hessen
Struktur und Aufgaben des Qualitätsmanagement-Systems im
DRK-Blutspendedienst Baden-Württemberg - Hessen
24.05.06
Dr. Zhixiong Li Medizinische Hochschule, Hannover
Mouse models for modelling hematological malignancies using
retroviral gene transfer

07.06.06
PD Dr. Hans Martin, Johann Wolfgang Goethe-
Universitätsklinikum
Neue Entwicklungen in der allogenen
Stammzelltransplantation
14.06.06
Dr. Anna Pavlova, Institut für Transfusionsmedizin Frankfurt,
DRK Blutspendedienst Baden-Württemberg-Hessen
Detection of large deletions by dHPLC methods in blood
coagulation genes
21.06.06
PD Dr. Elke Pogge von Strandmann Labor für
Immunotherapie Universitätsklinikum Köln Innere Klinik I
Vorstellung von neuen Daten zu BAT3 und NK Zell-
Rezeptoren
28.06.06
Prof. Dr. Jürgen Hescheler Klinikum der Universität zu Köln
Institut für Neurophysiologie
Differenzierung embryonaler Stammzellen zu Kardiomyozyten
06.09.06
Dr. med. Ralf Ludwig, Zentrum der Dermatologie und
Venerologie, Klinikum der Johann Wolfgang Goethe-
Universität
Bedeutung der junktionalen Adhäsionsmoleküle für die
Extravasation von Leukozyten
13.09.06
PD Dr. med. Reinhard Henschler
Aktueller Stand des Entwurfs zum Gewebegesetz
27.09.06
Dr. med. Heike Pfeifer Med. Klinik II Klinikum der Johann
Wolfgang Goethe-Universität
Minimal Residual Disease und Mutationsanalysen bei der Ph+
Akuten Lymphatischen Leukämie
04.10.06
Dr. med. Csilla Jámbor Klinik für Anästhesiologie,
Intensivmedizin und Schmerztherapie Klinikum der Johann
Wolfgang Goethe-Universität
Perioperatives Gerinnungsmanagement aus der Sicht der
Anästhesisten
11.10.06
Dr. med. M. Schmidt Institut für Transfusionsmedizin Frankfurt,
DRK Blutspendedienst Baden-Württemberg-Hessen
Inzidenz von Influenzavirus H5N1 in Blutspenden
18.10.06
PD Dr. med. Torsten Tonn Institut für Transfusionsmedizin
Frankfurt, DRK Blutspendedienst Baden-Württemberg-Hessen
Transfusionsmedizinische Versorgung von Patienten nach TX
01.11.06
Dr. rer. nat. Esther Schellenberg, Institut für
Transfusionsmedizin Frankfurt, DRK Blutspendedienst Baden-
Württemberg-Hessen
Virusinaktivierung durch Ultraschall-Verfahren
08.11.06
Dr. Erika Deak Institut für Transfusionsmedizin Frankfurt, DRK
Blutspendedienst Baden-Württemberg-Hessen
Rolle von Rho-GTPasen in der Tumor-Neovaskularisierung
15.11.06
Herr PD Dr. Torsten Tonn
(hat den „Fritz-Acker-Preis“ (Forschungspreis 2006) von Prof.
