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Material und Methoden 51
3.5 Immunhistochemie
Um die Beteiligung von Mastzellen und IgE-positiven Zellen zu untersuchen, wurden
die Bioptate der 14 Kontrollhunde und der 11 an eosinophiler Gastroenteritis/Enteritis/Enterokolitis
oder Kolitis erkrankten Tiere immunhistochemisch untersucht.
Mastzellen tragen an ihrer Zelloberfläche einen sog. c-kit-Rezeptor, der sich
immunhistologisch darstellen lässt (siehe Kapitel 2.5). Sowohl IgE als auch c-kit wurden
mittels polyklonaler Antikörper und der Streptavidin-Biotin-Peroxidase-Komplex-
Methode immunhistochemisch sichtbar gemacht.
3.5.1 Antikörper und Seren
Um Mastzellen darzustellen, wurde ein polyklonaler Antikörper aus dem Kaninchen
gegen den humanen c-kit-Rezeptor CD117 (Fa. DakoCytomation GmbH, Hamburg)
eingesetzt. IgE wurde mittels eines FITC-gekoppelten, polyklonalen Antikörpers aus
der Ziege markiert (Fa. Bethyl, Montgomery, Texas, USA). Für die immunhistochemische
Färbung von IgE wurde anschließend ein gegen FITC gerichteter polyklonaler
Zweitantikörper aus der Ziege eingesetzt (Fa. Vector Laboratories Inc., Burlingame,
Kalifornien, USA). Bei der Detektion von c-kit kam ein polyklonaler Sekundärantikörper
aus der Ziege gegen Kaninchen IgG (H+L) der Fa. Vector Laboratories Inc. (Burlingame,
Kalifornien, USA) zum Einsatz. Die beiden Primärantikörper wurden in
Phosphat-gepufferter Kochsalzlösung (PBS), der zuvor 1%iges Serumalbumin (Fa.
Sigma-Aldrich Chemie GmbH, Taufkirchen) zugegeben wurde, frisch angesetzt. Die
beiden Sekundärantikörper wurden in 1000 µl gepuffertem PBS verdünnt. Alle verwendeten
Antikörper wurden unverdünnt im Dunkeln bei 4°C kühl gelagert.
Eine Übersicht der verwendeten Antikörper ist in Tabelle 3.4 dargestellt.