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3. Ergebnisse 91
und zahlreiche Filopodien, als Hinweise für eine ameboide Morphologie (Abb. 29G, vom
Einsatz) bei gleichzeitig intakter Astrozytenschicht (Abb. 29H).
Schließlich führte die Zugabe von Okadaischer Säure (okadaic acid, 6 pM- 6 µM), einem
Inhibitor der Serin/Threonin Phosphatasen PP1 und PP2a, ebenfalls zu einer Transformation
der Mikroglia (Abb. 28B und 29I-L). Morphologische Effekte wurden zuerst bei 6 nM (Abb.
29J) beobachtet und waren bei einer Konzentration von 60 nM maximal (Abb. 29K). Bei
dieser Konzentration wurden die mikroglialen Zellen groß, mit wenigen kurzen proximalen
Zellausläufern, bei einer weiterhin intakten Astrozytenschicht (Abb. 29L). Höhere
Konzentrationen (600 nM) führten zu eine Zerstörung des Astrozytenrasens und dem
Auftreten von einzelnen an der Plastikoberfläche anhaftenden Makrophagen.
3.3.2.2 Effekte von extrazellulären Stimuli auf ramifizierte Mikroglia in Zellkultur
Die aktivierten mikroglialen Zellen vermögen auch extrazelluläre Faktoren zu produzieren,
die den ramifizierenden Effekt der Astrozyten behindern können. Deshalb wurden auch die
Effekte von Proteasen, Disintegrinen und RGD Inhibitoren auf ihre Fähigkeit geprüft, die
Interaktion von Mikroglia mit der extrazellulären Matrix zu blockieren (Abb. 28D und 30).
Keine Effekte wurden nach Zugabe von Thrombin (0.01-10 U/ml), Keratan-Sulfat-
Proteoglycan (12.5 pg-12.5 µg/ml) und den Disintegrinen Kistrin (1.6 pM. bis 1.6 µg/ml),
Echistatin (2.0 pM. bis 2.0 µg/ml) und Flavoridin (1.6 pM. bis 1.6 µg/ml) beobachtet.
Die Zugabe von inhibitorischen Peptiden, die die RGD Aminosäuresequenz enthalten, zeigte
in der αMβ2/DAB-Immunozytochemie in Kombination mit dem Phasenkontrast (Abb. 30F,I)
nur nach Verwendung der höchsten Konzentration einen Effekt auf die mikrogliale
Morphologie, die jedoch gleichzeitig zu einer Zerstörung des Astrozytenrasens führte. Dieser
destruktive Effekt auf den Astrozytenrasen trat für GRGDSP bei 0.4 mM, für GRGDTP bei
0.04-0.4 mM und im Falle des zyklischen CRGDSPASSC Peptids Cyclo-1 und des
zyklischen RGDdFV Peptids Fr-1 bei 0.2 mM auf (dF steht für D-Phenylalanin). Das
GRADSP Peptid, mit einem Austausch von G mit A, diente als unaktivierte Kontrolle und