Schöppe überreicht bekommen)
Adoptive Immuntherapie maligner Erkrankungen mit der
immortalisierten natürlichen Killerzelllinie NK-92
22.11.06
PD Dr. C. Micha Nübling Virologie Paul-Ehrlich-Institut
Stand der Technik bei kommerziellen NAT-Systemen
29.11.06
PD Dr. med. R. Henschler Institut für Transfusionsmedizin
Frankfurt, DRK Blutspendedienst Baden-Württemberg-Hessen
Facharztwissen Grundlagen der Blutkomponentenproduktion
und Herstellung von Sonderpräparaten
Fortbildungsveranstaltungen 2006
06.12.06
Dipl.-Biol. Stefan Heinz Institut für Transfusionsmedizin
Frankfurt, DRK Blutspendedienst Baden-Württemberg-Hessen
Verbesserte Expression von Gerinnungsfaktor VIII in 293T und
hämatopoetischen Zellen
13.12.06
Prof. Dr. med. Christian Seidl, Institut für Transfusionsmedizin
Frankfurt, DRK Blutspendedienst Baden-Württemberg-Hessen
Organtransplantation: klinische Kriterien der
Gewebekompatibilität und Organallokation durch
Eurotransplant
20.12.06
Dr. rer. nat. Sentot Santoso, Institut für klinische Immunologie
und Transfusionsmedizin
Justus Liebig Universität Gießen
Genetische Grundlagen und Diagnose von Thrombozyten-
Antikörpern
Ulm
11.01.2006
PD Dr. Michael Müller-Steinhardt, DRK-BSD BaWü-He, Institut
Mannheim: Neue Strategien zur Verbesserung des
Nierentransplantatüberlebens. Von der genetischen Vielfalt
des HLA-Systems zu den Zytokingenen. Work-in-Progress
18.01.2006:
Prof. Dr. Schrezenmeier und Dr. M: Höning, Kinderklinik Ulm:
ASH-Highlights. Work-in-Progress
25.01.2006
Dr. Dirk Strunk, Abt. Hämatologie der Med. Universität Graz:
Two Steps to Propagate Mesenchymal Stem Cells for Clinical
Application. Work-in-Progress
25.01.2006
Dr. Eva Rohde, Abt. Hämatologie der Med. Universität Graz:
Blood Monocytes Mimic Endothelial Progenitor Cells. Work-in-
Progress
15.02.2006
PD Dr. M. Fuchs, Innere Medizin I, Universitätsklinikum Ulm:
Akute und chronische Hepatitis C. Update 2006. Work-in-
Progress
22.02.2006
Dr. Silke Polzin, Abt. Rechtsmedizin, Universität Würzburg:
Semiquantitative Bestimmung der mitochondrialen 4.977-bp-
Deletion in Blut und Mundschleimhautabstrichen lebender
Personen – Ein Beitrag zur Lebensalterschätzung. Work-in-
Progress
07.03.2006
OA J. Burkhardt, BRK München: Novellierung der
Hämotherapierichtlinien. Fortbildungsveranstaltung der
Abteilung Serologie.
08.03.2006
Prof. Dr. T. Wirth und Dr. B. Baumann, Abt. Physiol. Chemie
der Universität Ulm: NF-�B und Krankheit. Work-in-Progress.
22.03.2006
PD Dr. B. Bugert, Dr. A. Scharberg, DRK-BSD BaWü-Hessen,
Institut Mannheim und Institut Baden-Baden: JAHK-Antigen-
(Rh53) serologische Eigenschaften und molekularbiologische
Basis. Work-in-Progress.
16.-17.03.2006
Firma Geovision: Wege zur hochauflösenden Klasse I
Typisierung. Fortbildungsveranstaltung der Abteilung
Transplantationsimmunologie
05. – 06.04.2006:
33. Blutgruppenserologischer Fortbildungskurs, Ulm (Leitung
Prof. Dr. W.A. Flegel)
19.04.2006
PD Dr. J. Mytilineos: EBMT-Bericht. Work-in-Progress
26.04.2006
Cand. med. Timo Lüttringhaus: Genotypisierung der D
negativen Blutspender in Korea. Fortbildungsveranstaltung der
Abteilung Serologie.
26.04.2006
Oliver Engelking, Fa. MacoPharma (Mouvaux, Frankreich):
Demonstration MSC-Expansion. Work-in-Progress
182

Fortbildungsveranstaltungen 2006
10.05.2006
Prof. Dr. G. Denomme, Laboratory Medicine and
Pathobiology, University of Toronto, Canada: Mass Blood
Group Genotyping Using Microarray Technology. Work-in-
Progress
17.05.2006
Prof. Dr. G. Denomme, Laboratory Medicine and
Pathobiology, University of Toronto, Canada: Clinical Utility of
RHD Genotyping in 33,000 In- and Outpatients from Toronto.
