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2. Methoden und Materialen 32
E-α-Z--Ig,
FITC konj.
E-α-Z--Ig,
FITC konj.
Z-α-R-Ig,
biotinyliert
Z-α-R-Ig,
biotinyliert
Z-α-R-Ig,
FITC konj.
Z-α-R-Ig,
FITC konj.
P-α-M-Ig,
POD-konj.
E-α-K-Ig,
biotinyliert
P-α-M-Ig,
POD-konj.
E-α-K-Ig,
biotinyliert
R-α-Marker 1 R-α-Marker 1
Intrinsisches
Maus-IgG
R-α-Marker 2
R-α-Marker 1
R-α-Marker 1 R-α-Marker 1
Intrinsisches
Maus-IgG
R-α-Marker 2
R-α-Marker 1
Abbildung 6. Schema immunhistochemischer Nachweismethoden. Gezeigt ist der Nachweis von Zellmarkern mit einem monoklonalen Antikörper aus
der Ratte. A. Diaminobenzidin (DAB)-Methode. Der Zellmarker wird von dem primären Antikörper aus der Ratte (R-a-Marker 1) erkannt, mit einem
biotinylierten Ziegenantikörper gegen Ratten-Ig (Z-a-R-Ig) markiert und schließlich über den Niederschlag der ABC/DAB-Reaktion sichtbar gemacht. B.
Fluoreszenzdoppelfärbung mit intrinsischem 1gG. Der Marker 1 wird mit einer Kette von Antikörpern aus Ratte gegen Marker 1(R-a-Marker 1),
Ziege gegen Ratten-Ig (Z-a-R-Ig) und Esel gegen Ziegen-Ig (E-a-Z-Ig) markiert und durch konjugiertes FITC sichtbar gemacht. Das im Gehirn der Maus
konstitutiv an Mikroglia gebundene IgG wird mit einem Pferdeantikörper gegen Maus-IgG (P-a-M-Ig) markiert, die daran konjugierte Peroxidase
verankert dann biotinyliertes Tyramin kovalent im Gewebe, das über den Cy3-Avidin-Komplex detektiert wird. C. Fluoreszenzdoppelfärbung mit zwei
Zellmarkern. Der Marker 1 wird wie bei B mit FITC markiert. Die Doppelmarkierung erfolgt mit einem Kaninchen-Antikörper gegen den Zellmarker 2
(K-a-Marker 2), der mit einem biotinylierten Esel gegen Kaninchen-IgG (E-a-K-Ig) und dem Cy3-Avidin-Komplex detektiertwird. Abkürzungen: B Biotin,
DAB Diaminobenzidin, E Esel, FITC Fluoreszin-5-Isothiozyanate, K Kaninchen, konj. konjugiert, lg Immunglobulin, M Maus, P Pferd, POD Peroxidase,
R Ratte, Tyr Tyramin, Z Ziege.