Identifizierung und Charakterisierung von neuen Genen für die ...

Abbildung 75: In der rechten Abbildung ist zu
erkennen, dass nicht alle Blutgefäße mit lacZ-
Färbung blau wurden. Die ungefärbten sind
normalerweise gar nicht zu erkennen, ausgenommen
es befinden sich noch ausreichend rote Blutkörperchen
in ihnen, die den Verlauf des Gefäßes
nachzeichnen.
Der Übergang zwischen Arterien und Venen
kann über zwei Wege erfolgen, ein dazwischen
geschaltetes Kapillarbett oder eine Anastomose,
eine Art Kurzschlussverbindung, deren Durchfluss
reguliert werden kann, um Blutdruck und
Gewebeperfusion zu regulieren, so wie wahrscheinlich
rechts zu sehen. Dabei wird später
noch gezeigt werden, dass die TRIM46-Expression
auf Arterien beschränkt ist.
Abbildung 76: Die Zahl der mit lacZ angefärbten
Blutgefäße im Gehirn nimmt mit dem Alter ab.
Bei einige Monate alten Tieren sind kaum noch
welche zu sehen, siehe Abbildung rechts mit
einem adulten Gehirn von homozygoter Trim46-
KO-Maus. Keine Blutgefäße mehr angefärbt (nur
solche mit roten Erythrozyten erkennbar, roter
Pfeil), wobei die Färbung grundsätzlich
funktioniert hat, wie an der angefärbten Hirnstruktur
(Hippocampus, blauer Pfeil) zu sehen
ist. Dies deutet auf eine selektive zeitlich begrenzte
Expression von TRIM46 während der
Entwicklung hin. Offenbar wird das Gen für ausgewachsene
Gefäße nicht mehr benötigt. Interessant
wäre die Frage nach einer möglichen
Induktion bei erneuter Angiogenese, etwa bei der
Wundheilung oder dem Tumorwachstum.
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Zusammenfassung des Vergleiches der drei Färbemethoden im Whole Mount:
Die drei unterschiedlichen Färbemethoden, Immunfärbungen gegen das TRIM46-Protein sowie in-situ
Sonden im Wildtyp und lacZ-Färbungen im substituierten homozygoten KO zeigen im whole-mountpräparierten
Gehirn eine Übereinstimmung der Expression in Blutgefäßen und im Gehirn. Die lacZ-
Färbung macht weiterhin deutlich, dass nicht alle Gefäße gleichermaßen gefärbt werden und mit
fortschreitendem Lebensalter der Tiere die Expression zurück geht und zumindest in den Blutgefäßen
ganz verschwindet.
Die drei unterschiedlichen Färbemethoden zeigten Unterschiede in der Deutlichkeit der Färbungen,
insbesondere hinsichtlich des Signal/Rauschverhältnisses, also der Intensität von Hintergrundfärbung. Als
besonders deutlich zeichneten sich die lacZ-Färbungen aus, weswegen diesen im Weiteren der größte
Darstellungsraum gewidmet wird.
Der Konsistenz wegen ist es aber positiv, dass die anderen beiden Methoden, in-situ-Hybridisierung und
Immunfärbung, keine widersprüchlichen Resultate lieferten, da nur mit denen im Wildtyp gefärbt werden
konnte, während lacZ-Färbung nur bei Vorliegen des im KO substituierten lacZ-Gens möglich ist, was bei
homozygoten KOs und heterozygoten der Fall wäre.
Folgerichtig stimmt die Expression im Wildtyp mit der im KO überein, was nicht selbstverständlich sein
müsste, wenn beispielsweise regulatorische Elemente, Enhancer, Silencer, etc. in Introns des Gens mit
ausgeschaltet worden wären.
lacZ
lacZ