Work-in-Progress
24.05.2006
Prof. Dr. G. Denomme, Laboratory Medicine and
Pathobiology, University of Toronto, Canada: Management of
Hemolytic Disease of the Newborn: Past, Present and Future.
Work-in-Progress
31.05.2006
Dr. M. Schorpp, Max-Planck-Institut, Freiburg: Genetic
analysis of vertebrate thymus development. Work-in-Progress
07.06.2006
Prof. Dr. G. Denomme, Laboratory Medicine and
Pathobiology, University of Toronto, Canada: Canadian Blood
Services: Research and Development. Work-in-Progress
14.06.2006
Dr. U. Mayr-Wohlfart: Parvovirus B 19/Ringelröteln. Work-in-
Progress
21.06.2006
Prof. Dr. H. Schrezenmeier: Bakterielle Kontamination von
Blutkomponenten (BacT/Alert-Studie). Work-in-Progress
28.06.2006
PD Dr. J. Kun, Abteilung Tropenmedizin der Universität
Tübingen: Human Genetic Polymorphisms in Malaria and
Hepatitis B. Work-in-Progress
05.07.2006
Dr. V. Mailänder: Regenerative Therapie beim Myokardinfarkt:
Ergebnisse der Präparation der ersten Patienten. Work-in-
Progress
12.07.2006
Dr. D. Niewolik: DNA-PKcs-Abhängigkeit der Artemis-
Aktivierung. Work-in-Progress
19.07.2006
Dr. D. Buck, Charité Berlin: Molekulargenetische Analyse von
Patienten mit kombiniertem Immundefekt und Mikrozephalie in
Verbindung mit defekter DNA-Reparatur. Work-in-Progress
183
26.07.2006
Dr. Selim Corbacioglu, Universitätskinderklinik Ulm: Activating
Mutations of Stem Cell Factor Receptor c-kit in Childhood
AML. Work-in-Progress
28.09.2006
Dr. rer. nat. v. Zabern: Aktueller Stand der Biochipentwicklung.
Fortbildungsveranstaltung der Abteilung Serologie.
02.10.2006
Prof. Dr. Qingwei: RHD alleles and RH haplotype distribution
in 50 Tibetans. Work-in-Progress
04.10.2006
PD Dr. Martin Wagner, Klinik für Innere Medizin I,
Universitätsklinikum Ulm: Embryonale Pankreasgang-
Entwicklung – Mögliche Implikationen für Transformation und
Regeneration. Work-in-Progress
11.10.2006
Dr. med. Manfred Hönig, Klinik für Kinder- und Jugendmedizin
Ulm: Spontanreversion in T- und NK-Zellen bei JAK3-Defekt.
Work-in-Progress
16.10.2006
Prof. Dr. W.A. Flegel: Genetik und Physiologie der
Blutgruppen. Fortbildungsveranstaltung der Abteilung
Serologie.
18.10.2006
PD Dr. Ansgar Schulz, Klinik für Kinder- und Jugendmedizin
Ulm: Osteopetrose – Von der Pathogenese zur Therapie.
