Euroimmun Medizinische Labordiagnostika AG - Universität zu Lübeck
Euroimmun Medizinische Labordiagnostika AG - Universität zu Lübeck
Euroimmun Medizinische Labordiagnostika AG - Universität zu Lübeck
Erfolgreiche ePaper selbst erstellen
Machen Sie aus Ihren PDF Publikationen ein blätterbares Flipbook mit unserer einzigartigen Google optimierten e-Paper Software.
2. Material und Methoden 36<br />
2.15.4 Coomassie-Färbung<br />
Die Coomassie-Färbung beruht auf der Bindung des Farbstoffs Coomassie Brilliant Blue R<br />
250 an aromatische und basische Aminosäurereste.<br />
Das SDS-Polyacrylamidgel (siehe 2.15.3) wird 30 Minuten in Coomassie-Lösung (siehe 2.2)<br />
und anschließend in Coomassie-Entfärbelösung (siehe 2.2) inkubiert. Dadurch treten blaue<br />
Proteinbanden hervor.<br />
2.15.5 Proteintransfer auf eine Membran (Westernblot)<br />
Die im SDS-Polyacrylamidgel (siehe 2.14.3) elektrophoretisch aufgetrennten Proteine werden<br />
auf eine Trägermembran (Nitrozellulose, siehe 2.12) transferiert (Renart et al., 1979). Der<br />
Proteintransfer erfolgt in einer Tank-Blot-Kammer (Hoefer Inc.) mit NuPage Transfer Buffer<br />
(Invitrogen, siehe 2.1) für 60 Minuten bei 400 mA.<br />
2.15.5.1 Miniaturisierung des Westernblot<br />
Zur Herstellung der Inkubationsstreifen wird ein Westernblot (siehe 2.15.5) durchgeführt.<br />
Durch Ponceau-S-Färbung (siehe 2.15.6.1) werden die das Zielprotein enthaltenen<br />
Membranregionen angefärbt, mit flankierenden Bereichen minimaler Länge ausgeschnitten<br />
und untereinander auf einem Plastikträger fixiert. Dieser wird in 2 mm breite<br />
Inkubationsstreifen unterteilt (Abbildung 17).
Change language