Euroimmun Medizinische Labordiagnostika AG - Universität zu Lübeck

2. Material und Methoden 35
Probe ermittelt werden. Anschließend werden diese Daten für einen statistischen Vergleich
mit einer Sequenzdatenbank benutzt, die durch einen tryptischen in silico Verdau erzeugt
wurde. Eine molekulare Identifikation gilt als signifikant, wenn ein Schwellenwert für die
Übereinstimmung des gemessenen mit dem theoretischen Massenprofil überschritten wird
(Alberts et al., 2004).
2.15.2 Enzyme-linked-immunosorbent assay (ELISA)
1971 ist der ELISA erstmals von Avrameas und Guilbert sowie von Engvall und Perlman
beschrieben worden und kann zum Nachweis von Antikörpern in einer Probe dienen.
Eine 96-well Mikrotiter-Platte (siehe 2.12) wird mit 100 µl einer definierten
Antigenverdünnung in ELISA-Beschichtungspuffer (EUROIMMUN AG) für 12 Stunden bei
4°C inkubiert. Anschließend wird die Platte mit 200 µl ELISA-Blockierungspuffer je Napf
(EUROIMMUN AG) für 2 Stunden blockiert. Die Durchführung des ELISA erfolgt mit
Reagenzien der EUROIMMUN AG gemäß einem Standard-Protokoll.
2.15.3 Denaturierende SDS-Polyacrylamid-Gelelektrophorese (SDS-PAGE)
Bei einer SDS-PAGE werden Proteine nach ihrer Masse und unabhängig von ihrer Ladung
aufgetrennt (Ornstein et al., 1964).
Die Proben werden mit NuPage LDS Sample Buffer (siehe 2.1) versetzt und 10 Minuten bei
70°C inkubiert. Für die Durchführung einer SDS-Page wird die Apparatur von Invitrogen
XCell Sure Lock NOVEX (siehe 2.12) eingesetzt. Es werden 4-12% Bis-Tris-Gele (1,0 mm x
2D well) im MES-Puffersystem von Invitrogen (siehe 2.12) nach Angaben des Herstellers
verwendet. Die apparenten molekularen Massen der Proteine lassen sich relativ zu einem
Protein-Marker ableiten.