Work-in-Progress
08.11.2006
Dr. Susanne Gatz, Klinik für Kinder- und Jugendmedizin Ulm:
Resveratrol inhibiert DNA-Doppelstrangbruch- Reparatur in
ATM-p53- und ATM/ATR-NBS1- abhängiger Weise in
lymphoblastoiden Zelllinien. Work-in-Progress
22.11.2006
Dr. M. Marx: Linienspezifische STR-basierte
Chimärismusanalyse nach allogener
Stammzelltransplantation. Work-in-Progress
29.11.2006
Dr. Mark Stroick, Neurologische Klinik, Universitätsklinikum
Mannheim: Neuronale Stammzellen. Work-in-Progress
30.11. – 01.12.2006:
34. Fortbildungskurs für Transfusionsverantwortliche und
Transfusionsbeauftragte (Leitung: Prof. H. Schrezenmeier)
20.12.2006
Dr. Peter Reinhardt: Triple-Apheresen. Work-in-Progress

Akademische Ausbildung 2006
Berufung auf Lehrstuhl
Prof. Dr. Hermann Eichler
Apl Professur
Prof. Dr. med. Christian Seidl
Verleihung der akademischen Bezeichnung Professor auf Vorschlag des Fachbereichs Medizin
sowie nach Anhörung des Senats der Frankfurt am Main Urkunde vom 7. Sept. 2006
Habilitationen
PD Dr. med. Torsten Tonn, Johann W. Goethe Universität, Frankfurt am Main
PD Dr. med. Reinhard Henschler, Johann W. Goethe Universität, Frankfurt am Main
Patente 2006
Name des Patents
Verfahren zur Detektion von Bakterien in aus Blutabgeleiteten Proben mit Hilfe einer Realtime-
PCR
Anmelder
DRK Baden-Württemberg – Hessen
Erfinder
PD Dr. M. Schmidt, Kai Hourfar, Prof. Dr. E. Seifried
Veröffentlichung
09.06.2006
Name des Patents
Verfahren zur Detektion von Bakterien in aus Blut abgeleiteten Proben mit Hilfe einer
Durchflusszytometrie
Anmelder
DRK Baden-Württemberg – Hessen
Erfinder
PD Dr. M. Schmidt, Kai Hourfar, Prof. Dr. E. Seifried
Veröffentlichung
09.06.2006
Name des Patents
Zusammensetzungen und Verfahren zur Amplifikation von
Hepatitis A-Viren (HAV) und/oder Parvoviren B19 (PB19)
mittels Multiplex-PCR
Anmelder
DRK Baden-Württemberg – Hessen
Erfinder
PD Dr. M. Schmidt, Kai Hourfar, Prof. Dr. E. Seifried
Veröffentlichung
18.08.2006
Name des Patents
Vorrichtung aus einer Messkammer und einem über einen Schnellverschluss in die
Messkammer integrierbaren Resonator für die Flüssigkeitssensorik
Erfinder
Dr. F. K. Gehring
184

Mitgliedschaften/Funktionen 2006
Mitgliedschaften/Funktionen 2006
American Association for Clinical Chemistry
American Association of Blood Banks (AABB)
American College of Sports Medicine
American Society for Histocompatibility (ASHI)
American Society of Clinical Oncology (ASCO)
American Society of Hematology (ASH)
Arbeitsgemeinschaft der Ärzte staatlicher und kommunaler Blutspendedienste
Arbeitsgemeinschaft der Knochenmarkspender-Dateien Deutscher Blutspendedienste e.V. (ARGE-KMSB)
Arbeitsgemeinschaft der Sachverständigen für Abstammungsgutachten in Deutschland
Arbeitsgemeinschaft für pädiatrische Immunologie (API)
Arbeitskreis "Richtlinien zur Transplantation von hämatopoetischen Stammzellen" des wissenschaftlichen Beirats der
Bundesärztekammer
Associate scientific member Biomedical Excellence for Safer Transfusion, ISBT
Association Suisse de Médécine Transfusionelle (ASMT) / Schweizer Vereinigung für Transfusionsmedizin (SVTM),
Membre d’honneur
Berufsverband Deutscher Transfusionsmediziner
Biomedical Excellence of Safer Transfusion Collaborative (BEST)
Blood Therapies in Medicine
Centrum für Reisemedizin
Deutsche Arbeitsgemeinschaft für Knochenmark und Blutstammzelltransplantation e.V. (DAG-KBT)
Deutsche Gesellschaft für Abstammungsgutachter
Deutsche Gesellschaft für Hämatologie und Onkologie (DGHO)
Deutsche Gesellschaft für Immungenetik (DGI)
Deutsche Gesellschaft für Immunologie (DGfI)
Deutsche Gesellschaft für Innere Medizin
Deutsche Gesellschaft für Klinische Chemie (DGKC)
Deutsche Gesellschaft für Technische Zusammenarbeit (GTZ)
Deutsche Gesellschaft für Transfusionsmedizin und Immunhämatologie (DGTI)
Deutsche Transplantationsgesellschaft (DTG)
Deutschen Akkreditierungsrat (DAR)
Deutschen Akkreditierungsstelle Chemie (DACH)
Deutschen Gesellschaft für Immungenetik (DGI)
Deutsches Register für Stammzelltransplantationen (DRST)
EU European Commission - Directorate C - Public Health and Risk Assessment
European Bone Marrow Transplantation Group
European Federation for Immunogenetics (EFI)
European Group for Blood and Marrow Transplantation (EBMT)
European Society for Immunodeficiencies (ESID)
Eurotransplant Foundation
FCE Multinational Chair (Federation of Clinical Immunology Societies (FOCIS) Centers of Excellence)
Forum Reisen und Medizin e.V.
