Thesis - Tumb1.biblio.tu-muenchen.de

2. Methoden und Materialen 40
entfettet und nach Bedarf auch mehrmals beim entsprechenden Alkoholschritt in 95%
Alkohol/0.1% Eisessig differenziert. Die fertig gefärbten Schnitte wurden in Eukitt eingebettet.
Die Zahl der neuronalen Profile (n) wurde in jedem angefertigten Schnitt mit einer
angenommenen Schnittdicke von 25µm (D) bestimmt und mit der Korrektur nach
Abercrombie (Abercrombie, 1946) die Gesamtzahl der Neurone (N) entsprechend des
mittleren Zelldurchmessers (d) nach folgender Formel korrigiert:
N = n x D / (D + d)
Der mittlere neuronale Zelldurchmesser wurde zuvor aus jeweils drei Schnittpräparaten des
Ncl. facialis mit einem Abstand von jeweils 100µm und einer Gesamtzahl von 140 bis 220
Neurone auf der operierten Seite und 280 bis 340 Neurone auf der nicht-operierten Seite
bestimmt. Hierzu wurden die mit einer Sony 3 CCD Videokamera (AVT-Horn, Aachen,
Germany) im 24-bit-RGB-Format digitalisierten Bilder in das Bildverarbeitungsprogramm
OPTIMAS 6.2 importiert und die neuronalen Zellprofile unter Verwendung von Mean - 1.5 x
SD-Schwellenwertes detektiert. Der mittlere Zelldurchmesser wurde dann unter
Einbeziehung der mittleren Fläche (Area) mit folgender Formel berechnet:
d = √(4 x Area / π )
2.2 Mikroglia in Zellkultur
Eine Verminderung der mikroglialen Ramifizierung ist eine Erscheinung, die in vielen
krankhaften Prozessen des Gehirns in Erscheinung tritt und zu einer Transformation in kleine
abgerundete Phagozyten in Anwesenheit von neuronalem Debris führt. Die Methode der
Wahl besteht hier in der Kultur von stark ramifizierten Mikrogliazellen auf einem konfluenten
Astrozytenrasen. Hierdurch lässt sich eine hohe Anzahl von ramifizierten Mikrogliazellen