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2. Methoden und Materialen 41
kultivieren, ohne den hierbei nicht stimulierten Kontrollkulturen unphysiologische Substanzen
(DMSO) oder bekannte Makrophagen-Mitogene (MCSF, GMCSF) beifügen zu müssen.
Diese Methode wurde erstmals von Sievers beschrieben (Sievers et al., 1994; Schmidtmayer
et al., 1994; Tanaka und Maeda, 1996). In den so angelegten Zellkulturen wurden die
molekularen Mechanismen untersucht, die an der Regulation der Deramifizierung aktivierter
Mikrogliazellen beteiligt sind.
In der folgenden Arbeit wurden Maus-Mikroglia auf Ratten-Astrozyten kultiviert. Im Falle der
Verwendung der ursprünglichen Mikroglia aus der Ratte (3%) in Kokultur mit Astrozyten aus
der Ratte, werden diese von den proliferierenden Astrozyten überwuchert und auf den Boden
der Kulturflasche gedrückt, wodurch Ihre Gestalt dem eines Spiegeleis ähnelt (Kloss et
al.,1997, 2001). Bei der Verwendung von Mikroglia aus der Maus auf einem konfluenten
Astrozytenrasen hingegen kommt es zum Verbleiben der Mikroglia auf der Oberfläche des
Rasens. Die Zellen können sich ramifizieren und mit Antikörper (z.B. 5C6) gegen spezielle
Mausantigene (aMβ2 Integrin) selektiv markiert werden. Hierdurch lassen sich
Differenzierung und Deramifikation einer einzelnen Zellgruppe, die zu einem bestimmten
Zeitpunkt ausgesät wurden, sehr gut erfassen.
2.2.1 Anlage der Zellkultur
2.2.1.1 Primäre Astrozytenkultur aus der Ratte
Für die Kultivierung der Astrozyten wurde die Methode von McCarthy und de Vellis
(McCarthy und de Vellis, 1980) mit leichten Veränderungen verwendet. Neugeborene
Wistar-Ratten wurden geköpft und das Gehirn entnommen. Die Meningen wurden mit einem
Wattetupfer entfernt. Die Kortizes wurden abpräpariert und in Kulturmedium (DMEM, 15-%
FCS, 100 IU/ml Penizillin, 100 µg/ml Streptomyzin) aufgenommen. Die Präparation der Tiere
und Handhabung der Zellen erfolgte unter sterilen Bedingungen. Hierbei wurden nur
sterilisierte oder autoklavierte Instrumente eingesetzt und alle Medien wurden steril filtriert.
Als Kulturmedium wurde DMEM mit 15-% FCS verwendet, dem 100 IU/ml Penizillin und 100