Identifizierung und Charakterisierung von neuen Genen für die ...

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Resultate der GST-Pulldown-Essays von 6 Klonen des Yeast-Two-Hybrid-Screens:
Fhl2-LIMdomain
gene
Y16
+
Ferritin heavy
chain
Y101
+
SANT MYB
DNA binding
domain Y37
+/-
MAP2K4
protein kinase
Y142
-
Unknown
Riken clone
Y18
-
Die rekombinant exprimierten Proteine von Fhl2 und Ferritin Heavy Chain
zeigten eine eindeutige Interaktion mit TRIM46 im Gegensatz zur Kontrolle.
Bei dem Hefeklon Y37 mit der „SANT MYB DNA“-Bindedomäne war
das Ergebnis nicht eindeutig interpretierbar und 3 der getesteten 6 Klone wiesen
keinen signifikanten Unterschied zur Kontrolle auf, so dass für diese die vom
Yeast-Two-Hybrid-Screen vorausgesagte Interaktion nicht bestätigt werden
konnte.
Es ist zu erwarten, dass die Analyse der restlichen Hefeklone mittels GST-
Pulldown-Essay weitere vorhergesagte Interaktionen bestätigen würde, was
somit Gegenstand zukünftiger Arbeiten sein könnte.
Unknown
Riken clone
Y23
-
Abbildung 61: Auf der jeweils linken Spur wurde diejenige Proteinfraktion auf ein SDS-PAGE-Gel aufgetragen, die
zuvor mit TRIM46-GST interagiert hatte, auf der rechten Spur diejenige Kontrolle, die nur mit GST alleine inkubiert
wurde.
DG
CA1
CA3
CA2
Abbildung 63: Expression von Ferritin Heavy Chain,
dargestellt mit Immunfärbung in Rot, überlappt mit der
Expression von TRIM46 im Hippocampus des Gehirns
(Vergleiche mit Seite 115). Gyrus dentatus (DG),
Regionen des Hippocampus CA1, CA2, CA3.
Abbildung 62: Neben
dem GST-Pulldown-Essay
ist überlappende Expression
mit TRIM46 ein
weiteres Kriterium zur
Überprüfung auf eine
sinnvolle Protein-Interaktion.
In dem Bild ist das
Expressionsmuster von
Fhl2 im Mausembryo des
Stadiums E8 zu sehen,
was in der Aorta mit
TRIM46 überlappen würde
(Chu, Ruiz-Lozano et
al. 2000).