Euroimmun Medizinische Labordiagnostika AG - Universität zu Lübeck
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3. Ergebnisse 56<br />
nachgewiesen werden. Weitere Korrekturmaßnahmen wurden nicht vorgenommen, denn die<br />
Polypeptide BP230-N, -R und -C sollten im Rahmen des Epitopmappings von BP230 nicht<br />
eingesetzt werden.<br />
3.3.6 Biochemische Aufreinigung der Proteine<br />
Für die Kartierung der durch BP-spezifische Autoantikörper erkannten Epitope auf BP230<br />
wurden die Polypeptide im Batchverfahren (siehe 2.14.1) aufgereinigt. Der Aufschluss der<br />
Zellen erfolgte mechanisch im Hochdruck-Homogenisator (siehe 2.14.1.1). Unter<br />
denaturierenden Bedingungen wurden die Polypeptide aus den Einschlusskörperchen<br />
extrahiert (siehe 2.14.1.2). Die Aufreinigung erfolgte über IMAC (siehe 2.16.1.3) und<br />
Kationenaustausch-Chromatographie (siehe 2.14.1.4), wodurch negativ geladene Moleküle<br />
wie LPS herausgefiltert wurden und so unspezifische Reaktionen gegen die Wirtszelle<br />
vermieden wurden. Die Peptidkonzentrationen wurden durch den BCA-Test (siehe 2.14.1.5)<br />
bestimmt (Tabelle 6).<br />
Tabelle 6: Konzentrationen der rekombinanten Polypeptide.<br />
Bezeichnung des<br />
Endausbeute aus 8 Liter<br />
Endkonzentration (mg/ml)<br />
Proteins<br />
Kulturvolumen (mg)<br />
BP230-N1 0,52 0,884<br />
BP230-N2 0,19 0,095<br />
BP230-N2a 0,49 9,8<br />
BP230-N2b 0,16 2,4<br />
BP230-N2c 1,42 78,1<br />
BP230-R1 0,4 4<br />
BP230-R2 0,38 3,04<br />
BP230-C1 1,25 7,5<br />
BP230-C2 0,63 15,12<br />
BP230-C3 0,74 14,8
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