Euroimmun Medizinische Labordiagnostika AG - Universität zu Lübeck

3. Ergebnisse 66
3.5 ELISA mit BP230-C3
3.5.1 Entwicklung eines ELISA für das Polypeptid BP230-C3
Die Verwendung des Polypeptids BP230-C3 im Westernblot führte zu einer Sensitivität von
65% gemessen am Kollektiv von BP-Patienten bei einer Spezifität von 98,9% gemessen am
Kollektiv gesunder, junger Blutspender. Die anderen Peptidvarianten wiesen geringere
Sensitivitäten bei gleicher Spezifität auf. Deshalb wurde für den ELISA zum Nachweis von
Antikörpern bei Patienten mit bullösem Pemphigoid das Polypeptid BP230-C3 ausgewählt.
Der ELISA wurde hinsichtlich Beschichtungs- und Blockierungspuffer,
Antigenkonzentrationen und Beschichtungs-Oberflächen optimiert. In einer Konzentration
von 4 µg/ml wurde das Polypeptid in einem PBS-haltigen Puffer auf einer MaxiSorp-
Oberfläche beschichtet. Die Blockierung erfolgte mit einem Tween-20-haltigen Puffer
(EUROIMMUN AG) über 12 Stunden bei 4°C. In Hinblick auf eine Kommerzialisierung des
Produkts soll auf die Herstellungsparameter nicht näher eingegangen werden.
Die Seren der 49 BP-Patienten und die des Blutspender-Kollektivs 1 (n = 94) (siehe 2.5)
wurden mit dem Anti-BP230-C3-ELISA getestet. Die Inkubation des ELISA erfolgte wie in
2.15.2 angegeben. Der Cut-off wurde auf den Mittelwert plus zwei Standardabweichungen
der gemessenen Extinktionen (450 nm ) der Seren von Blutspendern festgelegt. Die Trennung
zwischen den richtig positiven und den richtig negativen Seren war bei diesem Wert am
ehesten gegeben. Die Spezifität betrug 97%. Bei 31 von 49 Seren von Patienten mit bullösem
Pemphigoid und 3 Seren von Blutspendern konnten anti-BP230-Autoantikörper nachgewiesen
werden (Abbildung 36).