Technische Universität München Wissenschaftszentrum ...

48 Material und Methoden
nach dem konduktometrischen Prinzip (Coulter-Prinzip) unter Verwendung des
Coulter Counter T 840 for veterinary use (Coulter Electronics GmbH, Krefeld, BRD).
Bei diesem Untersuchungsverfahren wird durch eine Kapillare Blut in den Coulter
Counter gesaugt, mit einer isotonischen Elektrolytlösung verdünnt und anschließend
durch einen Transducer (Messwandler) geschickt. Die Änderung der Stromstärke –
proportional zum Partikelvolumen – beim Durchtritt einer Zelle wird als Messsignal
genutzt. Je Probe wurden mindestens 3 Messungen am Coulter Counter
durchgeführt.
Die Differenzierung der Leukozytenfraktion erfolgte durch mikroskopisches
Auszählen eines aus Frischblut angefertigten Blutausstriches. Dazu wurde
heparinisiertes Vollblut auf einem Objektträger mit einem Deckglas dünn
ausgestrichen, luftgetrocknet, für 10 Sekunden in Methanol fixiert, erneut
luftgetrocknet und anschließend mit Azur-Eosin-Methylenblau Färbefolien
(Sangodiff ® G, Merck, Darmstadt, BRD) für mindestens 10 min angefärbt
Pappenheim-Färbung). Zur Archivierung wurde dann die Färbefolie entfernt und der
Objektträger durch Spülen in einer Pufferlösung (pH 7,2, Merck, Darmstadt, BRD)
konserviert. Das erzielte Färbeergebnis entspricht der klassischen Färbung nach
Pappenheim (May-Grünwald-Giemsa-Färbung), (BURCK, 1973).
Je Probe wurden 2 Ausstriche bei 400 -facher Vergrößerung unter einem binokularen
Mikroskop (SM Lux, Leitz,, Wetzlar, BRD) ausgezählt, wobei insgesamt pro Probe
mindestens 300 Leukozyten erfasst wurden. Aus dem relativen Anteil der einzelnen
Leukozytenfraktionen an der ausgezählten Leukozytenmenge konnte dann die
prozentuale Zusammensetzung des Differentialblutbildes abgeleitet werden. Das rote
Blutbild, die Leukozytenkonzentration sowie das Differentialblutbild wurden als
klinisch-chemische Parameter bei jeder Blutentnahme berücksichtigt.
3.6.4.3 Aktivität der Transaminasen und der alkalischen Phosphatase im
Plasma
Die Aktivitäten der Alanin-Amino-Transferase (ALT), der Aspartat-Amino-Transferase
(AST), der Gamma-Glutamyl-Transferase (?-GT) und der Alkalischen
Phosphatase (ALP) wurden aus dem Blutplasma bestimmt. Zur Gewinnung des
Plasmas musste das heparinisierte Vollblut zunächst zentrifugiert werden (1650 g, 5
min), so dass der Plasmaüberstand abgenommen werden konnte. Das Plasma