Diss_Schamberger_Joachim.pdf - Ernst-Moritz-Arndt-Universität ...

2.2.4 Versuchsdurchführung
Zur Durchführung des Händedesinfektionsverfahren, der Herstellung und
Anwendung der Kontaminationsflüssigkeit sowie zur Bestimmung der Vor- und
Nachwerte wurden, wie auch für die Lebendkoloniezahlbestimmung, die in der
DIN EN 1500 definierten Verfahren in modifizierter Weise eingesetzt. (DIN EN
1500: Chemische Desinfektionsmittel und Antiseptika. Hygienische
Händedesinfektion, Prüfverfahren und Anforderungen (Phase 2/Stufe 2). März
1997).
Herstellung der Kontaminationsflüssigkeit
Verwendete Materialen:
• Sporulationsagar: 8 g Nährboullion, 4 g Hefeextrakt, 20 g Agar-Agar, 0,03 g
Mn2S04 auf 1l Aquadest
• CASO-Boullion
• Bacillus atropheus Sporenstreifen.
Arbeitsschritte:
Der Nährboden wurde hergestellt und bei 121 °C autoklaviert. Es wurde jeweils
20 ml pro Platte ausgegossen. Die Platten wurden 24 h im Brutschrank
getrocknet und dann im Kühlschrank bei +2 bis +8°C gelagert.
Herstellung einer Übernachtkultur: 20 ml CSL wurden mit einem
Sporenteststreifen von Bacillus atropheus über Nacht im Brutschrank bei 35 °C
bebrütet.
1 ml der Übernachtkultur wurde auf dem Sporulationsagar ausplattiert und im
Brutschrank für 7 d bebrütet. Nach 7 d wurde die Sporulationsschicht mit 10 ml
0,9 % NaCl-Lösung und einem Drigalski-Spatel vom Agar gelöst und in
Zentrifugenröhrchen überführt. Dann wurde jeweils die Menge von 2 Platten
zusammengeführt und bei 5000 Umdrehungen/min 5 min zentrifugiert
(waschen). Der Überstand wurde verworfen und mit sterilem Wasser auf 25
ml/Probelösung aufgefüllt. Anschließend erfolgte eine Bestimmung der KBE/ml
und Überprüfung des Sporulationsgrades.
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