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Infektiologie – Update 2013 Respiratorische Infektionen: Anforderungen an die molekulare Diagnostik PD Dr. med. Marcus Panning Oberarzt, Institut für Medizinische Mikrobiologie und Hygiene der Universität Freiburg, Abteilung für Virologie Akute respiratorische Infektionen sind ein bedeutender Grund für Morbidität und Mortalität in der Bevölkerung. Sie können durch eine Vielzahl von Erregern hervorgerufen werden, die sich anhand klinischer Parameter alleine nicht unterscheiden lassen. Eine korrekte und zuverlässige Diagnose ist allerdings unabdingbar für eine optimale Patientenversorgung. Die gegenwärtige Diagnostik ist hingegen relativ zeitaufwendig und wenig sensitiv, so dass neue Nachweisverfahren dringend erwünscht sind. Mit Hilfe von PCRbasierten molekularen Methoden stehen inzwischen sensitive und schnelle Verfahren zur Verfügung. Bei mindestens 21 in Frage kommenden Erregern zeigte sich aber, dass eine sequentielle PCR-Einzeltestung nicht sinnvoll durchzuführen ist. Ein Ausweg stellen so genannte Multiplex-PCR-Verfahren dar, bei denen parallel bis zu 25 Erreger nachgewiesen werden können. Im Vortrag sollen derzeit verfügbare Multiplex- PCR-Methoden zum Nachweis respiratorischer Erreger vorgestellt und auf deren Besonderheiten eingegangen werden. Weiterhin wird über das Erregerspektrum am Freiburger Universitätsklinikum während der letzten Influenza-Saison berichtet, dass mit Hilfe moderner Multiplex-PCR-Verfahren erfasst wurde. load). Die Schädigung der Organe über die Virusvermehrung betrifft die Leber (ALT Erhöhung) und das lymphatische System (CD4-T-Lymphozyten Abfall). Sie gibt Einblick über die Dauer der Infektion und die Effizienz der Immunabwehr. Bei weiterhin fraglicher Diagnostik führt eine Abwägung der Risikoanamnese zum Erwerb einer der 3 Viren, eine Wiederholung der Tests nach etwa 4 Wochen, im Zweifelsfall die Untersuchung von Partners/Partnerin oder von Familienmitgliedern zu einer fundierten diagnostischen Aussage. Bei fraglich überwundener Infektion – bei HIV nur solange die anti-retrovirale Therapie strikt eingehalten wird – verbleiben die core/capsid-Antikörper am längsten und erfordern wiederholte Versuche das Virus nachzuweisen. Die HBV-Infektion verläuft immer permanent über die ccc-DNA, die in Leberzellen verbleibt. Die HIV-Infektion ist ebenso immer permanent durch die Persistenz von proviraler DNA in Immunzellen oder auch Astrozyten. Bei entsprechender Konstellation wird die HCV-Infektion ausheilen, ohne Hinterlassen einer spezifischen Immunität. Abhängig vom Verhalten des Patienten sind auch Superinfektionen und Doppelinfektionen möglich. Der vereinfachte Algorithmus sieht folgendermaßen aus: Algorithmus zur sicheren Diagnose einer HBV, HCV und HIV-Infektion Prof. Dr. med. Lutz Gürtler Max von Pettenkofer Institut, LMU München Für die erste Untersuchung nach möglicher Übertragung wird ein Antikörper-Test verwendet, der nach ca. 6 Wochen bei einer HIV-Infektion, nach ca. 8 Wochen nach einer HCV-Infektion und nach ca. 9-12 Wochen nach einer HBV-Infektion reaktiv/positiv wird. Durch Zusatz-Tests, wie z.B. den Immunoblot wird das reaktive Ergebnis abgeklärt, bei HBV durch anti- HBe und anti-HBs. Das weitere Vorgehen bei einer fundierten Diagnostik sollte auch zur Entscheidung führen ob eine Therapie indiziert ist. Deswegen umfasst die weitere Diagnostik den Nachweis des Virus, normalerweise über seine Nukleinsäure, DNA bei HBV oder HBsAg und RNA bei HCV und HIV und die Quantifizierung der Virusmenge (viral Hantaviren – was haben wir aus den letzten drei Ausbrüchen in Deutschland gelernt? PD Dr. Jörg Hofmann Nationales Konsiliarlabor für Hantaviren, Institut für Medizinische Virologie, Charité Universitätsmedizin Labor Berlin, Charité-Vivantes GmbH Akutes Nieren- oder Lungenversagen sind weit verbreitete klinische Diagnosen, oft ist ihre Genese unklar. Seit einigen Jahren treten bei diesen Diagnosen einheimische Hantaviren zunehmend in den Fokus des Interesses. Heute gehören in Deutschland Hantavirus- Infektionen zu den 5 häufigsten meldepflichtigen Virusinfektionen. Alle zwei bis drei Jahre registrieren wir eine deutliche Zunahme der Fallzahlen. Diese sind assoziiert mit einer deutlich höheren Dichte der Wirtstiere (Myodes und Apodemus Spezies) und diese wiederum mit einer starken Fruktuation in den vorangegangenen Herbstmonaten. MIKROGEN FORUM 32/ 13
