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Material und Methoden 52
Tabelle 3.4. Übersicht der verwendeten polyklonalen Primär- und Sekundärantikörper, des
Detektionssystems bzw. der Verstärkungsreaktion
Epitope
Antikörper/
Verdünnung
Primär-
Sekundär-
Antikörper/
Verdünnung
Detektionssystem
Verstärkungsreaktion
bzw.
c-kit
Kaninchen
Mensch
Verd.1:500
anti-
CD117
biot. Ziege anti-
Kaninchen IgG
Verd. 1:200
ABC-biot. Tyramin-ABC
IgE
Ziege anti-Hund
IgE, FITCkonjugiert
Verd. 1:5000
biot. Ziege anti-FITC
Immunglobulin
Verd. 1:200
ABC
biot. = biotinyliert; IgG = Immunglobulin G; IgE = Immunglobulin E; ABC = Avidin-Biotin-Peroxidase-
Komplex; biot. Tyramin = biotinyliertes Tyramin; Verd. = Verdünnung
3.5.2 Verstärkungsreaktion
Bei den ersten immunhistochemischen Versuchen war bei der c-kit Farbreaktion eine
deutliche unspezifische Hintergrundfärbung sichtbar. Neben den üblichen Maßnahmen
(siehe Kap. 3.5.5) zur Reduzierung der Hintergrundfärbung wurde daher eine
Verstärkungreaktion mit biotinyliertem Tyramin durchgeführt (VON WASIELEWSKI et
al., 1997; TODA et al., 1999). Der Vorteil einer Verstärkungsmethode liegt darin,
dass der Erstantikörper in einer viel höheren Verdünnungsstufe eingesetzt werden
kann, was wiederum zur Folge hat, dass unspezifische Bindungsreaktionen des Antikörpers
auf ein Minimum reduziert werden. Bei der tyraminverstärkten Immunhistochemie
wird an einen bereits gebundenen, Peroxidase-markierten ABC-Komplex in
einem weiteren Schritt zusätzlich biotinyliertes Tyramin gebunden. Durch die anschließende
Reaktion von Tyramin mit Wasserstoffperoxid (H 2 O 2 ) entstehen neue
Bindungsstellen, an die sich im darauf folgenden Schritt mit dem gleichen Peroxidase-markierten
ABC-Komplex weitere Komplexanlagerungen anheften. Die Folge der