Gesellschaft Deutscher Naturwissenschaftler und Ärzte (GDNÄ)
Gesellschaft für Genetik (GfG)
Gesellschaft für Immungenetik
Gesellschaft für Transfusionsmedizin und Immunhämatologie
International Bone Marrow Transplantation Register (IBMTR)
International Histocompatibility Working Group
International Histocompatibility Workshop Council
International PNH Interest Group
International Society for Blood Transfusion (ISBT)
International Society for Cellular Therapy (ISCT)
International Society for Experimental Hematology
International Society for Forensic Haemogenetics (ISFH)
International Society of Blood Transfusion (ISBT)
International Society of Exercise Immunology
New York Academy of Sciences (NYAS)
Normenausschuss Medizin, NAMed, Transfusions-/Infusionsbehältnisse und –geräte aus Kunststoffen
Primary Immunodeficiency Association
Prüfungsausschuss "Transfusionsmedizin" und "Bluttransfusionswesen" der Ärztekammern Baden-Württemberg
Robert Koch-Stiftung
SCARF Exchange (International Immunohematological Exchange Group)
Serum, Cells and Rare Fluids (SCARF)
Society for Cryobiology
Society for Low Temperature Biology (SLTB)
Studienstiftung des Deutschen Volkes
The Transplantation Society
Union of Swiss Societies for Experimental Biology (USGEB)
Weiterbildungsausschuss der Bezirksärztekammer Nordbaden
ZKRD-Standards-Gruppe
185

Mitherausgeber von wissenschaftlichen Fachzeitschriften:
Annals of Hematology
Hämotherapie
Transfusion
Transfusion Medicine and Hemotherapy
Gutachter für wissenschaftliche Fachzeitschriften:
American Journal of Transplantation
Annals of Hematology
BioMed Central Molecular Biology
Biomedical Pharmacology
Blood
Cytotherapy,
Experimental Hematology
Gene Therapy
haematologica
Human Immunology
International Journal of Hematology
International Journal of Immunogenetics
Journal of Cellular and Molecular Medicine
Journal of Gene Therapy
Journal of Immunology
Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics
Molecular and Cellular Biology
Nature Immunology
New England Journal of Medicine
Tissue Antigens
Transfusion
Transplantation
Mitgliedschaften/Funktionen 2006
186

Organe der Gesellschaft
Organe der Gesellschaft
DRK-Blutspendedienst
Baden-Württemberg – Hessen gGmbH
Gesellschafter:
DRK-Landesverband Baden-Württemberg e.V.
DRK-Landesverband Hessen e.V.
DRK-Landesverband Badisches Rotes Kreuz e.V.
Stadt Frankfurt am Main
Gesundheit Nordhessen Holding AG
DRK-Landesverband Sachsen e.V.
DRK-Landesverband Land Brandenburg e.V.
DRK-Landesverband Hamburg e.V.
