Euroimmun Medizinische Labordiagnostika AG - Universität zu Lübeck

3. Ergebnisse 55
eingesetzt. Die Integration in das linearisierte Plasmid erfolgte über Esp3I und XhoI (siehe
2.13.5).
Beide Plasmide wurden in Zellen des Stammes E. coli RosettaBlue(DE3)pLacI (siehe 2.10)
transformiert. Bei der funktionellen Überprüfung der Konstrukte im Westernblot (siehe 2.15.5)
konnte BP230-C1 der erwarteten molekularen Masse von 40 kD identifiziert werden
(Abbildung 28).
Abbildung 28: Immunbiochemische Färbung von BP230-C1. Die Inkubation erfolgte mit
einem monoklonalen anti-His-Antikörper. In Spur 1 bis 5 konnte ein deutliches Signal auf der
Höhe von 40 kD identifiziert werden.
Die Aminosäuresequenz des Fragments stimmte mit dem Datenbankeintrag (M69225)
überein. Die bakterielle Expression von pET24d-N-BP230-C[+23] führte zu keinem
funktionellen Polypeptid. In der Sequenzierung (siehe 2.13.9) konnte eine Leserastermutation
an Position 6037 nt sowie ein Aminosäureaustausch von Prolin zu Leucin an Position 6426 nt