Identifizierung und Charakterisierung von neuen Genen für die ...

cDNA4-GFP in NIH3T3
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48 h 96 h 120 h
148 h 196 h
cDNA12-GFP in NIH3T3
48 h 96 h 120 h
148 h 196 h
Abbildung 60: Zeitreihe der Transfektion von cDNA4-GFP (obere Reihe) und cDNA12-GFP (untere Reihe) in
NIH3T3-Zellen. Jede Spalte entspricht von links nach rechts einem der folgenden Zeitpunkte: 48, 96, 120, 148, 196
h. Es ist zu erkennen, dass das Fusionsprotein von TRIM46 in der Proteinisoform von cDNA4 zu allen Zeitpunkten
vom Zellkern ausgeschlossen bleibt. Umgekehrt ist die Proteinisoform von cDNA12 schon früher als bei den
Neuro2a-Zellen im Zellkern angereichert, wobei sich dieses mit der Zeit noch weiter verstärkt.
Insgesamt hat die Transfektion der Konstrukte von cDNA4-GFP und cDNA12-GFP in den drei
verschiedenen Zelllinien HeLa, Neuro2a und NIH3T3 konsistente Ergebnisse gebracht. Dabei wurde das
Proteinprodukt von cDNA4 konsequent zu allen Zeiten von der Lokalisation im Zellkern ausgeschlossen,
während sich das Proteinprodukt von cDNA12 bei HeLa-Zellen gleichverteilte zwischen Zellkern und
Cytoplasma, bei den Neuro2a-Zellen mit der Zeit nach 148 h deutlich sichtbar werdend im Zellkern
anreicherte und bei NIH3T3-Zellen dieses noch früher bereits nach 48 h passierte. Möglicherweise haben
die verschiedenen Zelllinien unterschiedliche Geschwindigkeiten ihrer Kerntransportmaschinerie und
vielleicht auch unterschiedliche Selektivitäten.
Um zu Überprüfen, ob Phosphorylierung durch zelluläre Kinasen (Harbers, Nomura et al. 2001) wie
Protein-Kinase C (PKC) einen Einfluss auf die Lokalisierung des TRIM46-Gens hat, wurden die oben
dargestellten Zeitreihen-Experimente mit Zugabe von Staurosporin bzw. TPA (12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate)
durchgeführt, die jeweils den PKC-Signalpfad blocken bzw. aktivieren sollten. Dabei
zeigten sich keine Unterschiede abgesehen von zunehmender Zytotoxizität aufgrund der zugesetzten
Chemikalien, die jedoch auf TRIM46 transfizierte Zellen genauso wirkte wie auf Kontrollzellen. Die
negativen Ergebnisse sind hier nicht weiter abgebildet.