Bericht als PDF herunterladen - Kantonales Laboratorium

2.7 METHODENENTWICKLUNG
2.7.1 Nachweis von Nussallergenen mittels real-time PCR
In der Schweiz müssen Lebensmittelallergenem die als Kreuzkontamination in einem
Lebensmittel vorkommen können, in Mengen von mehr als 1 Gramm pro kg deklariert werden.
Im Anhang der Lebensmittelkennzeichnungsverordnung (LKV) sind diverse Nussallergene
aufgelistet, deren Nachweis mittels real-time PCR teils bereits publiziert wurden, teils am
Kantonalen Labor Basel-Stadt entwickelt wurden. Im Rahmen eines Praktikums eines ETH-
Studenten wurden folgende darauf basierende multiplex real-time PCR Nachweissysteme
entwickelt und validiert:
Triplexsystem 1: Mandel, Haselnuss und Baumnuss
Triplexsystem 2: Erdnuss, Cashew und Pistache
Triplexsystem 3: Macadamia, Pecan, Paranuss
Triplexsystem 4: Sesam, Pflanze, FNC (false negative control)
Die Nachweisverfahren wurden an bereits getesteten Proficiency Testproben und an selbst
hergestellten Biskuitproben ausgetestet. Die Resultate ergaben, dass Konzentrationen von 0.1
g/kg, das heisst Mengen, die um mindestens einen Faktor 10 unter der Deklarationslimite
liegen, noch nachweisbar sind.
Diese neu entwickelten Nachweisverfahren erlauben uns Lebensmittelproben relativ einfach
semi-quantitativ auf alle lebensmittelrechtlich geregelten Nussarten zu testen.
2.7.2 Identifizierung von Farbstoffen mit MALDI/TOF-MS
Die Identifikation von Farbpigmenten in Produkten wie z. B. Tinten, Tattoos, Schmink – und
Fingerfarben stellt hohe Anforderungen an die Analytik. Pigmente sind definitionsgemäss
schwer löslich und damit den meisten geläufigen Analysenmethoden (chromatographische
Verfahren, wie HPLC, GC, DC) nur beschränkt zugänglich. Mit der Verwendung von
MALDI/TOF-MS* haben wir eine Methode entwickelt, welche auf einfache und schnelle Weise
die Identifizierung vieler unlöslicher Farbstoffe aufgrund der spezifischen Massenspektren
erlaubt. Die Probe (ca. 3 mg) wird mit Ethanol (50 µl) gemischt und sowohl das Sediment (0,5
µl) als auch der Überstand (0,5 -1 µl) auf eine Trägerplatte gebracht und getrocknet. Im
Hochvakuum wird die Probe durch einen Laserstrahl verdampft und die entstehenden
Molekülionen detektiert. Je nach Farbpigment kann durch die Zugabe von
Dihydroxybenzoesäure (DHB-Matrix) die Analyse verbessert werden. Wir haben bisher 130
Farbpigmente getestet und festgestellt, dass 80 % davon ohne Zugabe von Matrix
charakteristische Massenspektren zeigten. Mit Matrixaddition wurde die Erfolgsquote zusätzlich
um 10 % erhöht. Nur anorganische Farbstoffe konnten mit dieser Methode nicht erfasst werden
(10 %), da keine Ionisation stattfindet. Ein orientierender Test mit 20 Tattoo -Tinten verlief
ebenfalls erfolgversprechend, da alle deklarierten Farbpigmente und Pigmentmischungen
nachgewiesen werden konnten.
* Matrix-Assisted-Laser-Desorption-Ionisation/Time-Of-Flight-Massen-Spektrometer
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Jahresbericht 2008 KL BS