Gentechnologie: Klonierung und Transformation von DNA

unterschieden werden. Das insertionsfreie Plasmid lässt sich von den Plasmiden, welche eine Insertion
tragen, mittels des Blau-Weiß-Tests unterscheiden (s. S. 2/3 des Skriptes). Bei den Plasmiden, die eine
Insertion besitzen, lässt sich die Größe und die Orientierung des klonierten Fragmentes durch
Restriktionsanalyse bestimmen (s. S. 3 des Skriptes). Zur Bestimmung der Größe des inserierten DNA-
Fragments wird das Plasmid mit PstI geschnitten. Die Orientierung lässt sich durch Behandlung mit der
Restriktionsendonuklease EcoRI feststellen. EcoRI schneidet das PstI-Fragment 945 bp vom Rand
entfernt. Da EcoRI außerdem genau einmal im Polylinker schneidet, erhält man je nach Orientierung
Fragmente mit einer Länge von 985 bp und 3880 bp (Orientierung A in Abb. 2) bzw. 1235 bp sowie
3631 bp (Orientierung B).
Abb. 2: Klonierung des 2140 bp PstI-Fragmentes
des Bakteriophagen λ in das Plasmid pUC18.
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