Infektiologie – Update 2013 Wissenschaftlichen Untersuchungen zufolge wissen wir heute, dass zwei unterschiedliche Hantavirustypen in Deutschland für die Infektionen und Erkrankungen verantwortlich sind. Dies sind Puumalaviren im Süden und Südwesten Deutschlands und Dobrava-Belgrad Viren vorzugsweise im Norden und Nordosten Deutschlands (siehe Abb.). Infektionen durch diese Hantaviren verursachen das Hämorrhagische Fieber mit Renalem Syndrom (HFRS) mit milden bis schweren klinischen Verläufen. Die Pathogenese ist durch die vaskuläre Schädigung, intravasale Koagulation, Gerinnungsstörung und das Auftreten interstitieller Ödeme in inneren Organen gekennzeichnet. Nach einer 2-3 wöchigen Inkubationszeit verläuft die Erkrankung gewöhnlich in mehreren Phasen, heilt in der Regel komplikationsfrei aus, fatale Verläufe sind in Deutschland sehr selten (< 1%). Die Bestimmung der Gensequenzen von Hantaviren aus infizierten Mäusen und Patienten ermöglicht heute eine recht genaue Bestimmung des Infektionsortes. kleinen DNA Viren besitzen ein zirkuläres doppelsträngiges Genom, das für nur 9 Proteine codiert. Die beiden Onkoproteine E6 und E7 können eine Immortalisierung der infizierten Zellen vermitteln. Die Hüllproteine L1 und L2 sind Zielstrukturen der prophylaktischen Antikörper, die durch Impfung induziert werden. HPV sind höchst ansteckend, infizieren alle äußeren Epithelien, persistieren für lange Zeit und bei 75% der Population lassen sich frühere oder akute Infektionen nachweisen. Weltweit ist die Durchseuchung sehr hoch. Vor allem im jungen Lebensalter werden HPV-Infektionen akquiriert, heilen aber in der Regel aus. Bis zu 50% der 25 jährigen Frauen sind anogenital akut HPV infiziert (Abbildung 1), sowie 50-60% der Männer in jeder Altersgruppe. Bei Persistenz der Infektion besteht das Risiko einer malignen Entartung der Zellen, wie z.B. Gebärmutterhalskrebs, aber auch Karzinome anderer Epithelien. Therapieoptionen beinhalten lediglich die Behandlung der Symptome, eine spezifische antivirale Therapie ist nicht im Einsatz. Aufgrund der relativ langen Inkubationszeit ist die Virämie zum Zeitpunkt des Einsetzens der klinischen Symptome meist schon vorbei. Zur Prophylaxe wird intensiv an DNA-Vakzinen gegen die hochpathogenen Vertreter (Sin nombre Virus, Hantaanvirus, Andesvirus u.a.) gearbeitet. Humane Papillomviren (HPV): Diagnostik einer unbekannten Pandemie PD Dr. rer. nat. Andreas M. Kaufmann Charité - Universitätsmedizin Berlin, Campus Benjamin Franklin Humane Papillomviren (HPV) gehören zu den erfolgreichsten molekularen Parasiten. Diese unbehüllten Abbildung 1: HPV Prävalenz bei 20.000 Frauen in Dänemark. Im Alter von 20 bis 25 Jahren sind 50% der Frauen high-risk (HR) HPV positiv (obere rote Linie). Die Prävalenz sinkt bis zu einem Alter von ca. 35 Jahren und bleibt dann bei 5-10%. Wenn dies persistente Infektionen sind, haben diese Frauen tatsächlich ein Risiko ein Zervixkarzinom zu entwickeln. Die low-risk (LR) HPV Typen infizieren früher (untere blaue Linie). (Krüger-Kjaer S. et al., 2007) Seit den 1970er Jahren wird mittels zytologischen Abstrichs das Screening in Deutschland durchgeführt, was zu einer Senkung der Inzidenz des Zervixkarzinoms um 80% geführt hat. Seit 2007 ist die HPV Impfung als Primärprophylaxe verfügbar und zeigt bereits Effekte bei Infektionen und Krebsvorstufen. In Zervixkarzinomen ist zu über 99% HPV DNA nachweisbar. Daher kann der HPV-DNA Nachweis zum Screening auf Zervixkarzinom und seine Vorstufen eingesetzt werden. Dabei zeichnet sich der HPV Test durch eine sehr hohe Sensitivität aus, tatsächliche Krebsvorstufen und Karzinome zu detektieren. Der negative Vorhersagewert ist ebenfalls hervorragend, da HPV Negative auch keine Erkrankung entwickeln. Allerdings ist die Spezifität niedriger als bei der Zytologie, da der HPV DNA-Test auch harmlose Infektionen ohne zugrundeliegende Dysplasie nachweist. Eine Kombination der Vorteile beider Screeningmethoden sollte die besten Ergebnisse ergeben und wird in Ländern wie den Niederlanden, England und Mexiko eingeführt. Eine höhere Spezifität könnte MIKROGEN FORUM 32/ 13
Seite 1: Mikrogen forum Jahrgang 11 - Nr. 32

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