DRK-Landesverband Schleswig-Holstein e.V.
Unser Aufsichtsrat:
Vorsitzender:
Staatssekretär a. D. Dr. Lorenz Menz
Präsident des DRK-Landesverbandes Baden-Württemberg e. V.
Stellv. Vorsitzende:
Bundesministerin a. D. Hannelore Rönsch
Präsidentin des DRK-Landesverbandes Hessen e. V.
Stellv. Vorsitzender:
Landrat Jochen Glaeser
Präsident des DRK-Landesverbandes Badisches Rotes Kreuz e. V.
Mitglieder:
Holger Adolph
Landesjustitiar des DRK-Landesverbandes Hessen e. V.
Ministerialdirektor a. D. Dr. jur. Eberhard Benz
Landesschatzmeister des DRK-Landesverbandes Baden-Württemberg e. V.
Gerald Böcher
Landesschatzmeister des DRK-Landesverbandes Hessen e. V.
Thomas Brozat
Präsident des DRK-Landesverbandes Brandenburg e. V.
Irmtraut Gürkan
Kfm. Direktorin des Universitätsklinikum Heidelberg
Hans Heinz, MdL
Landesgeschäftsführer des DRK-Landesverbandes Baden-Württemberg e. V.
Prof. Dr. med. Wolfgang Kramer
Stellv. Landesarzt des DRK-Landesverbandes Baden-Württemberg e.V.
Helmut Lechlein
Präsident des DRK-Landesverbandes Schleswig-Holstein e.V.
187

RA Michael Merle
Landesjustitiar des DRK-Landesverbandes Badisches Rotes Kreuz e.V.
Ministerialdirigent Hans-Jürgen Müller-Arens
Ministerium für Wissenschaft, Forschung und Kunst Baden-Württemberg
Dirk Reimers
Präsident des DRK-Landesverbandes Hamburg e. V.
Hans Hermann Reschke
Konsortialmitglied Bankhaus Metzler
Dr. Gerhard M. Sontheimer
Vorstandsvorsizender der Gesundheit Nordhessen Holding AG
Dr. Helmut Weidelener
Präsident des DRK-Landesverbandes Sachsen e. V.
Organe der Gesellschaft
Birgit Wiloth-Sacherer
Landesgeschäftsführerin des DRK-Landesverbandes Badisches Rotes Kreuz e. V.
Dieter Wolf
Landesbereitschaftsleiter des DRK-Landesverbandes Baden-Württemberg e. V.
Geschäftsführer:
Prof. Dr. med. Erhard Seifried, Ärztlicher Direktor
Dipl.-Volkswirt Manfred Stähle, Kaufmännischer Geschäftsführer
188

Impressum
Herausgeber:
DRK-Blutspendedienst Baden-Württemberg – Hessen gGmbH
Sandhofstr. 1
60528 Frankfurt am Main
Verantwortlichkeit für die Inhalte:
Institut Baden-Baden: Dr. med. Ekkehard Richter
Institut Frankfurt: Prof. Dr. med. Erhard Seifried
Institut Heidelberg: Prof. Dr. med. Stefan Meuer
Institut Mannheim: Prof. Dr. med. Harald Klüter
Institut Tübingen: Prof. Dr. med. Hinnak Northoff
Institut Ulm: Prof. Dr. med. Hubert Schrezenmeier
Gesamtverantwortung:
Prof. Dr. med. Erhard Seifried
Redaktion:
Institut für Transfusionsmedizin und Immunhämatologie Frankfurt
DRK-Blutspendedienst Baden-Württemberg – Hessen gGmbH
Sandhofstr. 1
60528 Frankfurt am Main
Dipl. Biol. Stefan Heinz (verantwortlich)
PD Dr. med. Reinhard Henschler
Dr. med. Markus Müller
Prof. Dr. med. Erhard Seifried
Dipl.Ing. Christine Ströbele
Druck:
Copy Gigant
Nibelungenplatz 3
60318 Frankfurt am Main
189