Diss_Schamberger_Joachim.pdf - Ernst-Moritz-Arndt-Universität ...

Zunächst wurde versucht, die Sporen in einer Fuchs-Rosenthal-Zählkammer
darzustellen. Dafür wurden mit Methylenblau gefärbte Sporensuspensionen
(jeweils 10 µl verdünnt zu 1/10, 1/100, 1/1000) in die Zählkammer eingebracht
und unter dem Mikroskop untersucht. Es waren reichlich Sporen sichtbar.
Allerdings waren nur kleine Sporen zu sehen, was daran liegen dürfte, dass die
Spaltgrösse des Deckglases die Sporengröße nach oben limitiert. Im
Grampräparat vorher hatten wir gesehen, dass sehr unterschiedliche Größen
vorkommen. Als Fazit ergibt sich, dass diese Methode nicht geeignet ist (falsch
niedrige Konzentration durch „Siebfehler“).
Eine Alternative zur Kammerzählung ist die Gram-Färbung eines definierten
Volumens (50 µl) mit mikrokopischem Auszählen der gefärbten Sporen. Vorher
wurden die Verdünnungen von 1/100 000 und 1/100 jeweils mit 80 °C über 10
min erhitzt. Anschließend wurden die Sporen auf das Gesamtvolumen
umgerechnet. Bei einer Vergrößerung von 40/20 konnten ca. 200 Sporen pro
Gesichtsfeld festgestellt werden. Bei der 6,3fachen Vergrößerung waren
reichlich Sporen sichtbar. Zusätzlich wurde auch ein Nativpräparat mit 10 µl
mikroskopiert. Hier waren reichlich Sporen sichtbar, die allerdings Cluster
bildeten. Diese Methode erwies sich demnach als machbar, aber bei großen
Sporenmengen sind hohe Verdünnungen erforderlich. Das ist ungenauer als
Filtrieren und erfordert mehr Aufwand.
Des Weiteren wurde versucht, mittels Filtration eine Sporenwiederfindung zu
erreichen. Die Filtration wäre die genaueste und sensitivste Methode, wenn sie
sich prinzipiell als geeignet erweist. Zunächst wurde dieses Verfahren nur mit
dem Vorwert (keine Verwendung eines Desinfektionsmittels und somit auch
kein Nachwert) angewendet (Vorversuch 1). Dazu wurden 1 ml
Sporensuspension zusammen mit 3ml Natriumchlorid auf die Hand aufgebracht
und anschließend verrieben. Danach wurden die Hände in 2 Bechergläser mit
jeweils 500 ml NaCl-Lösung gehalten und langsam und kontinuierlich bewegt.
Anschließend wurden Verdünnungen von (10 –2 bis 10 –8) ) hergestellt. Der
Inhalt der Röhrchen wurde filtriert und der Filter auf CSA-Platten aufgebracht.
Zusätzlich wurde aus diesen Verdünnungen ausplattiert.
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