Euroimmun Medizinische Labordiagnostika AG - Universität zu Lübeck
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2. Material und Methoden 19 2.6 Zellkulturmedien für die Zellkultur DMEM High Glucose 4,5 g/l with L-Glucosamine – PAA Laboratories GmbH, Pasching für die Testexpression DMEM High Glucose 4,5 g/l with L-Glucosamine – PAA Laboratories GmbH, Pasching + 10% FKS + 1% Penicillin/Streptomycin/Ciprofloxacin + 1% Amphotericin B 2.7 Restriktionsenzyme Restriktionsenzyme und Enzympuffer wurden von der Firma Fermentas GmbH (St. Leon-Rot) nach Herstellerangaben verwendet. 2.8 cDNAs, DNA DKFZp686C04183Q (Genbankzugriffsnummer BX475892) - imaGenes IRAKp961A12140Q (Genbankzugriffsnummer BC065536) - imaGenes HEK293 (genomische DNA) - ATCC ® (Nr. CRL-1573) 2.9 Vektoren pET24d-N - Novagen pET24d- Novagen pTriEx-1- Novagen Nähere Informationen können dem „System Manual“ (Novagen) entnommen werden.
2. Material und Methoden 20 2.10 Transformationsstamm (E. coli) Die Zellen des Stammes E. coli Rosetta Blue(DE3)pLacI wurden als kompetente Zellen von der Firma Novagen (Katalog-Nummer 71060) bezogen. 2.11 Zelllinie HEK293 (Graham et al., 1977) - ATCC ® (Nr. CRL-1573) 2.12 Geräte und Verbrauchsmaterialien Geräte Auf eine Zusammenstellung der verwendeten Geräte wird verzichtet, da an den entsprechenden Stellen die physikalischen Parameter der Bearbeitungsmethode beschrieben werden. So ist es möglich, die Experimente unabhängig vom Gerätetyp nachzuvollziehen. Verbrauchsmaterialien Lab-Tek II Culture Slide System – Nunc GmbH & Co. KG, Wiesbaden NiNTA-Superflow - Qiagen GmbH, Hilden Nitrozellulosemembran - EUROIMMUN AG, Lübeck NuPage Novex 4-12% Bis-Tris Gel 1,0 mm, 2D well - Invitrogen GmbH, Karlsruhe Nunc-Immo LockWell Module MaxiSorp - GmbH & Co. KG, Wiesbaden Nylonmembran – EUROIMMUN AG, Lübeck PE-Filter - Macherey-Nagel GmbH & Co. KG, Düren SPE-Säule - Macherey-Nagel GmbH & Co. KG, Düren Sonstiges Mark12 Unstained Standard – Invitrogen GmbH, Karlsruhe MassRuler DNA Ladder, Mix – Fermentas GmbH, St. Leon-Rot MultiMark Multi-Colored Standard – Invitrogen GmbH, Karlsruhe 6x MassRuler Loading Dye Solution (Probenpuffer) – Fermentas GmbH, St. Leon-Rot Novex Sharp Pre-stained – Invitrogen GmbH, Karlsruhe
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2. Material und Methoden 19<br />
2.6 Zellkulturmedien<br />
für die Zellkultur<br />
DMEM High Glucose 4,5 g/l with L-Glucosamine – PAA Laboratories GmbH, Pasching<br />
für die Testexpression<br />
DMEM High Glucose 4,5 g/l with L-Glucosamine – PAA Laboratories GmbH, Pasching<br />
+ 10% FKS<br />
+ 1% Penicillin/Streptomycin/Ciprofloxacin<br />
+ 1% Amphotericin B<br />
2.7 Restriktionsenzyme<br />
Restriktionsenzyme und Enzympuffer wurden von der Firma Fermentas GmbH (St. Leon-Rot)<br />
nach Herstellerangaben verwendet.<br />
2.8 cDNAs, DNA<br />
DKFZp686C04183Q (Genbank<strong>zu</strong>griffsnummer BX475892) - imaGenes<br />
IRAKp961A12140Q (Genbank<strong>zu</strong>griffsnummer BC065536) - imaGenes<br />
HEK293 (genomische DNA) - ATCC ® (Nr. CRL-1573)<br />
2.9 Vektoren<br />
pET24d-N - Novagen<br />
pET24d- Novagen<br />
pTriEx-1- Novagen<br />
Nähere Informationen können dem „System Manual“ (Novagen) entnommen werden.
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