Euroimmun Medizinische Labordiagnostika AG - Universität zu Lübeck
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3. Ergebnisse 69 In 23 Seren von BP-Patienten konnten mit den drei Testsystemen anti-BP230-C3-spezifische Antikörper nachgewiesen werden. In 6 Seren erfolgte dieser nur durch Westernblot und ELISA und in 2 ausschließlich durch den ELISA. Bei 2 Seren konnten im Westernblot und im IFT, bei 2 im IFT und bei einem weiteren im Westernblot anti-BP230-Antikörper nachgewiesen werden. Die Extinktionen (450nm) im ELISA lagen mit 0,5 und 0,4 Einheiten (grüner Kreis, Abbildung 38) deutlich über dem Cut-off. positiv hinsichtlich BP230- (1) -C3 (ELISA) (2) -C3 (ELISA), -R2 (WB) (3) -C3 (WB) (4) -C3 (WB), -N2, -R2, -C1 (WB), -Voll-Länge, -gN (IFT) (5) -C3 (WB), N2 (WB), -Voll-Länge, -gN (IFT) Abbildung 38: Nachweis von Antikörpern enthalten in 49 BP-Seren und 94 Seren von Blutspendern gegen BP230-C3 im Westernblot und im ELISA (Cut-offs in rot, Seren aus dem Blutspender-Kollektiv als Dreiecke, Seren aus dem BP-Kollektiv als Kreise dargestellt). Orange sind die Seren markiert, die im Westernblot, aber nicht im ELISA mit BP230-C3 reagierten, in grün diejenigen, die im Anti-BP230-C3-ELISA, aber nicht im Westernblot mit diesem Polypeptid reagierten.
3. Ergebnisse 70 Trotzdem ein Wechsel des Testsystems vorgenommen wurde, konnten weitestgehend konforme Ergebnisse erzielt werden. In 3 Seren konnten Antikörper gegen BP230-C3 nachgewiesen werden, wenn das Polypeptid im Westernblot eingesetzt wurde (orangefarbener Kreis, Abbildung 38) und nicht mit BP230-C3 im ELISA. Im Gegensatz zum Westernblot zeichnete sich der ELISA durch einen größeren Messbereich aus. 3.7 Vergleich des Anti-BP230-C3-ELISA mit dem alternativen Testsystem Der einzige zu Beginn dieser Arbeit kommerziell erhältliche BP230-ELISA war von der Firma MBL (Matritech GmbH, Freiburg). Mit Hilfe dieses Testsystems wurden die Seren aus dem BP-Kollektiv und des Blutspender-Kollektivs 1 auf anti-BP230-Antikörper untersucht. Es zeigte sich bei 31 Seren eine positive Reaktion im kommerziellen Testsystem bei einer Spezifität von 99%. 29 davon waren auch im Anti-BP230-C3-ELISA (Spezifität 97%) positiv. Die beiden Seren, in denen ausschließlich mit dem BP230-ELISA (MBL) Antikörper nachgewiesen werden konnten, zeigten nur im IFT eine Reaktion mit pTriEx-1-BP230-Voll- Länge transfizierten Zellen, -N2a und -R2 im Westernblot bzw. mit BP230-Voll-Länge und - BP230gN transfizierten Zellen, -N2, -R2, -C1 und -3 im Westernblot. 3.8 Komplettierung des Anti-BP180-NC16A-4X-ELISA (EUROIMMUN AG) Zur Bestimmung von Autoantikörpern gegen die NC16A-Domäne von BP180 in Seren von Patienten mit bullösem Pemphigoid kann der Anti-BP180-NC16A-4X-ELISA der Firma EUROIMMUN AG eingesetzt werden. Im Folgenden sollte überprüft werden, ob der zusätzliche Einsatz des Anti-BP230-C3-ELISA zu einer Steigerung der Sensitivität bei gleichbleibender Spezifität führen würde. Die Seren aus dem BP-Kollektiv wurden mit dem Anti-BP180-NC16A-4X-ELISA inkubiert, die Seren aus dem Kollektiv der Blutspender wurden nicht untersucht, denn nach Angaben des Herstellers besitzt das Testsystem eine Spezifität von 97,9% bei einer Sensitivität von 89,8%. In 44 der 49 (89,8%) Seren aus dem BP-Kollektiv konnten anti-BP180-Antikörper
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- Seite 95 und 96: 6. Literaturverzeichnis 92 Herrero-
- Seite 97 und 98: 6. Literaturverzeichnis 94 Schumann
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In 23 Seren von BP-Patienten konnten mit den drei Testsystemen anti-BP230-C3-spezifische<br />
Antikörper nachgewiesen werden. In 6 Seren erfolgte dieser nur durch Westernblot und<br />
ELISA und in 2 ausschließlich durch den ELISA. Bei 2 Seren konnten im Westernblot und im<br />
IFT, bei 2 im IFT und bei einem weiteren im Westernblot anti-BP230-Antikörper<br />
nachgewiesen werden.<br />
Die Extinktionen (450nm) im ELISA lagen mit 0,5 und 0,4 Einheiten (grüner Kreis,<br />
Abbildung 38) deutlich über dem Cut-off.<br />
positiv hinsichtlich BP230-<br />
(1) -C3 (ELISA)<br />
(2) -C3 (ELISA), -R2 (WB)<br />
(3) -C3 (WB)<br />
(4) -C3 (WB), -N2, -R2, -C1 (WB), -Voll-Länge, -gN (IFT)<br />
(5) -C3 (WB), N2 (WB), -Voll-Länge, -gN (IFT)<br />
Abbildung 38: Nachweis von Antikörpern enthalten in 49 BP-Seren und 94 Seren von<br />
Blutspendern gegen BP230-C3 im Westernblot und im ELISA (Cut-offs in rot, Seren aus dem<br />
Blutspender-Kollektiv als Dreiecke, Seren aus dem BP-Kollektiv als Kreise dargestellt).<br />
Orange sind die Seren markiert, die im Westernblot, aber nicht im ELISA mit BP230-C3<br />
reagierten, in grün diejenigen, die im Anti-BP230-C3-ELISA, aber nicht im Westernblot mit<br />
diesem Polypeptid reagierten.
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