Euroimmun Medizinische Labordiagnostika AG - Universität zu Lübeck

3. Ergebnisse 61
3.4 Analyse zur Rolle von linearen Epitopen des BP230 beim BP
Die Herstellung der Inkubationsstreifen erfolgte im Anschluss an einen Westernblot (siehe
2.15.5). Es wurde eine Normierung der Polypeptid-Konzentration über die
Blutspenderreaktion vorgenommen. Pro SDS-Polyacrylamidgel wurden 10 µg Polypeptid pro
60 mm Vertiefung im Gel eingesetzt. In dieser Konzentration wiesen die Polypeptide BP230-
R2 und -C1 eine geringe Spezifität in Bezug auf die Blutspenderreaktion auf. Um diese bei
gleichbleibender Sensitivität zu erhöhen, wurde die Polypeptid-Konzentration im
Gesamtansatz gesenkt. In einer Konzentration von 1,25 µg/60 mm BP230-R2 und 2 µg/60
mm -C1 lagen eine optimale Sensitivität und Spezifität vor. In Abbildung 31 sind die
Polypeptide BP230-R1 und -R2 dargestellt, ideal in einer Konzentration von 10 µg/60 mm
und 1,25 µg/60 mm. Unter Verwendung von 10 µg/60 mm BP230-R2 wies das Polypeptid
eine geringe Spezifität auf.
Abbildung 31: Nachweis von Antikörpern gegen BP230-R1 und BP230-R2 (10 µg/60 mm und
1,25 µg/60 mm) in 19 Seren, positiv auf epidermaler Basalmembran (epi. BM) und in 10
Seren von Blutspendern.
Die Seren des BP-Kollektivs und des Blutspender-Kollektivs 1 (siehe 2.5) wurden
hinsichtlich ihrer Autoantikörperreaktion gegen BP230 untersucht. Durch die
Miniaturisierung des Testsystems (siehe 2.15.5.1) konnten diesbezüglich mit geringem
Inkubationsaufwand umfangreiche Antikörperprofile erfasst werden. Die Auswertung der
densitometrisch quantifizierten Bandenintensitäten erfolgte mittels der