4 .Polyamine als Wachstumsmodulatoren- in vitro Untersuchungen

POLYAMINE 79
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Kapitel 2
Um festzustellen, ob und in welchem Ausmaß Spermin unter
verschiedenen Bedingungen von Yac-1-Zellen aufgenommen
wird, wurde 14 C-Spermin den Zellen in Anwesenheit von FCS
und Pferdeserum im Inkubationsmedium angeboten. Innerhalb
von 60 Minuten nehmen die Zellen in Anwesenheit von
foetalem Kälberserum und Pferdeserum ca. 0,2 attomol (= 2 x
10 -19 mol) pro Zelle auf. Eine Präinkubation mit Polyaminen
in derselben Zusammensetzung wie in M1 verhindert die
Aufnahme von 14 C-Spermin in die Zellen fast vollständig.
Diese Wirkung könnte dadurch erklärt werden, daß durch die
Vorinkubation mit dem Polyamingemisch die Zellen bereits
ihre Kapazität für die Aufnahme exogener Polyamine
erschöpft haben und deshalb das markierte Spermin nicht
mehr aufnehmen können. Dieser Hemmeffekt tritt bei der
Zugabe von M1 zum Inkubationsmedium trotz des hohen
Polyamingehaltes nicht auf (Abb.8). In dem Milzextrakt
liegen die Polyamine vermutlich an Proteine oder andere
Bestandteile des Extraktes gebunden vor. Dadurch sind sie für
die Zellen nicht frei verfügbar. Es ist wahrscheinlich, daß die
"geblockten" Polyamine in M1 zunächst durch im Medium
vorhandene Substanzen verfügbar gemacht werden müssen.
Erst dann können sie von den Zellen aufgenommen werden.
Dieser Prozeß scheint einen längeren Zeitraum als 60 Minuten
in Anspruch zu nehmen. Yac-1-Zellen, die mit M1
präinkubiert wurden, nehmen Polyamine unvermindert auf.
Diese Versuchsergebnisse lassen sich mit den Befunden von
Toninello et al. (1988) und Marsh et al. (1988) vergleichen.
Rattenlebermitochondrien zeigen eine lineare Aufnahme von
bis zu 50-60 nmol 14 C-Spermidin pro mg Zellprotein
innerhalb von 20-30 min. Exogenes Acetat (20 mM)
verlangsamt und minimiert die Aufnahme von 14 C-Spermidin
(Toninello et al., 1988), Lipopolysaccharide (LPS) hingegen
stimulieren die Aufnahme exogener Polyamine (Marsh et al.,
1988). In humanen Milzzellkulturen wird die Aufnahme