Euroimmun Medizinische Labordiagnostika AG - Universität zu Lübeck

4. Diskussion 80
Die Antikörper in 2 Seren, die nur mit der BP230-Voll-Länge nachgewiesen werden konnten,
banden sich vermutlich an Epitope der Rod-Domäne. Für BP180 konnte gezeigt werden
(Büdinger et al., 1998), dass BP-Patienten bevorzugt einen bestimmten HLA-Typ besitzen.
Auch bei Gesunden dieses Typs konnte nach Stimulation mit dem Antigen eine T-Zell-
Antwort ausgelöst werden. In der Annahme, dass alle die Patienten, deren Antikörper mit dem
C-terminalen Bereich von BP230 reagierten einen identischen HLA-Typ haben, wäre es
denkbar, dass die, die Antikörper gegen den N-terminalen Bereich oder die Rod-Domäne
aufwiesen, von einem anderen Typ sind.
In 9 Seren konnten Antikörper gegen BP230gC, aber nicht gegen die BP230-Voll-Länge
nachgewiesen werden. Dieses Ergebnis war fraglich, denn die BP230-Voll-Länge schließt
BP230gC mit ein. Es konnte ausgeschlossen werden, dass eine der beiden globulären
Domänen im BP230-Voll-Längen-Protein durch alternatives Spleißen oder interne
Translationsinitiation entfernt wurde, da ein Teil der 27 positiven Seren Antikörper gegen
BP230-Voll-Länge und BP230gN besaß, ein anderer Teil Antikörper gegen die -Voll-Länge
und –gC. Es konnte sichergestellt werden, dass die Sequenz im richtigen Leserahmen vorlag,
weil das Protein mit dem anti-His-Antikörper im IFT nachgewiesen werden konnte und sich
der His-Tag am C-Terminus der Sequenz befindet.
Ein proteolytischer Abbau von Teilbereichen des Proteins wurde im Folgenden analysiert
(siehe 4.4).
4.4 Expressionsanalyse des BP230-Voll-Längen Polypeptids
Von den transfizierten Zellen wurden Lysate hergestellt und im Westernblot auf ihre
Reaktivität mit repräsentativen Seren aus dem BP-Kollektiv analysiert. Mit keinem der
Polypeptide wurden anti-BP230-Antikörper im Westernblot nachgewiesen (ohne Abbildung).
Außerdem konnten die Polypeptide nicht durch eine Inkubation mit dem monoklonalen anti-
His-Antikörper detektiert werden.
Das Ergebnis deutet darauf hin, dass die gebildete Proteinsynthesemenge an Zielprotein für
einen anti-BP230-Antikörpernachweis im Westernblot zu gering war und der Hintergrund der
untransfizierten Zellen zu hoch war. Der Nachweis konnte selbst mit Seren mit einem höheren
Antikörpertiter nicht erfolgen. Im Gegensatz dazu war es im IFT möglich, die