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2. Methoden und Materialen 25
2.1.2 Versuchstiere
Zur Untersuchung der mikroglialen Aktivierung im verletzten Nervensystem wurden drei bis
sechs Monate alte osteopetrotische Mäuse von der Firma Jackson Laboratory (Bar Harbor,
USA) verwendet. Die Osteopetrose (op) ist eine spontan auftretende autosomal rezessive
Mutation des MCSF-Gens auf Chromosom 3, die zu einer Abwesenheit von biologisch
aktiven MCSF in den homozygoten Mäusen (op/op) führt. Dies ist bedingt durch eine
einzelne Baseninsertion (Thymidin) in einem frühen Abschnitt des Gens, was zur Ausbildung
eines frühzeitigen Stopcodons führt (Yoshida et al., 1990). Ein wesentliches
morphologisches Merkmal der homozygoten Mäuse (op/op) ist der fehlende Durchbruch der
Schneidezähne (Marks and Lane, 1976). Die heterozygoten Mäuse (+/op) sind phänotypisch
normal und wurden als Zuchtkolonie mit einem gemischten B6C3-Hintergrund gehalten.
Homozygote, Interleukin-6-defiziente Mäuse (IL6-/-) mit einem C57Bl/6-Hintergrund (Kopf et
al., 1994) wurden von der Firma BRL (Basel, Schweiz) bezogen und mit C57Bl/6-Wildtyp-
Tieren (Charles River, Hannover) gekreuzt, um eine Kolonie von heterozygoten IL6+/-
Mäusen herzustellen.
Die in dieser Studie verwendeten homozygoten IL6-/- Mäuse sowie die IL6+/+ Wildtyp-
Kontrollen wurden der F1-Generation von den zuvor gezüchteten heterozygoten IL6+/-
Mäusen entnommen. Zur Genotypisierung der Interleukin-6-defizienten Mäuse (IL6-/-) und
der entsprechenden F1-Wildtyp-Kontrollen wurde eine Polymerase-Kettenreaktion
durchgeführt (Galiano et al., 2001). Zur Etablierung reiner Kulturen von Astrozyten aus der
Ratte und Mikroglia aus der Maus wurden Wistar-Ratten sowie FVB-Mäuse aus dem
Tierhaus des MPI für Neurobiologie verwendet.
2.1.3 Lichtmikroskopische Histologie
2.1.3.1 Gewebeentnahme für lichtmikroskopische Immunhistochemie
Für die lichtmikroskopische Immunhistochemie wurden die Versuchstiere nach
Überlebenszeiten von 1, 4, 7, 14 und 60 Tagen nach Fazialisaxotomie in Diethylether