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Diskussion 100 Zweig des Immunsystems ist zunehmend überfordert und ein sich selbst unterhaltender Prozess mit konsekutiver Zerstörung der Darmmukosa entsteht (MAGNE, 1992; GUILFORD, 1996; ALLENSPACH und GASCHEN, 2003; KUNISAWA und KIYONO, 2010). 5.6 Doppelmarkierung von Mastzellen mittels Antikörper gegen den c-kit Rezeptor sowie Immunglobulin E Wie bereits im obigen Text erläutert, wirft die identische Topografie von sowohl c-kit positiven Mastzellen als auch von Immunglobulin E positiven Zellen innerhalb der Lamina propria des Magen-Darmtraktes die Frage auf, ob Immunglobulin E an Mastzellen gebunden vorliegt. Ein Ziel dieser <strong>Diss</strong>ertation bestand darin, mittels einer Doppelmakierung den c-kit Rezeptor (CD117) und IgE sichtbar zu machen. Da trotz deutlich positiver Reaktionen der Einfachfärbungen von IgE und CD117 sowohl eine immunhistochemische als auch eine Doppelmarkierung dieser Antigene mittels Immunfluoreszenz fehlschlugen, stellt sich die Frage, ob die Epitope von Immunglobulin E und CD117 in so unmittelbarer Nachbarschaft zueinander liegen, dass eine sterische Behinderung der verwendeten Antikörper ensteht. Wie in Abbildung 5.1 verdeutlicht, führt die gleichzeitige Verwendung der Antikörper gegen IgE bzw. CD117 und deren Sekundärantikörper und/oder Detektionssysteme zu einer sog. Baumstruktur, welche das jeweils andere Epitop abschirmt und eine räumliche Behinderung bei der Bindung des anderen Antikörpers und/oder Detektionssystems entstehen lässt. Zur weiteren Klärung, ob IgE an Mastzellen gebunden vorliegt, wäre eine Auswertung mittels konfokaler Mikroskopie oder Elektronenmikroskopie denkbar. Vor allem letztere Methodik wäre mittels einer Immunogold-Reaktion am Sekundärantikörper von IgE für weitere Arbeiten in Betracht zu ziehen.
Diskussion 101 Abbildung 5.1: Mögliche sterische Behinderung der Antigen-Antikörper-Komplexe bei der Doppelfärbung von IgE und CD117 Epitopen Einfachfärbung IgE Einfachfärbung CD117 AP-ABC Komplex Anti-IgE AK (HRP-gekoppelt) biotinylierter 2. AK Gebundenes IgE 1. AK: Anti-CD117 FcεRI c-kit Rezeptor (CD117) FcεRI c-kit Rezeptor (CD117) Doppelfärbung IgE/c-kit AP-ABC Komplex Anti-IgE AK (HRP-gekoppelt) biotinylierter 2. AK 1. AK: Anti-CD117 FcεRI c-kit-Rezeptor (CD117) AK= Antikörper; IgE= Immunglobulin E; AP-ABC= alkalische Phosphatase-Avidin-Biotin- Peroxidase-Komplex; HRP= Meerrettichperoxidase (horseradish peroxidase)
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Bibliografische Informationen der D
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Wissenschaftliche Betreuung: Univ.-
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